细菌总数检测.doc

《细菌总数检测.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、细菌总数检测1定义食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（ml）检样中形成的微生物菌落总数。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1恒温培养箱：36°C±1°C,3O°C±1°C。2.2冰箱：2°C〜5°C。2.3恒温水浴箱：46°C±1°C。2.4天平：感量为0.lgo2.5均质器。2.6振荡器。2.7无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。2.8无菌锥形瓶:容量250ml、500mlo2.9无菌培养皿：直径90mmo

2、2.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.11放大镜或/和菌落计数器。3培养基和试剂3.1平板计数琼脂培养基：见附录中1。3.2磷酸盐缓冲液：见附录中2。3.3无菌生理盐水：见附录中3。4操作方法4.1试验前准备4.1.1将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量，避免操作中出入操作间。4.1.2开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置30mino4.1.3操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好无菌衣、

3、相、口罩、手套等。4.1.4操作前先用乙醇棉球擦手、工作台而，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌剪刀或银了将供试品启封。4.2样品稀释液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备样品稀释液。样品稀释液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45°Co样品稀释液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。4.2.1固体和半固体样品称取25g样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min〜10000r/min均质Imin〜2min,或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均

4、质器拍打1min~2min,制成1:10的样品匀液。4.2.2液体样品以无菌吸管吸取25ml样品置盛寺*225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。4.3菌落总数测定4.3.1用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。4.3.2按4.3.1操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1ml

5、无菌吸管或吸头。4.3.3根据对样品污染状况的估计，选择2个〜3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。4.3.4及时将15ml〜20ml冷却至46°C的平板计数琼脂培养基（可放置于46°C±1°C恒温水浴箱中保温）倾注平.皿，并转动平.皿使其混合均匀。4.4培养4.4.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36°C±1°C培养48h±2h。水产品3O°C±1°C培养72h±3ho4.4.2如果样品中可能含有在

6、琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表而覆盖一薄层琼脂培养基（约4ml），凝固后翻转平板，按4.4.1条件进行培养。4.5菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits,CFU）表示。4.5.1选取菌落数在30CFU-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可-记录为多不可-计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。4.5.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采

7、用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。4.5.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。4.6结果与报告4.6.1菌落总数的计算方法4.6.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（ml）样品中菌落总数结果。4.6.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按下公式计算:YCN=—白―（%+0.1〃J次式中

8、：N——样品中菌落数；EC一平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；⑴——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；m——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d一稀释因了（