SZDBZ 208-2016 H7N9 亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法

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1、ICS11.220B41SZDB/Z深圳市标准化指导性技术文件SZDB/Z208-2016H7N9亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法ProtocolofReal-timeReverseTranscriptionPolymeraseChainReactionforDetectionofAvianInfluenzaH7N9Virus2016-11-22发布2016-12-01实施深圳市市场监督管理局发布SZDB/Z208-2016目次前言.......................................................

2、.........................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13术语与缩略语......................................................................14原理...........

3、...................................................................15仪器与试剂........................................................................26生物安全要求......................................................................27样品采集和前处理............................................

4、......................28核酸提取..........................................................................39实时荧光RT-PCR检测...............................................................310分析条件设定和结果判定...........................................................4附录A（规范性附录）常用试剂配制.........

5、.............................................5附录B（资料性附录）H7N9禽流感H7和N9的引物及探针...................................6附录C（资料性附录）实时荧光RT-PCR反应体系配制......................................7ISZDB/Z208-2016前言本文件按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本文件的某些内容有可能涉及专利，应按照专利法的规定执行。本文件的发布机构不应承担识别这些专利的责任。本文件由深圳市检验检疫

6、科学研究院提出。本文件起草单位：深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心、中华人民共和国江西出入境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局本文件主要起草人：廖立珊、孙洁、叶奕优、林庆燕、秦智锋、曾少灵、杨春华、刘建利、唐金明、花群义、吕建强、杨俊兴、曹琛福、卢体康、阮周曦、陶虹、张彩虹、陈兵、罗宝正。IISZDB/Z208-2016H7N9亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法1范围本文件规定了H7N9亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR的检测方法。本文件适用于快速检测咽拭子、鼻拭子、泄殖腔拭子、组织

7、样品等临床样品中H7N9亚型禽流感病毒。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088出入境动物检疫采样GB/T18936高致病性禽流感诊断技术GB19442高致病性禽流感防治技术规范GB19489实验室生物安全通用要求3术语与缩略语下列缩略语适用于本文件。Ct值Cyclethreshold，每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数DEPCdiethyl

8、procarbonate，焦碳酸二乙酯PBSphosphatebuffersaline，磷酸盐缓冲液FAM6