聚合酶链反应原理答案

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1、试卷一．翻译（机译和人译结合，水平有限）PrincipleofthePCR聚合酶链反应原理ThepurposeofaPCR(PolymeraseChainReaction)istomakeahugenumberofcopiesofagene.TherearethreemajorstepsinaPCR,whicharerepeatecdfor30or40cycles.Thisisdoneonanautomatedcycler,whichcanteatandcoolthetubeswiththereactionmixtureina

2、veryshorttime.一个PCR（聚合酶链反应）的目的是要对一个基因进行大量的拷贝。一个聚合酶链反应中有三个主要的步骤，并且重复这些步骤30或40次循环。这是在一个自动循环仪完成，它可以在很短的时间内对装着反应混合物的管子进行加热和冷却。1.Denatruationat94℃Duringthedenaturation,thedoublestrandmeltsopentosinglestrandedDNA,allenzymaticreactionsstop(forexample:theextensionfromaprevi

3、ouscycle).1．在94℃变性在变性中，双链溶解开放成单链DNA，所有的酶反应都停止了（例如：从以前的周期扩展名）。2.annealingatdifferent℃Theprimersarejigglingaround,causedbytheBrownianmotion.Ionicbondsareconstantlyformedandbrokenbetweenthesinglestrandedprimerandthesinglestrandedtemplate.Themorestablebondslastalittlebi

4、tlonger(primersthatfitexactly)andonthatlittlepieceofdoublestrandedDNA(templateandprimer),thepolymerasecanattachandstartscopyingthetemplate.Oncethereareafewbasesbuiltin,theionicbondissostrongbetweenthetemplateandtheprimer,thatdoesnotbreakanymore.2．在不同℃下退火引物在周围跳动的，由布朗

5、运动引起的。离子键在单链引物和单链模板之间不断地形成和打破。结合的越长结合的越紧密（引物适合完全一致），并在此小片的双链DNA（模板和引物）上，聚合酶能接触，并开始复制模板。一旦有一些碱基对形成，模板和引物离子键之间的离子键变强就不容易被打破了。3.extensionat72℃Thisistheidealworkingtemperatureforthepolymerase.Theprimers,wherethereareafewbasesbuiltin,alreadyhaveastrongerionicattractionto

6、thetemplatethantheforcesbreakingtheseattractions.Primersthatareonpositionswithnoexactmatch,getlooseagain(becauseofthehighertemperature)anddon’tgiveanextensionofthefragment.Thebases(complemetarytothetemplate)arecoupledtotheprimeronthe3’side(thepolymeraseaddsdNTP’sfro

7、m5’to3’,readingthetemplatefrom3’to5’side,basesareaddedcomplementarytothetemplate).3。在72℃延伸对聚合酶来说，这是理想的工作温度。