香菇多糖对烟草花叶病毒抑制作用探究

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1、香菇多糖对烟草花叶病毒抑制作用探究　　摘要利用有机溶剂浸提法分离香菇多糖，研究了多糖对烟草花叶病毒（TMV）的体外钝化以及对烟草抗性的诱导作用。结果表明：体外钝化与多糖浓度呈正相关，当处理浓度为5.00mg/mL时，枯斑抑制率为48%。用1.00mg/mL多糖喷施烟草叶片可以产生较好的诱导抗性，枯斑抑制率为53%。进一步研究表明，多糖诱导抗性与过氧化物酶（POD）和多酚氧化酶（PPO）活性增加有关。关键词香菇多糖；烟草花叶病毒；抑制作用中图分类号S435.72；S481+.9文献标识码A文章编号1007-5739（2013）24-0147-01烟草花叶病是农业生产中一类重要

2、病害，对烟草花叶病的防治是植物病害防治研究的热点与难点。有报道指出毛头鬼伞多糖[1]、平菇多糖[2]和云芝多糖[3]等多种真菌多糖对烟草花叶病毒（TMV）具有钝化和诱导抗性作用。香菇多糖是从香菇子实体中提取的水溶性多糖，目前该多糖的研究主要集中在其抗肿瘤、抗病毒和免疫调节功能上，对其抗植物病毒活性研究较少[4]。有研究显示香菇水浸液对TMV具有抑制作用[5]。本文以香菇多糖处理心叶烟（N.glutinosa）和普通烟（N.tabacum），研究其对TMV的抑制作用。51材料与方法1.1试验材料TMV毒源由本实验室保存；测定枯斑寄主为心叶烟（N.glutionosa），系统侵

3、染寄主为普通烟（N.tabacumvar.K326）。干香菇购于超市。1.2试验方法1.2.1香菇多糖分离纯化[6]。三氯乙酸浸提法提取粗糖：10g香菇干粉，200mL三氯乙酸（0.2mol/L），4℃过夜。滤液蒸发至100mL，加1×甲醇混匀，过夜。离心取上清，加2×甲醇，过夜，离心弃上清，干燥。多糖纯化：粗糖水溶液（W/V=50∶1）加1×CTAB缓冲液（0.15mol/L），离心弃上清。乙酸（2mol/L）溶解沉淀，离心取上清，加1×甲醇，过夜。离心，甲醇漂洗沉淀，冻干。1.2.2多糖对TMV的钝化作用。多糖稀释液（0.25、0.50、1.00、5.00mg/mL）和

4、等体积的TMV提取液混匀后，半叶法接种到心叶烟上[2]，3d后统计枯斑数。计算枯斑抑制率，计算公式如下：枯斑抑制率（%）=■×1001.2.3多糖诱导烟草抗性。选取八至十叶期的烟草幼苗，喷不同浓度多糖稀释液（0.25、0.50、1.00、5.00mg/mL），对照组喷清水。5、6和7位叶片表面喷处理液。4d后选择2、3和4位叶片进行TMV摩擦接种。接种65d后统计枯斑数量，计算枯斑抑制率。1.2.4酶活力测定。选择八至十叶期烟草幼苗，喷施1mg/mL多糖稀释液，对照组为清水。诱导后第0、1、2、3、4、5、6、7天取同一叶位叶片测定其POD和PPO活性。测定方法参考赵世杰等

5、的方法[7]。2结果与分析2.1多糖对TMV的钝化作用多糖稀释液对TMV均有钝化作用。如图1所示，多糖处理后的TMV接种烟草叶片产生的枯斑量明显小于对照，当多糖浓度为5.00mg/mL时，枯斑数目与对照之间表现出极大差异，枯斑抑制率达48%。说明多糖对TMV具有钝化作用，而且钝化作用随着浓度升高而升高。2.2多糖诱导处理对TMV抑制的影响如图2所示，用0.25、0.50、1.00、5.00mg/mL多糖诱导后，烟草均表现出TMV抗性，枯斑抑制率分别为23%、29%、53%和39%。其中稀释浓度为1.00mg/mL时，对TMV的抗性诱导效果最好。2.3多糖诱导对POD和PPO

6、活性的影响用1.00mg/mL香菇多糖喷施烟草后，其叶片中POD和PPO活性变化趋势基本一致，呈先上升再缓降的趋势。如图3所示，诱导3d后叶片中POD和PPO活性明显增高，第5天其活性达到顶峰，为对照的3.8和5.4倍。53结论从自然界分离新的抗病毒成分是植物病毒病防治工作的研究热点[8]。本文研究了香菇多糖对TMV的钝化作用，发现其钝化作用随处理浓度的升高而增强。虽然高浓度处理可以取得明显的抑制效果，但是低浓度下对TMV钝化作用不明显，因此该多糖不适于大范围病毒病的治疗。研究发现在1.00mg/mL诱导浓度下香菇多糖对TMV的有明显诱导抗性。POD和PPO是植物体内广泛存

7、在防御酶类，酶活的改变与抗病能力密切相关，而香菇多糖喷施烟草能够诱导叶片组织POD和PPO活性的提高。因此，推测香菇多糖诱导烟草对TMV的抗性与这2种酶的活性提高有关。4参考文献[1]吴艳兵，谢荔岩，谢联辉，等.毛头鬼伞多糖抗烟草花叶病毒（TMV）活性研究初报[J].中国农学通报，2007，23（5）：338-341.[2]张超，操海群，陈莉，等.食用菌多糖对植物病毒抑制作用的初步研究[J].安徽农业大学学报，2005，32（1）：15-18.[3]沈小英，牛小义，段军娜.多糖对烟草花叶病毒（TMV）的抑制作用研究