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《β-ap对衰老模型大鼠开场行为及学习记忆能力的影响--上海软隆》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、β-AP对衰老模型大鼠开场行为及学习记忆能力的影响 摘要:用D-半乳糖(D-gal)建立衰老动物模型且海马内微注射βAP,检测各组大鼠开场行为、Y-迷宫分辨学习和一次性被动回避反应的变化的方法,研究β-淀粉样蛋白(βAP)对衰老大鼠开场行为及学习记忆能力的影响.结果是D-gal+NS组、D-gal+βAP组大鼠在新异环境中自发活动和探究行为减少,学习记忆减退,与NS+NS组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01).该文得出的结论是βAP与D-gal联合使用可导致脑老化程度加重,学习记忆能力显著减弱.关键词:β-
2、淀粉样蛋白;开场行为;学习记忆;衰老 β-淀粉样蛋白(β-amyloidprotein,βAP)是老年性痴呆患者的大脑中特有的一种蛋白,它在老年性痴呆的发病机理中的作用已引起人们的重视.生化研究表明,β-淀粉样蛋白是老年性痴呆患者脑海马和皮层老年斑(SP)的主要成分,它与AD的病理形成过程关系密切.已有报道βAP对正常大鼠海马神经元的毒害作用[1,2],但有关βAP对衰老大鼠的作用,国内外均未见报道,本实验试图在D-半乳糖所致衰老动物模型基础上进行海马内注射βAP,观察其对大鼠开场行为和空间分辨学习以及记忆保持能力的
3、影响.1 材料与方法1.1 动物和试剂雄性健康SD大鼠,体重100～120g,βAP为Sigma公司产品(βAP1-40,LotNO.76H49611),D-半乳糖(D-gal)为上海试剂二厂产品.1.2 分组和模型建立将大鼠随机分成4组:①生理盐水NS+NS组;②NS+βAP组;③D-gal+NS组;④D-gal+βAP组.③、④组动物腹腔注射D-半乳糖:50mg·kg-1·d-1,连续注射6周建立衰老动物模型[3];①、②组动物腹腔注射等量生理盐水.于第4周进行双侧海马内注射βAP,每侧注射1μL(4μg/μL);
4、对照组注射等量生理盐水.海马定位注射方法:大鼠腹腔注射4%戊巴比妥钠(40mg.kg-1)麻醉,立体定位仪(日本NARISHIGESN-3型)上固定,坐标按照图谱[4],以前囱定位:AP=-3.5mm,ML=±2.0mm,H=2.7mm,钻开颅骨,用微量进样器垂直进针,每侧注射时间为5min,留针5min,缓慢起针,局部消毒后缝合皮肤,肌注抗生素抗感染.1.3 行为学检测连续腹腔内注射6周后进行.1.3.1 开场行为(openfield)[5]:将动物置于圆形开场检测箱底中央的格内,记录其在3min跑动(locomot
5、ion)穿过的格数,后肢站立(rearing)次数、梳理(grooming)次数及粪便颗粒数.比较不同组间大鼠在新异环境中自发行为和探究行为表现的差异.1.3.2 Y-迷宫分辨学习(Y-mazediscriminationlearning)能力检测[6]:Y-迷宫为三等分辐射式反射箱.以大鼠被电击后逃至安全区为一次正确反应,连续10次测试中有9次(90%)正确反应,定为学会标准.记录每个大鼠达到学会标准的训练次数.所有检测过程均由计算机完成.1.3.3 一次性被动回避反应(one-trialpassiveavoidan
6、ceresponse)[5]:根据大鼠趋暗习性,记录其在通道上的停留时间,即步入潜伏期(step-throughlatency,STL);动物进入暗箱后立即给予电击(0.3mA,5s);24h后检测大鼠的STL.以STL作为记忆保持的指标,STL越长表明对电击的记忆保持越好.检测以240s为限.本实验数据用(X±S.X(X表示,组间差异用t检验;一次性被动回避反应采用Mann-whitney非参数检验.2 结 果2.1 不同组大鼠开场行为观察结果见表1，统计处理表明,在开场行为诸参数中,D-gal+βAP组动物与NS
7、+NS组比较粪便颗粒数有显著性差异(P<0.05),而跑动格数则极明显减少(P<0.01),前者在新异环境中自发活动和探究反应明显下降,紧张恐惧状态也降低.D-gal+NS组动物跑动格数与NS+NS组比较也有显著性差异(P<0.05).NS+NS组与NS+βAP组之间虽无显著性差异,但其跑动格数、站立次数均有下降趋势,说明βAP单独使用对大鼠在新异环境中的自发活动及探究行为也有一定影响.表1 β-淀粉样蛋白对大鼠开场行为的影响组别 n 跑动格数 后肢站立次数 粪便颗粒数NS+NS1086.6±7.52
8、3.6±2.34.0±1.9NS+βAP973.8±9.620.3±3.13.1±2.0D-gal+NS969.3±9.8*18.8±1.93.0±1.6D-gal+βAP946.7±5.8**△15.7±2.21.3±0.2**P<0.05,**P<0.01vsNS+NSgroup,△P<0.05vsD-gal+NSgroup.
