大肠埃希菌的检测

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1、------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxx大肠埃希菌的检测【精品文档】幻灯片1大肠埃希菌的检测Error!Referencesourcenotfound.幻灯片7甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基l l  l    l  l   lMUG 75mg水1000mLl除MUG外，取上述成分，混合。微温溶解，调节PH7.2-7.4，加入MUG，溶解，每管分装5mL，灭菌。幻灯片8实验步骤：l取供试供试液1mL，直接或处理后

2、接种在制好的100mL胆盐乳糖培养基中,在37℃恒温箱中培养18～24h，进行增菌培养。l取上述培养物0.2mL,接种至含5mLMUG培养基的试管内培养，于5小时，24小时在366nm紫外灯光下观察，同时用未接种的MUG培养基做本底对照。l若管内培养物呈现荧光，为MUG阳性，不呈现荧光，则为MUG阴性。幻灯片9l观察后，沿着培养管的管壁加入数滴靛基质试液，叶面呈玫瑰红色，为靛基质阳性，呈试剂本色，为靛基质阴性。l本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。l靛基质实验原理l某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合

3、，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。l幻灯片10伊红美蓝培养基（EMB培养基）l     蛋白胨水琼脂培养基100ml，20%乳糖溶液2ml，2%伊红水溶液2ml，0.5%美蓝水溶液1ml，将已灭菌的蛋白胨水琼脂培养基（pH7.6）加热溶化，冷却至60℃左右时，再把已灭菌的乳糖溶液，伊红水溶液及美蓝溶液按上述量以无菌操作加入。摇匀后，立即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度，115℃灭菌20min。 【精品文档】【精品文档】幻灯片11结果分析：l1.MUG、靛基质结果判断lMUG培养结果：在366nm紫外线下观察l靛基质结果：液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；

4、呈试液本色，为靛基质阴性lMUG阳性、靛基质阳性，判检出大肠杆菌；lMUG阴性、靛基质阴性，判未检出大肠杆菌；lMUG阳性、靛基质阴性或MUG阴性、靛基质阳性，需进一步做以下检查l幻灯片12l2。EMB培养结果判断lEMB培养18-24h后，检查有无疑似大肠埃希菌菌落（大肠埃希菌落形态特征见表），若无，判供试品未检出大肠埃希菌；若有，进一步做以下试验大肠埃希菌落形态特征l培养基菌落形态EMB呈紫黑色、浅紫色、篮紫色或粉红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，微突起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽。【精品文档】【精品文档】幻灯片13l检验依据：2010

5、年版«中国药典»二部附录ⅪJ微生物限度检查法检验标准规定：口服制剂细菌数1g不得超过1000个；1ml不得超过100个。霉菌及酵母菌数1g不得超过100个。控制菌1g（1ml）不得检出大肠埃希菌。幻灯片14注意事项 l1．实训过程要严格无菌操作。【精品文档】【精品文档】l2．供试液稀释及注入培养皿时应摇匀再取，供试液从制备至加入培养基不得超过1h.l3．配制MUG培养基时，务必调pH，否则pH偏高，MUG分解，本身则显荧光。l4.培养时间：供试品培养液接种于MUG培养基中的培养时间，一般在4h、24h 观察是否产生荧光，如荧光很微弱，不能准确判断时，该延长培养至4

6、8h再观察结果。幻灯片15l谢谢观看！！【精品文档】