不同治则方药对快速老化小鼠脑组织细胞因子表达的影响

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不同治则方药对快速老化小鼠脑组织细胞因子表达的影响作者：陈云波，王奇，罗荣敬，冯炯，鹿俊磊，程淑意 【摘要】 目的观察不同治则方药对痴呆动物模型脑组织细胞因子表达的影响。方法7月龄快速老化亚系SAMP8小鼠分为痴呆模型组、阳性对照药脑复康组、六味地黄汤组、四君子汤组、归脾汤组、当归芍药散组等6个组；抗快速老化亚系SAMR1作为正常对照组。给药4周后，用液相蛋白芯片（Luminex）技术同时测定脑组织中的10种细胞因子（GM-CSF，IFN-γ，TNF-α，IL-1β，IL-2，L-4，IL-5，IL-6，IL-10，IL-12）含量。结果8月龄SAMP8小鼠脑组织中某些细胞因子表达发生异常改变；当归芍药散、四君子汤能分别提高模型小鼠海马中的IL-4和IFN-γ的水平（P【关键词】 阿尔茨海默病；快速老化小鼠；中药复方；细胞因子；液相蛋白芯片老年性痴呆即阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease,AD）是目前公认的危害人类健康的主要疾病之一，已成为威胁中国老年人健康，仅位于心脏病、肿瘤、卒中之后的第四大疾病。由于AD病理变化的复杂性，其发病机制尚未揭示［1］，尽管世界各国在寻找AD有效治疗药物的研究中投入了大量的人力和物力，但成果却十分有限。作为天然药物的中药尤其是复方，在防治老年性疾病方面则有着丰富的理论和实践经验以及潜在的优势，因此，阐明中药复方防治AD的药理机制，筛选和研制能延缓AD进程、提高患者生活质量的中药新药将具有重要的现实意义和广阔的应用前景。    　　本实验研究拟采用新引进的液相蛋白芯片（Luminex）技术［2］，研究不同治则方药对痴呆动物模型脑组织细胞因子的影响。首先在文献检索和预实验的基础上，初筛出10种与AD免疫炎症病理反应相关的细胞因子,它们是粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（Granuloyte-macrophagecolonystimutaingfactor,GM-CSF）、γ-干扰素（Interferonγ,IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（Tumournecrosisfactor-α,TNF-α）、白介素-1β（Interleukin-1β, IL-1β）、白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-5（IL-5）、白介素-6（IL-6）、白介素-10(IL-10)、白介素-12(IL-12)；然后用4种不同治则的经典方药（即六味地黄汤、归脾汤、当归芍药散和四君子汤）对痴呆动物模型进行治疗；应用Luminex检测技术，比较不同治则方药各自不同蛋白表达靶点（脑组织的皮质和海马）的细胞因子含量变化，从炎症与免疫反应方面阐述中药复方防治AD的药理机制，为其临床应用提供实验依据。　　1 材料与仪器　　1.1 动物 　　SPF级7月龄雄性快速老化小鼠（senescenceacceleratedmouse，SAM）购自天津中医药大学第一附属医院老年脑病研究室动物中心（动物质量合格证号：06F1022），其中快速老化亚系SAM-prone/8（SAMP8）小鼠84只，抗快速老化亚系SAM-resistant/1（SAMR1）小鼠15只，体质量约20g。　　1.2 药品和试剂 　　六味地黄汤（熟地、山萸肉、山药、泽泻、丹皮、茯苓按8∶4∶4∶3∶3∶3的比例配比）；归脾汤（白术、茯苓、黄芪、龙眼肉、酸枣仁、木香、炙甘草、当归、远志、人参按3∶3∶4∶4∶4∶2∶1∶3∶2∶2的比例配比）；四君子汤（人参，白术，茯苓，炙甘草按1∶1∶1∶1的比例配比）；当归芍药散（当归，芍药，川芎，泽泻，白术，茯苓按3∶16∶8∶8∶4∶4的比例配比）等4种方药药材由广东省中医院药房提供，按煎煮标准配制，煎煮浓缩至所需浓度（含生药为1g/ml）；脑复康片（吡拉西坦片PiracetamTablets），广东华南药业有限公司产品，批号：051103；氯化钠灭菌注射液，广州中医药大学附属第一医院产品，批号：T051123；MouseMulti-CytokineDetectionSystem2Luminex检测试剂盒，Upstate公司产品，批号：0604026780。