GB 28404-2012 食品安全国家标准 保健食品中α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定

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1、中华人民共和国国家标准GB28404—2012食品安全国家标准保健食品中α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定2012-05-17发布2012-07-17实施中华人民共和国卫生部发布GB28404—2012食品安全国家标准保健食品中α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定1范围本标准规定了保健食品中α-亚麻酸、二十碳五烯酸（简称EPA，下同）、二十二碳五烯酸（简称DPA，下同）和二十二碳六烯酸（简称DHA，下同）的气相色谱测定方法。本标准适用于保健品食品中α-亚麻酸

2、、EPA、DPA、DHA的测定，不适用于以脂肪酸乙酯为有效成分的保健食品中α-亚麻酸、EPA、DPA、DHA的测定。2原理试样经酸水解后提取脂肪，其中α-亚麻酸、二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳五烯酸（DPA）、二十二碳六烯酸（DHA）经酯交换生成甲酯后，通过气相色谱分离检测，以保留时间定性，外标法定量。3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1氢氧化钾（KOH）。3.1.2盐酸（HCl）。3.1.3无水乙醚（C2H5OC2H5）。3.1.4乙

3、醇（CH3CH2OH）：体积分数≥95％。3.1.5石油醚：沸程30℃～60℃。3.1.6正己烷（CH3(CH2)4CH3）：色谱纯。3.1.7甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.8无水硫酸钠（Na2SO4）。3.2试剂配制氢氧化钾甲醇溶液（0.5mol/L）：称取2.8g氢氧化钾，用甲醇溶解并定容至100mL，混匀。3.3标准品3.3.1α-亚麻酸甲酯(C19H32O2)：纯度≥99.0％。3.3.2EPA甲酯(C21H32O2)：纯度≥98.5％。3.3.3DPA甲酯(C23H36O2)：纯度≥98.0％。

4、3.3.4DHA甲酯(C23H34O2)：纯度≥98.5％。3.4标准溶液的配制1GB28404—20123.4.1单个脂肪酸甲酯标准储备液(4.0mg/mL)：称取100.0mgα-亚麻酸甲酯、EPA甲酯、DPA甲酯、DHA甲酯标准物质于25.0mL容量瓶中，分别用正己烷溶解并定容至刻度，摇匀。此溶液应贮存于-18℃冰箱中。3.4.2脂肪酸甲酯混合标准中间液（1.0mg/mL）：分别吸取脂肪酸甲酯标准储备液2.50mL于10.0mL容量瓶中，摇匀，亦为标准曲线最高浓度，临用时配制。3.4.3脂肪酸甲酯标准工作

5、液：分别吸取脂肪酸甲酯中间液0.40mL、0.80mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL于10.0mL容量瓶中，用正己烷定容，此浓度即为0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL的标准工作液，临用时配制。4仪器与设备4.1气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID）。4.2天平：感量为1mg和0.1mg。4.3旋转蒸发仪。4.4离心机：转速≥4000r/min。4.5涡旋混合器。4.6恒温水浴锅。5分析步骤5.1试样制备5.1.1试样处理5.1.1.

6、1固体试样称取已粉碎混合均匀的待测试样0.5g～2g（精确到0.001g）（含待测组分约5mg/g～10mg/g）加入50mL比色管中，加8mL水，混匀后再加10mL盐酸。将比色管放入70℃～80℃水浴中，每隔5min～10min以涡旋混合器混合一次，至试样水解完全为止，约需40min～50min。取出比色管，加入10mL乙醇，混合。冷却至室温后将混合物移入100mL具塞量筒中，以25mL无水乙醚分次洗比色管，一并倒入量筒中。密塞振摇1min。加入25mL石油醚，密塞振摇1min，静置30min，分层，将吸出的

7、有机层过无水硫酸钠（约5g）滤入浓缩瓶中。再加入25mL无水乙醚密塞振摇1min，25mL石油醚，密塞振摇1min，静置、分层，将吸出的有机层经过无水硫酸钠（约5g）滤入浓缩瓶中，按“再加入25mL无水乙醚……，静置、分层、过无水硫酸钠”重复操作一次，将全部提取液用旋转蒸发仪于45℃减压浓缩近干。用正己烷少量多次溶解浓缩物，转移至25mL容量瓶并定容，摇匀。按5.1.2步骤甲酯化处理。5.1.1.2油类制品称取混合均匀的油类制品0.2g～1g（精确到0.001g）（含待测组分约10mg/g～20mg/g。）至2

8、5mL容量瓶中，加入5mL正己烷轻摇溶解，并用正己烷定容至刻度，摇匀。按5.1.2步骤甲酯化处理，脂肪酸乙酯型油类制品的物理鉴别参见附录A。5.1.2甲酯化吸取待测液（5.1.1.1，5.1.1.2）2.0mL至10mL具塞刻度试管中，加入2.0mL氢氧化钾甲醇溶液，立即移至涡旋混合器上振荡混合5min，静置5min，加入6mL蒸馏水，上下振摇0.5min，静置分层后，吸取下层液体，弃