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1、企业杭州国光旅行用品有限公司名称HangzhouGuoguangTouringCommodityCo.,Ltd.文件编号SSOP-04版本/修改号1.0文件微生物挑战性试验操作规范名称StandardOperationProcedureforHygieneStandard生效日期2021/7/1页次第1页共6页编写审核批准1.0目的新产品防腐成效的测试2.0范畴公司新产品3.0参考：4材料与方法4.1化妆品中常用的防腐体系[6]养分琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、养分肉汤培养基、0.9%氯化钠溶液
2、、平皿、接种环、培养箱等4.2微生物挑战性试验4.2.1受试用微生物测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所供应；细菌包括:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌；霉菌包括:黑曲霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉；试验前，将各菌种接种于合适的培养基中,于37℃〔细菌〕或28℃〔霉菌〕7下培养；细菌培养在2天后,霉菌培养在3-5天后，挑选适量菌落于灭菌的生8理盐水中，制成确定浓度的混合细菌〔1×10个/ml〕,置于4℃贮放备用；4.2.2一次加菌的
3、28天微生物挑战试验个/ml〕或混合霉菌悬液〔1×10此方法参照美国药典〔第21版〕上微生物挑战性试验检测防腐剂成效的方法；称取各受试样品30g,加入混合细菌或混合霉菌悬液,每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3×105个霉菌；然后充分混匀,置于28℃下；在接菌的0、7、14、21和28天取样分析:精确称取3g样品,加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内,加入27ml灭菌生理盐水,充分震荡混匀,此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释；按平板倾注法计数受试品中含菌量,细菌培养是
4、37℃下24h～48h，霉菌培养为28℃下3～5天；此试验用以评判防腐剂的有效与否；评判标准为:当每克样品中一次接菌〔1×106细菌和1×105霉菌〕后,在第14天存活菌量削减至不高于起始浓度的0.1%,以后逐步削减,在28天为0；符合标准为防腐剂有效〔通过测试〕,不符合为防腐剂无效〔不通过测试〕；分析与检测4.2.3重复3次加菌的微生物挑战试验此方法参照国际CTFA（国际化妆品、香精和洗涤剂协会）举荐的微生物挑战性试验；称取受试样品30g,每隔2周加菌一次〔即试验的第1、3和5周〕,每次加细菌量为1
5、×106～1×107个/g样品和霉菌1×105个/g～1×106个/g样品；在加菌后的0天、7天和14天〔后一次加菌前〕采样分析样品中含菌量,方法同前；此方法可将受检样品分为三类:〔1〕防腐成效优良〔W〕,即三次加菌后,在每次加菌后的第7天或14天时,存活菌量削减至不高于起始浓度的0.01%〔即≤100个/g或ml）样品,通过测试〕；〔2〕防腐成效尚可〔M〕,即三次加菌后,在每次加菌后的第7天或14天时,存活菌量削减至不高于起始浓度的0.1%,〔即≤1000个/g或mL样品,通过测试〕；〔3〕防腐成效
6、差〔P〕,即三次加菌后,在每次加菌后的第7天或14天时,存活菌量>mL样品〔不通过测试〕；5、结果判定受试样品一次加菌和3次加菌后,在检测时间内细菌和霉菌的抗腐才能见表1～4；依据两种方法评判标准,将8种防腐体系的防腐成效评判列于表5；从结果看,两种加菌方法对防腐体系的评判结果基本一样,三次加菌仍可对有效的防腐体系作出程度之区分:防腐优良〔W:Wepreservative〕和防腐尚可〔M:Marginapreservative〕；此外,在一次加菌后1～2周内能将样品中含菌量降低至加入菌量的0.1%,可
7、通过3次加菌试验,如防腐体系5和8对细菌的防腐力;但如大于0.1%,即使在以后的测试时间内有逐步下降至0的趋势,可能亦很难通过3次加菌试验,如防腐体系7对细菌的防腐力；
