病毒滴度测定.ppt

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1、病毒滴度的测定原理(重点)：适当稀释的病毒悬液与长成单层的宿主细胞混合，在细胞上覆以营养琼脂培养基等固体或半固体介质，由于琼脂的限制，病毒只能感染并破坏临近的细胞，造成细胞溶解而形成空斑，每个空斑由一个病毒颗粒造成，计算空斑数量再乘以稀释倍数即可得知原来的病毒感染单位的浓度。空斑形成单位法测定病毒滴度空斑形成单位（PlaqueFormingUnits,PFUs)空斑显现原理(掌握)：空斑形成后，经中性红活细胞染色，活细胞显示红色，而空斑区细胞不着色，形成不染色区域。空斑形成单位法测定病毒滴度Procedures适用条件(熟悉)：凡是能在细胞中产生细胞病

2、变效应(CPE)的病毒都可以采用空斑形成法测定病毒滴度。空斑形成单位法测定病毒滴度中性红(掌握)(熟悉)(了解)(了解)空斑形成单位试验技术举例p51-52防止琼脂凝固；Hanks液？双抗？5%CO2空斑形成单位的计算(重点)(掌握)(熟悉)CCID50ID50LD50(重点)(熟悉)5%CO2培养箱(熟悉)CCID50TCID50(熟悉)病毒液CPE孔数无CPE累计出现CPE孔稀释度孔数CPE孔数无CPE孔数所占的%10-180270100（27/27）10-280190100（19/19）10-37111191.6（11/12）10-4354640

3、（4/10）10-5171130.7（1/14）10-6080210（0/21）Reed-Muench法计算CCID50CPE(阳性)孔累计数由下向上累积无CPE(阴性)孔累计数由上向下累积(难点、重点)CCID50(难点、重点)CalculationofTCID50UseofReed&Muenchmethod(if50ulofvirusdilutionisaddedtoeachwell)Karber法计算CCID50病毒液稀释度出现CPE孔的比率10-18/8=110-28/8=110-37/8=0.87510-43/8=0.37510-51/8=0

4、.12510-60/8=0(难点、重点)lgCCID50=L+d(s-0.5)L:病毒的最低稀释倍数的对数L=lg10-1=-1d：稀释系数，即组距d=lg10-1=-1S：CPE(阳性)孔比率总和lgCCID50=(-1)+(-1)×(3.375-0.5)=-3.875CCID50=10-3.875/0.1mlID50和LD50的计算与CCID50完全相同(掌握)lgCCID50=L+d(s-0.5)ID50计算，S：感染比率总和；LD50计算，S：死亡比率总和；(掌握)血凝试验的基本原理(掌握)红细胞凝集现象(血凝现象)红细胞凝集抑制(红细胞与抗体

5、结合，失去血凝)血凝滴度/血凝单位血凝试验测定病毒滴度干扰滴定测定病毒滴度小结主要介绍空斑形成单位法、50%终点法、血凝试验和干扰滴定法测定病毒滴度的原理及其方法；重点要掌握空斑形成单位法、50%终点法测定病毒滴度的原理及其滴度的计算；熟悉：空斑形成单位法、50%终点法、血凝试验和干扰滴定法测定病毒滴度的具体方法；