免疫室作业指导书.doc

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1、免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01~52第A版编制：审核：批准：生效日期：2012年8月5日湘西州人民医院检验科目录序号主题内容代号页号1血清乙型肝炎病毒表面抗原检测ABCD-3-MY-0142血清乙型肝炎病毒表面抗体检测ABCD-3-MY-0273血清乙型肝炎病毒e抗原检测ABCD-3-MY-03104血清乙型肝炎病毒e抗体检测ABCD-3-MY-04135血清乙型肝炎病毒核心抗体检测ABCD-3-MY-05166甲型肝炎病毒--IgM检测ABCD-3-MY-06197血清丙型肝炎病毒抗体检测ABCD-3-MY-07228人类免疫缺陷

2、病毒抗体检测ABCD-3-MY-08259梅毒螺旋体特异性抗体检测ABCD-3-MY-092810免疫球蛋白A（IgA）测定ABCD-3-MY-103011免疫球蛋白M（IgM）测定ABCD-3-MY-113312免疫球蛋白G（IgG）测定ABCD-3-MY-123613补体C3测定（免疫比浊法）ABCD-3-MY-133914补体C4测定（免疫比浊法）ABCD-3-MY-144215类风湿因子（RF）测定ABCD-3-MY-154516抗链球菌溶血素O（ASO）测定ABCD-3-MY-164817C反应蛋白（CRP）测定ABCD-3-MY-17511

3、8支原体肺炎血清学试验ABCD-3-MY-185419血(尿)b2-MG微球蛋白定量测定ABCD-3-MY-195620肌红蛋白定量测定ABCD-3-MY-206021微量加样器的质控ABCD-3-MY-216422酶标分析仪操作维护规程ABCD-3-MY-226723全自动酶标洗板机操作维护规程ABCD-3-MY-236924特种蛋白测定仪操作维护规程ABCD-3-MY-247025免疫学室内质量控制操作程序ABCD-3-MY-257526免疫学检验室间质量评价（EQA）ABCD-3-MY-2680血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1.原理在

4、微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用双抗体夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。1.标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。2.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。3.标本运输：密封，室温运输。4.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。5.试剂6.1试剂名称：乙型肝炎病

5、毒表面抗原诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：珠海丽珠试剂股份有限公司。6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，样品稀释液，底物缓冲液，底物液，终止液，封板膜，封口袋，使用说明书。6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期12个月。6.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：BioTek7.3仪器型号：Elx8007.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以封口袋封存。8.2

6、配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。8.3编号：将固微孔条定于支架，按序编号。8.4加样：加入25ul样品稀释液于反应孔中。每次实验设阴性对照3孔，阳性对照2孔，加阴、阳性对照各75ul；设空白对照1孔，不加样。其余各孔加入待测样品75ul，振荡混匀。8.5温育：置37℃温育60分钟。8.6加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50ul，振荡混匀。8.7温育：置37℃温育30分钟。8.1洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗涤液注满各孔，静置30～60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后

7、拍干。8.2显色：每孔加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，振荡混匀，置37℃温育30分钟。8.10终止：每孔加终止液50ml，混匀。8.11读值：用酶标仪读值，在单波长450nm（须以空白对照调零）或双波长450nm/630nm下读取各孔A值。1.结果判断与分析9.1临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照平均A值+0.09，阴性对照A值应≤0.1，试剂空白A值应＜0.05。9.2结果判定：样品A值≥临界值，说明该样本初始反应阳性，应进行复检。样品A值＜临界值，说明该样本无反应性。2.质量控制每次试验用含0.2IU/ml和2IU/mlHBs

8、Ag的质控血清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂