2型糖尿病胰岛素抵抗与IL-6、IL-8、TNF-α及T细胞亚群变化的相关性研究

《2型糖尿病胰岛素抵抗与IL-6、IL-8、TNF-α及T细胞亚群变化的相关性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

分类号：R392密级：公开学校代码：11065学号：Y2014131341学术硕士学位论文2型糖尿病胰岛素抵抗与IL-6、IL-8、TNF-α及T细胞亚群变化的相关性研究作者姓名孙晓琳指导教师王静副教授学科免疫学培养单位医学部基础医学院答辩日期2018年5月9日 2型糖尿病胰岛素抵抗与IL-6、IL-8、TNF-α及T细胞亚群变化的相关性研究摘要目的：研究2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）及胰岛素抵抗（insulinresistance，IR）与IL-6、IL-8、TNF-α及T淋巴细胞亚群的相关性，为临床治疗及疗效评估提供理论依据。方法：将2017年1月至7月期间淄博市第一医院收治的78例初诊2型糖尿病患者，根据患者是否具有家族史分为家族史患者组（FH+DM组）48例以及无家族史患者组（FH-DM组）30例，另选择同期到医院接受健康体检的健康人群40例，其中根据是否具有家族史分为，家族史正常对照组（FH+对照组）10例，无家族史正常对照组（FH-对照组）30例。治疗前四个组均采取精氨酸刺激实验检测第一时相胰岛素分泌水平，评估各组的β细胞功能；FH+DM组和FH-DM组采取持续皮下胰岛素输注强化治疗，达到良好的血糖控制，对FH+DM组和FH-DM组采取精氨酸刺激实验检测治疗后第一时相的胰岛素分泌水平，评估治疗后β细胞功能的改变。采用己糖激酶法检测各组持续皮下胰岛素输注对血糖控制的影响；采用酶联免疫吸附试验-双抗体夹心法（一步法）检测正常对照组及治疗前、后FH+DM组和FH-DM组血清白细胞介素6（IL-6），白细胞介素8（IL-8）及肿瘤坏死因子（TNF-α）的含量；采用流式细胞术检测各组外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞数量及CD4+T细胞/CD8+T细胞比值。结果：①FH+DM组和FH-DM组糖化血红蛋白、血糖及HOMA2-IR水平均高于各自正常对照组（P<0.05），FH+DM组和FH-DM组的HOMA2‑%β明显低于各自的正常对照组（P<0.01），FH-对照组HOMA2-%β要高于FH+对照组（P<0.05）；②经过强化治疗后FH+DM组和FH-DM组空腹血糖和餐后血糖水平显著降低，与治疗前比较差异均具有统计学意义（P<0.01）；③经过治疗后FH+DM组和FH-DM组胰岛β细胞相关指标均改善，FH+DM组空腹胰岛素治疗前7.3±2.5mIU/L对治疗后15.3±2.5mIU/L；FH-DM组空腹胰岛素治疗前7.3±2.0mIU/L对治疗后17.0±2.3mIU/L，差异均具有统计学意义（P<0.01）；④经过治疗后FH+DM组和FH-DM组HOMA2-IR均低于治疗前，FH+DM组4.7±1.1对比3.5±0.6；FH-DM组4.7±0.9对比3.0±0.5，差异均具有统计学意义（P<0.05）；⑤经过治疗后FH+DM组和FH-DM组HOMA2-%β均高于治疗前数值（FH+DM组76.6±17.7对比16.2±0.6；FH-DM组75.3±15.6对比15.9±0.5）差异均具有统计学意义（P<0.01）；⑥FH+DM组和FH-DM组血清TNF-α水平显著高于各自正常对照组，差异具有统计学意义（P<0.01），IL-6I 及IL-8水平各自均高于正常对照组，差异均具有统计学意义（P<0.05）；治疗后FH+DM组和FH-DM组三种细胞因子较治疗前均显著降低，比较差异均具有统计学意义（P<0.05）；但三种细胞因子FH+对照组与FH-对照组比较、FH+DM组与FH-DM组比较以及治疗后FH+DM组与FH-DM组比较差异均无统计学意义（P>0.05）；⑦FH+DM组和FH-DM组CD3+T细胞数、CD4+T细胞数、CD4+T细胞/CD8+T细胞比值明显降低，CD8+T细胞数明显升高，与各自正常对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）；但上述指标FH+对照组与FH-对照组比较、FH+DM组与FH-DM组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：①持续皮下胰岛素输注强化治疗是改善2型糖尿病患者胰岛β细胞相关指标及HOMA2-IR的有效手段。②血清IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平与2型糖尿病胰岛素抵抗密切相关，但与家族史无相关性。③2型糖尿病患者存在T细胞亚群数量及CD4+T细胞/CD8+T细胞比值紊乱情况。硕士研究生：孙晓琳（免疫学）指导教师：王静（副教授）关键词：2型糖尿病；胰岛素抵抗；白介素-6；白介素-8；肿瘤坏死因子-αII ThecorrelationstudybetweeninsulinresistanceandthechangesofIL-6,IL-8,TNF-αandTlymphocytesubsetsintype2diabetesmellitusAbstractObjective:Tostudycorrelationamongtype2diabetesmellitus(T2DM),insulinresistance(IR),IL-6,IL-8,TNF-αandTlymphocytesubsets,andprovidetheoreticalbasisforclinicaleffectsandcurativeeffectevaluationMethods:78patientswithT2DMwhoweretreatedinZiboNo.1HospitalfromJanuarytoJuly2017wereselectedanddividedintoFH+DMgroup(48patients)andFH-DMgroup(30patients)inlinewithfamilyhistory.Inaddition,40healthypeoplewhoconductedphysicalexaminationinthesameperiodwerechosenanddividedintonormalFH+controlgroup(10patients)andFH-controlgroup(30patients)inaccordancewithfamilyhistory.Beforetreatment,patientsinfourgroupsusedargininestimulationtesttodetectfirst-phaseinsulinsecretionlevelandevaluateβ-cellfunctionineachgroup;patientsinFH+DMgroupandFH-DMgroupwereinfusedwithcontinuoussubcutaneousinsulinforintensificationtherapytoreachthefavorablebloodglucosecontrol.PatientsinFH+DMgroupandFH-DMgroupappliedargininestimulationtesttodetectfirst-phaseinsulinsecretionlevelandevaluatechangesofβ-cellfunctionaftertreatment.Thehexokinasemethodwasusedtodetectinfluencesofcontinuoussubcutaneousinsulininfusiononbloodglucosecontrol.Enzymelinkedimmunosorbentassay-doubleantibodysandwichmethod(one-stepmethod)wasutilizedtodetectseruminterleukin6(IL-6),interleukin8(IL-8),andtumornecrosisfactor(TNF-α)contentsinthenormalcontrolgroupandFH+DMgroupandFH-DMgroupbeforeandaftertreatment.Flowcytometry(FCM)wasutilizedtodetectperipheralbloodCD3+Tcells,CD4+TcellsandCD8+Tcells,aswellasspecificvalueofCD4+TcellsandCD8+Tcellsineachgroup.Results:(1)Comparedwiththepatientsincontrolgroup,theglycosylatedhemoglobin,bloodsugarandHOMA2-IRlevelofpatientsinFH+DMandFH-DMgroupsarehigher(P<0.05).TheHOMA2-%βofFH+DMgroupandFH-DMgroupisobviouslyhigherthanthatoftheircontrolgroups(P<0.01).TheHOMA2-%βofFH-controlgroupishigherthanthatoftheFH+controlgroup(P<0.05);(2)Afterreinforcedtreatment,fastingblood-glucoseandpostprandialbloodsugarinFH+DMgroupandFH-DMgroupweresignificantlyreduced.Bycomparingwithpre-treatment,therewasthestatisticaldifference(P<0.01);(3)Aftertreatment,pancreaticβcellindexinFH+DMgroupandFH-DMgroupwasimproved,whilefastinginsulininFH+DMgroupbeforetreatmentwas7.3±2.5mlU/Landaftertreatmentwas15.3±2.5mIU/L.FastinginsulininFH-DMgroupbeforetreatmentwas7.3±2.0mIU/Landaftertreatmentwas17.0±2.3mIU/L.Therewasthestatisticaldifference(P<0.01);(4)Aftertreatment,HOMA2-IRinFH+DMgroupandFH-DMgroupwaslessthanthevaluebeforetreatment.Moreover,theimprovementsituationinFH-DMgroupwassignificantlybetterthanFH+DMgroup.4.7±1.1vs.3.5±0.6inFH+DMgroup;4.7±0.9vs.3.0±0.5inFH-DMgroup,therewasthestatisticaldifference(P<0.05);(5)Afterthetreatment,theHOMA2-%βlevelinFH+DMgroupandFH-DMgroupisimproved(ForFH+DM:aftertreatmentthedataisIII 76.6±17.7andbeforetreatmentdatais16.2±0.6;FH-DM:aftertreatmentthedatais75.3±15.6andbeforetreatmentthedatais15.9±0.5).Thesedifferenceshavethestatisticsmeaning(P<0.01);(6)TheserumTNF-αlevelofFH+DMgroupandFH-DMgroupareobviouslyhigherthanthatoftheircontrolgroupsandthedifferenceshavethestatisticsmeaning(P<0.01).Inaddition,theirIL-6andIL-8levelisseparatelyhigherthantheircontrolgroupsandthedifferenceshavethestatisticsmeaning(P<0.05).Afterthetreatment,thethreekindsofcellfactorsofFH+DMgroupandFH-DMgroupareobviouslydecreasedandthesecomparativedifferenceshavethestatisticsmeaning(P<0.05).However,whencomparingthethreecellfactorsbetweenFH+controlgroupandFH-controlgroup,betweenFH+DMgroupandFH-DMgroup,betweentheFH+DMgroupandFH-DMgroupaftertreatment,thedifferencesdonothavethestatisticsmeaning(P>0.05).(7)CD3+Tcells,CD4+TcellsandCD8+Tcells,aswellasspecificvalueofCD4+TcellsandCD8+TcellsinFH+DMgroupandFH-DMgroupwereobviouslyreduced,whileCD8+Tcellswereobviouslyincreased.Therewasthestatisticaldifferenceinthenormalcontrolgroups(P<0.05).However,bymakingacomparisononFH+controlgroupandFH-controlgroup,andacomparisonbetweenFH+DMgroupandFH-DMgroup,therewasnostatisticaldifferenceintheabove-mentionedindexes(P>0.05).Conclusion:(1)ReinforcedtreatmentofcontinuoussubcutaneousinsulininfusionistheeffectivemeanstoimproveinsulinβindexesandHOMA2-IRofpatientswithT2DM.(2)TheexpressionlevelofserumIL-6、IL-8、TNF-αiscloselyrelatedwiththeinsulinresistanceinpatientswithtype2diabetesbutisnotrelatedwiththefamilymedicalhistory.(3)PatientswithT2DMhasthedisorderinTcellsubsetsandspecificvalueofCD4+Tcells/CD8+Tcells.Graduatestudent:Xiao-linSun(Immunology)DirectedbyProf.JingWangKeywords:Type2diabetesmellitus;Insulinresistance;Interleukin-6;Interleukin-8;Tumornecrosisfactor-αIV 目录引言......................................................................................................................................1材料与方法..........................................................................................................................31病例选择分组与标本收集...........................................................................................31.1病例选择....................................................................................................................31.2标本收集....................................................................................................................32主要仪器与试剂...........................................................................................................32.1主要试剂....................................................................................................................32.2主要仪器设备............................................................................................................53实验方法与步骤...........................................................................................................63.1治疗方法....................................................................................................................63.2患者外周血中IL-6的检测.......................................................................................63.3外周血中IL-8的检测...............................................................................................73.4患者外周血中TNF-α的检测....................................................................................83.5外周血中T淋巴细胞亚群的检测............................................................................93.6外周血中血糖的检测..............................................................................................103.7患者外周血中糖化血红蛋白的检测......................................................................103.8患者外周血中胰岛素的检测...................................................................................114统计学分析.................................................................................................................12结果....................................................................................................................................131.治疗前各组基础数据比较及第一时相的胰岛素分泌情况比较.............................132.持续皮下胰岛素输注对血糖控制的影响.................................................................143.持续皮下胰岛素输注对胰岛素抵抗和β细胞功能的影响.......................................154.外周血清中细胞因子的变化.....................................................................................175.外周血中T淋巴细胞亚群的变化.............................................................................20讨论....................................................................................................................................22结论....................................................................................................................................25参考文献............................................................................................................................261 综述....................................................................................................................................29综述参考文献....................................................................................................................37攻读学位期间的研究成果................................................................................................42英文缩略词汇表及中文对照............................................................................................43致谢....................................................................................................................................44学位论文独创性声明........................................................................................................45学位论文知识产权权属声明............................................................................................452 引言引言2型糖尿病是继肿瘤、心血管疾病以后的第三大非传染性、严重威胁人类康健的慢性疾病，是当前各国严重威胁公共卫生安全、难以有效治愈的新型疾病。2型糖尿病的发病率在发达国家的发病率呈上升趋势逐年递增，发展中国家也深受2型糖尿病的威胁[1]。据相关部门的不完全统计，仅去年一年，全球范围内新增的2型糖尿病患者多达两千万例，并且发展中国家以中国、印度为代表，2型糖尿病在中老年人群里发病率越来越高。根据我国卫生安全部门所做的调查结果来看，我国截至去年年底2型糖尿病患者共计七百万例，有关专家预计2020年时，我国的2型糖尿病患者将突破一千万例大关。2型糖尿病需终身监测及治疗，如得不到良好控制，将会导致患者继发心血管疾病，失明、脑卒中、2型糖尿病肾病、2型糖尿病坏疽等等并发症，严重危害人的健康和生命[2]。在医学研究领域更习惯将2型糖尿病称作成人发病型糖尿病，在中老年群体中有着极高的发病率，占我国2型糖尿病患者的一半以上，目前病因不明确，与胰岛素分泌不足，抵抗伴胰岛素分泌失衡等有关[3]。但是有一点需要明确，即2型糖尿病患者的免疫系统并非完全失效，并且患者体内能够产生胰岛素，只是内分泌系统在一定程度上失衡导致胰岛素分泌出现过多或过少等不受控制的症状，目前有效的治疗手段便是通过口服药物刺激内分泌系统，使得患者体内的胰岛素分泌量达到一个稳定的状态[4]。IL-6在临床医学中常被视为一种多功能的细胞因子，该因子的分泌与T细胞、巨噬细胞、上皮细胞等免疫群体有着直接的关联[5]。IL-6可以通过释放继发性细胞因子或活化宿主细胞以直接或间接实现其效应，在免疫系统、造血系统、神经系统、肝脏代谢中均起重要作用。IL-8是由中性粒细胞、单核细胞、内皮细胞、淋巴细胞、肝细胞等产生的炎症细胞因子，它在早期具有趋化作用[6]。它是介导病理损伤的重要因子，可以诱导中性粒细胞的激活和定向迁移。研究证实，高血糖和高胰岛素血症对血管有毒性，使其内皮细胞缺氧，导致死亡，而缺氧环境下的内皮细胞可直接产生IL-8，也可同时刺激中性粒细胞和单核细胞产生IL-8，导致IL-8急速的升高。产生的IL-8又通过趋化和活化中性粒细胞，使其释放溶酶体酶而使毛细血管损伤，导致组织的损伤[7]。上个世纪九十年代以来关于2型糖尿病的研究从未终止。有研究者发现如果将细菌脂多糖注射到完成卡介苗接种的小白鼠体内，小白鼠的血清中很快便会出现一种破坏性物质，这种物质能够在短时间内使得肿瘤细胞出血性坏死，后来医学界将其称为肿瘤坏死因子[8]。八十年代的时候医学研究人员在实验的过程中发现该因子对于缓解消耗症起到十分显著的作用，因此又常将其称作是恶液质素。目前在医学1 青岛大学硕士学位论文界一致认为TNF的产生与活化的巨噬细胞，NK细胞以及T淋巴细胞有密切的联系[9]。研究人员把T淋巴细胞产生的淋巴毒素（lymphotoxin，LT）命名为TNF-β[10]。虽然TNF-α与TNF-β仅有约30%的同源性，但它们却拥有共同的受体。TNF-α的生物学活性占TNF总活性的70%～95%，因此目前常说的TNF多指TNF-α[11]。TNF在生物学上发挥着巨大的作用，一方面它能够充当人体免疫防线的重要介质，帮助人体构建生物防线，另一方面它能够根据细胞受损的状况随时参与到机体的免疫病理损伤修复中，在免疫性疾病的防治研究中具有重要的临床价值。在正常情况下，具有抗肿瘤、抗感染的作用，但如持续释放或释放过多，或与其他细胞因子的关系失调，与会引起机体的发热等。TNF-α参与激活免疫细胞，促使炎性反应细胞的聚集黏附，导致微血管扩张，使其通透性增强和诱发炎性反应[12-13]。在整个人体免疫系统中T淋巴细胞亚群发挥着不可替代的作用，能够随时针对外来入侵病菌及时做出免疫应答，并且与吞噬细胞等免疫细胞相互协同的同时又存在有相互拮抗，共同构建起人体的三道免疫防线，将病菌在第一时间消灭，以免对人体造成更大的伤害。如果T淋巴细胞亚群无法正常发挥作用，或是因为拮据作用导致人体的免疫系统紊乱，免疫应答的过程受到诸多阻碍，必然将会使得人体发生免疫病理的变化，整个免疫机制都会出现功能上的错乱，严重时会威胁人体的正常生命安全。在医学研究的过程中一般会用CD3+T细胞数量来表示全T细胞数量，用CD4+T细胞数量来表示辅助性T细胞数量，而抑制和细胞毒性T细胞通常会用CD8+T细胞数来表示。经过长期的医学研究实验后发现，在所有动物的T细胞亚群当中，如何保持CD4+以及CD8+的数量以及比例的稳定对于调节整个生物免疫系统发挥着不可替代的作用。除了受外来病菌的干扰以外，CD4+以及CD8+T细胞能够相互抑制、辅助，这是维持免疫系统平衡的关键。相关医学研究人员在实验的过程中发现当CD4+T细胞受到外来抗原的入侵后会迅速做出免疫应答，产生一定数量的淋巴因子，向人体内的淋巴细胞发出讯号，使其能够分裂出T细胞、B细胞等免疫细胞群。如果2型糖尿病患者长期都处于高糖状态，必然会诱发心、脑、肝脏等器官的并发症，严重时甚至会造成心、肺、肾等内脏器官的感染，诱发酮症酸中毒，导致2型糖尿病患者死亡。这些病症的出现都与患者紊乱的免疫机制有着直接的联系[14-15]。本研究在研究的过程中重点对2型糖尿病胰岛素抵抗患者和正常人群β细胞功能情况以及空腹血清白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）、肿瘤坏死因子（TNF-α）及T淋巴细胞亚群的变化做出分析，炎症反应在2型糖尿病发生、发展中的作用及其与2型糖尿病危险因素关系的研究受到广泛关注，炎症细胞因子可能参与代谢综合症、2型糖尿病、胰岛素抵抗的发生发展。我们通过观察2型糖尿病患者的一些细胞因子变化，分析2型糖尿病伴胰岛素抵抗与细胞因子、T淋巴细胞亚群的相关性，以期为临床应用提供更多的实验依据。2 材料与方法材料与方法1病例选择分组与标本收集1.1病例选择病例选择：2017年1月至7月期间收治的78例初诊2型糖尿病患者，纳入标准：选择2017年1月至2017年6月淄博市第一医院门诊就医以及在该医院住院治疗的所有2型糖尿病患者。每一名患者空腹血糖≥7.0mmol/L。餐后血糖或随机血糖≥11.1mmol/L；所有的患者均不存在严重的慢性并发症、无胰岛素史以及无酮症史，没有甲状腺疾病的重大疾病。经过检测所有的患者体内的谷氨酸脱羧酶抗体以及胰岛素自身抗体均为阴性。根据患者是否具有家族史分为家族史组48例以及无家族史组30例。家族史组男性患者22例，女性患者26例，年龄（57.9±1.6）岁，无家族史组男性患者13例，女性患者17例，年龄（59.0±1.2）岁。另选择同期到医院接受健康体检的健康人群40例，其中根据患者是否具有家族遗传病分为，家族史正常对照组10例[男性4例，女性6例，年龄（58.0±1.0）]，无家族史正常对照组30例[男性13例，女性17例，年龄（59.3±1.8）]。所有患者都知情同意。1.2标本收集在患者入院后第2天清晨抽取空腹静脉血至EDTA抗凝管和惰性分离胶促凝管中，每管各抽取3ml，颠倒混匀；正常对照组为健康体检者，每管各抽取3ml，颠倒混匀。立即检测血糖、口服葡萄糖耐量试验、糖化血红蛋白、胰岛素、T淋巴细胞亚群。IL-6、IL-8、TNF-α标本离心（3000rpm离心5min），用移液器吸取上层血清，转移分装至1.5mlPE管中，-80℃冷冻保存，待标本采集全后统一检测。2主要仪器与试剂2.1主要试剂（1）人白细胞介素6（IL-6）ELISA检测试剂盒厂商：上海乔羽生物科技有限公司，试剂组成如下：微孔酶标板：12孔×8条标准品（48pg/ml）0.6ml×1标准样品稀释液6ml×1标准样本稀释液6ml×1检测抗体-HRP10ml×1清洗缓冲液25ml×13 青岛大学硕士学位论文底物A6ml×1底物B6ml×1终止液6ml×1（2）人白细胞介素8（IL-8）ELISA检测试剂盒厂商：上海乔羽生物科技有限公司，试剂组成如下：微孔酶标板：12孔×8条标准品（48pg/ml）0.6ml×1标准样品稀释液6ml×1标准样本稀释液6ml×1检测抗体-HRP15ml×1清洗缓冲液25ml×1底物A6ml×1底物B6ml×1终止液6ml×1（3）肿瘤坏死因子（TNF-α）ELISA的检测试剂盒微孔酶标板：12孔×8条标准品（48pg/ml）0.6ml×1标准样品稀释液4ml×1标准样本稀释液12ml×1检测抗体-HRP10ml×1清洗缓冲液20ml×1底物A6ml×1底物B6ml×1终止液6ml×1（4）胰岛素测定试剂盒微粒子6.6ml×1结合物5.9ml×1（5）血糖测定试剂盒PIPES缓冲液（pH7.6）24.0mmol/LATP≥2.0mmol/LNAD+≥1.32mmol/LMg2+2.37mmol/L己糖激酶≥0.59kU/LG6P-DH≥1.58kU/L4 材料与方法防腐剂（6）糖化血红蛋白测定试剂盒清洗缓冲液12瓶×2000ml清洗缓冲液21瓶×1000ml洗液/稀释液1瓶×1600ml分析柱1个软盘1个（7）其他试剂及耗材CD4流式抗体CD8流式抗体CD3流式抗体多项目手工稀释液预激发液激发液清洗缓冲液流式管购于BD公司25%盐酸精氨酸2.2主要仪器设备医用台式低俗离心机冰箱超低温冰箱高压灭菌锅涡旋震荡器酶标仪罗氏E601化学发光仪器BIO-RADDH-10型糖化血红蛋白分析仪贝克曼全自动生化分析仪AU5821流式细胞仪冰箱37℃恒温箱移液器5 青岛大学硕士学位论文3实验方法与步骤3.1治疗方法两组正常对照组人群：经过严格的身体检查和详细的实验室检查以排除一切可能影响葡萄糖耐量的情况，通过精氨酸刺激实验评估正常对照组的β细胞功能。评估方法：30s内静脉注射25%20ml盐酸精氨酸（上海第一生化制药公司生产），在注射前及注射后2、3、6min测血糖及胰岛素水平。2型糖尿病的两组患者在两周内通过持续皮下胰岛素注射进行胰岛素强化治疗以达到和维持良好的血糖控制，要求空腹血糖水平<5.6mmol/L，餐后血糖水平<7.8mmol/L。无其他药物辅助治疗，胰岛素强化治疗结束后第二天可能会对血糖和胰岛素产生影响，因此在治疗前以及治疗后重新评估患者的β细胞功能情况。3.2患者外周血中IL-6的检测（1）检测方法：ELISA-双抗体夹心法实验原理本研究经过多方面的考虑后最终决定通过酶联免疫吸附试验双抗体夹心法（一步法）来完成血清IL-6含量的检测工作。在实验的过程中需要先把IL-6注入到预先准备捕获抗体的包被微孔，然后按照实验设计方案向包被微孔中依次注入标本、标准品以及用HRP标记的检测抗体，在实验条件下进行温育，然后洗涤。使用底物TMB对样本进行染色操作，成功染色的样本最终会在酸的作用下转变成黄色。经过多次实验发现，样本显色后的深浅与之前添加的人IL-6的多少有关，IL-6越多，颜色越深。最后使用酶标仪在450nm的波长条件下完成样本吸光度的测试，并且对样品的浓度做出准确的计算。（2）实验操作步骤①将标本从冷冻冰箱血清取出融解，平衡至室温，待用。②试剂准备：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温，按照说明书对标准品进行稀释。③在实验条件下将样本静置20min后取出所需数量的板条，余下的板条密封后放回，在4℃条件下静置。④根据实验要求设置标准品孔以及样本孔，在每一个标准品孔中添加浓度不同的标准品50μl；⑤将待测样本注入到待测样本孔中，然后将样本稀释液注入到样本孔中；⑥将用过氧化物酶标记过的检测抗体分别注入到标准品孔以及样本孔中，密封，在37℃条件下用水浴锅或恒温箱培育，大约1h取出。⑦用纸片吸干样品孔以及标准品孔周围多余的水滴，然后注入洗涤液，静置1min后甩干净，用吸水纸清洁，反复多次操作。6 材料与方法⑧把底物A、B加入到孔中，在37℃避光条件下培育15min。⑨将终止液注入到孔中，15min后液体由蓝色或浅蓝色变成黄色。轻轻震荡酶标板，充分混匀孔内液体。⑩酶标仪测定在450nm波长处各孔的OD值。各孔读数减去空白孔读数。绘制标准曲线，以读取得OD值作为横坐标，用所有标准品的浓度作为纵坐标，绘制标准曲线，得出计算公式。根据计算公式计算各样品孔的IL-6的含量。（3）实验注意事项①血清标本制备过程，需注意避免溶血，红细胞溶血的可能会释放出含有过氧化物酶活性的物质，影响检测结果。②冷冻的血清恢复至室温后，应轻缓地充分混匀，避免产生气泡，可来回颠倒混匀，不能在混匀器上强烈振荡。另外有沉淀或混浊的标本应该先过滤或离心，使标本澄清后再进行检测。③反复冻融会降低抗体的效果价，因此应当避免标本测定前反复冻融。④加样时必须所加物加在板孔的底部，不能产生气泡，避免液体粘挂在侧壁，并且要防止液体外溅。⑤注意样本加样，避免交叉污染的发生。⑥洗板时每次都要将洗涤液加满板孔，间歇摇动1min。⑦将样本试剂盒在2-8℃条件下平衡保存大约20min后取出。在取出试剂盒的过程中可能会发现浓缩洗涤液存在结晶现象，对实验并无影响，可照常进行，但需要先对试剂盒进行加入使结晶溶解。⑧所有不会立即使用到的板条都要及时的放到自封袋中密封保存，以免被污染。⑨本实验将标准品稀释液当作对照组，并且在使用的过程中不需要再次稀释，随取随用即可。⑩按照实验要求以及顺序完成恒温培育。实验中可能使用到的液体组分取出时都要充分摇匀，以免造成实验结果出现偏差。3.3外周血中IL-8的检测（1）检测方法：ELISA-双抗体夹心法实验原理本研究经过多方面的考虑后最终决定通过酶联免疫吸附试验双抗体夹心法（一步法）来完成血清IL-8含量的检测工作。在实验的过程中需要先把IL-8注入到预先准备的用以存纳捕获抗体的包被微孔，然后按照实验设计方案向包被微孔中依次注入标本、标准品以及用HRP标记的检测抗体，在实验条件下进行温育，然后洗涤。使用底物TMB对样本进行染色操作，成功染色的样本最终会在酸的作用下转变成黄色。经过多次实验发现，样本显色后的深浅与之前添加的人IL-8的多少有关，7 青岛大学硕士学位论文IL-8越多，颜色越深。最后使用酶标仪在450nm的波长条件下完成样本吸光度的测试，并且对样品的浓度做出准确的计算。（2）实验操作步骤①将标本从冷冻冰箱血清取出融解，平衡至室温，待用。②试剂准备：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温，按照说明书对标准品进行稀释。③在实验条件下将样本静置20min后取出所需数量的板条，余下的板条密封后放回，在4℃条件下静置。④根据实验要求设置标准品孔以及样本孔，在每一个标准品孔中添加浓度不同的标准品50μl；⑤将待测样本注入到待测样本孔中，然后将样本稀释液注入到样本孔中；⑥将用过氧化物酶标记过的检测抗体分别注入到标准品孔以及样本孔中，密封，在37℃条件下用水浴锅或恒温箱培育，大约1h取出。⑦用纸片吸干样品孔以及标准品孔周围多余的水滴，然后注入洗涤液，静置1min后甩净，用吸水纸清洁，反复多次操作。⑧把底物A、B加入到孔中，在37℃避光条件下培育15min。⑨将终止液注入到孔中，15min后液体由蓝色或浅蓝色变成黄色。轻轻震荡酶标板，充分混匀板孔内液体。⑩酶标仪测定在450nm波长处各孔的OD值。各孔读数减去空白孔读数。绘制标准曲线，以读取得OD值作为横坐标，用所有标准品的浓度作为纵坐标，绘制标准曲线，得出计算公式。根据计算公式计算各样品孔的IL-8的含量。（3）实验注意事项同IL-6的检测注意事项。3.4患者外周血中TNF-α的检测（1）检测方法：ELISA-双抗体夹心法实验原理本研究经过多方面的考虑后最终决定通过酶联免疫吸附试验双抗体夹心法（一步法）来完成血清TNF-α含量的检测工作。在实验的过程中需要先把TNF-α注入到预先准备的捕获抗体的包被微孔，然后按照实验设计方案向包被微孔中依次注入标本、标准品以及用HRP标记的检测抗体，在实验条件下进行温育，然后洗涤。使用底物TMB对样本进行染色操作，成功染色的样本最终会在酸的作用下转变成黄色。经过多次实验发现，样本显色后的深浅与之前添加的人TNF-α的多少有关，TNF-α越多，颜色越深。最后使用酶标仪在450nm的波长条件下完成样本吸光度的测试，并且对样品的浓度做出准确的计算。（2）实验操作步骤8 材料与方法①将标本从冷冻冰箱血清取出融解，平衡至室温，待用。②试剂准备：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温，按照说明书对标准品进行稀释。③在实验条件下将样本静置20min后取出所需数量的板条，余下的板条密封后放回，在4℃条件下静置。④根据实验要求设置标准品孔以及样本孔，在每一个标准品孔中添加浓度不同的标准品50μl；⑤将待测样本注入到待测样本孔中，然后将样本稀释液注入到样本孔中；⑥将用过氧化物酶标记过的检测抗体分别注入到标准品孔以及样本孔中，密封，在37℃条件下用水浴锅或恒温箱培育，大约1h取出。⑦用纸片吸干样品孔以及标准品孔周围多余的水滴，然后注入洗涤液，静置1min后甩净，用吸水纸清洁，反复多次操作。⑧把底物A、B加入到孔中，在37℃避光条件下培育15min。⑨将终止液注入到孔中，15min后液体由蓝色或浅蓝色变成黄色。轻轻震荡酶标板，充分混匀板孔内液体。⑩酶标仪测定在450nm波长处各孔的OD值。准确读取各孔的数值然后减去空白孔的数值。按照实验要求绘制标准曲线，以读取得OD值作为横坐标，用所有标准品的浓度作为纵坐标，绘制标准曲线，得出计算公式。根据计算公式计算各样品孔的TNF-α的含量。（3）实验注意事项同IL-6的检测注意事项。3.5外周血中T淋巴细胞亚群的检测（1）检测方法：流式细胞术实验原理本实验使用的方法是流式细胞技术。将制备好的细胞与抗体CD4、CD3、CD8、CD45单抗充分孵育后，细胞表面相应的分子与带荧光的抗体分子相互结合，通过流式细胞仪，按照荧光的强弱程度将CD4、CD3、CD8阳性细胞区分出来。（2）实验操作步骤①将CD3/CD8/CD45/CD4抗体、PBS缓冲液及红细胞裂解液从4℃冰箱取出，平衡至室温，待用。②将标本颠倒混匀，待用。③取流式管，并做标记，然后每管依次加入CD3/CD8/CD45/CD4抗体10μl，将外周血颠倒混匀，吸取50μl混匀的外周血加入到流式管中。将加样后的流式管放在混匀器上轻轻震混匀，并放置于室温避光孵育20min，待孵育完毕后，向每个流式管中加入红细胞裂解液，每管加入500μl，轻轻混匀，于室温下裂解10min。向每个流式管9 青岛大学硕士学位论文中加入500μlPBS，继续室温避光孵育10min，涡旋混匀，室温暗箱静置20min至完全溶血，涡旋混匀。④打开电脑主机，打开流式细胞仪开关，待仪器稳定后，打开软件。待四个通道都稳定后便可上机检测，将获得的细胞悬液用单激光4色流式细胞仪进行检测，使用中速测定，每管收集3000个细胞。（3）注意事项①加抗体一定要加在流式管的底部，避免吹打起气泡。②标本一定要加在底部与抗体混匀，切勿粘在流式管壁上。③要充分混匀标本与抗体，需避光孵育。④细胞悬液处理完毕上机前需用滤膜过滤，防止堵塞流式上样针。3.6外周血中血糖的检测（1）检测方法：己糖激酶法检测原理在有三磷酸腺苷（ATP）和镁离子、钠离子等多种长效离子存在的情况下会使得葡萄糖在极短的时间内被己糖激酶（HK）迅速磷酸化，脱氢加磷使得原本的葡萄糖被取代为二磷酸腺苷。在此过程中游离在液体中的NAD+被氢原子还原为NADH。ATP的吸光度如果是在340nm的条件下最终的生成量与样本溶液中的葡萄糖浓度直接成正比相关。（2）实验操作步骤①标本血清获得：采集样本，离心取血清，立即检测。②试剂准备：将试剂盒从冰箱中取出，恢复至室温后，待用。③检查血清分离状态，编号，在生物安全柜内开盖，然后按顺序置标本架上。④将标本架置于贝克曼AU5821进样轨道上，点击开始，检测结果自动回传LIS系统。（3）实验注意事项①血清标本制备过程，需注意避免黄疸、溶血和脂血。黄疸、溶血和脂血可对测定产生一定的影响，分别可通过作血清空白和超速离心的方法消除干扰。②如果实验中所需的样品浓度超出了分析范围，可以选择使用一定浓度的生理盐水做稀释。3.7患者外周血中糖化血红蛋白的检测（1）检测方法：离子交换高效液相色谱法实验原理本研究在实验过程中所使用到的用于检测BIO-RAD以及DH-10型糖化血红蛋白A1c的测定仪近些年来受到诸多医学研究人员的认可，是一种推广十分迅速的台10 材料与方法式仪器。该仪器主要是利用离子交换高效液相色谱法完成对血红蛋白的测定，测定结果基本不会出现误差，效率较高。实验所测的样品标本完全可以使用生理盐水进行稀释到测定范围以内后，将其注入到测定仪的分析柱中。将成功处理的待测样本直接注入到分析柱，测定仪在将样品稀释以后会传送到光感测量计，对样品在415nm条件下的吸光情况做进一步测量。（2）实验操作步骤①标本全血获得:采集2mlEDTA抗凝血，待用。②试剂准备：确认每瓶试剂量大于1/5，废液桶（位于废液桶橱子内）小于1/3；每200人份更换缓冲液，需要将Buffer1水平数Reset到200。③将编号的原始真空采血管（2mlEDTA抗凝血）放入标本架中，将该样本架从右侧小门插入；④在标本架前5个位置放盛有1.5ml5%次氯酸钠的紫色标本管，后5个位置放盛有1.5ml去离子水的紫色标本管；⑤待右侧出现<编辑>，手工输入样本号；点<开始>开始；⑥结果手工记录。（3）实验注意事项①仪器在不使用时保持开机或待机状态；②检测前请充分检查仪器及试剂状态;③下列情况关机：实验硬性要求需要更换特定的系统零件；当前位置影响实验的正常进行需要移动到其他位置；实验过程突然断电。3.8患者外周血中胰岛素的检测（1）检测方法：化学发光微粒子免疫检测法实验原理胰岛素项目采用一步法免疫检测。将样本、胰岛素抗体包被的顺磁性微粒子和吖啶酯标记的胰岛素抗体结合物混合。样本中的胰岛素与胰岛素抗体包被的微粒子以及吖啶酯标记的胰岛素抗体结合物混合。样本中的胰岛素与胰岛素抗体包被的微粒子相结合。用标准洗涤液完成冲洗后，按照实验要求把预激发液以及激发液注入到充分混合的溶液中，然后对溶液内的化学发光反应做进一步的测定。如果实验过程没有受到外来因素的影响，样本溶液中的胰岛素含量经过测定一般会与利用光学系统检测的RLUs值呈正相关。（2）实验操作步骤①标本血清获得：将血清从冷冻冰箱取出融解，平衡至室温，待用②试剂准备：将试剂盒从冰箱中取出，取出立即使用。11 青岛大学硕士学位论文③第一次将胰岛素测定试剂盒装机前，需要充分混匀微粒子试剂，使长期沉淀下来的微粒子重新悬浮。第一次装载使用微粒子试剂后，不再需要进一步混合。④装载试剂到指定试剂盒。⑤定位样品架，使其ID标签位于托盘前部，即把手所在处。⑥确认样品架与托盘底部持平。⑦确认需要区下方指示该区可用的两个指示灯均关闭。⑧将架托盘放到区前部，并用调整导标对准托盘。⑨将架托盘推入区内，直至绿色指示灯亮起。⑩按下RUN启动，胰岛素项目通过四参数Logistic曲线拟和数据约简法生成一条校准曲线并储存结果。（3）实验注意事项①胰岛素测定试剂盒必须在2-8℃竖直向上储存，取出后可立即使用。②按照指导储存和操作时，试剂在效期内保持稳定。③如果微粒子试剂瓶在脱离系统冷藏储存时没有竖直向上放置，那么必须丢弃该试剂盒。④冷冻的血清恢复至室温后，应轻缓地充分混匀，避免产生气泡，可来回颠倒混匀，不能再混匀器上强烈振荡。另外有沉淀或混浊的标本应该先过滤或离心，使标本澄清后再进行检测。⑤为保证检测结果准确，样本应不含纤维蛋白，红细胞或其他颗粒物质。⑥样本采集后应尽快检测，否则红细胞中的胰岛素降解酶会导致检测值偏低。⑦融化后的样本必须充分混匀。如果融化的样本含有颗粒物质、外观浑浊或呈絮状，应在检测前离心，以确保检测结果的一致性。避免反复冻融。4统计学分析相关数据均在统计软件SPSS22.0中统计分析，采用t检验分析计量资料，经过分析比较后P<0.05表示差异显著。12 结果结果1治疗前各组基础数据比较及第一时相的胰岛素分泌情况比较共有78例初诊2型糖尿病患者和40例健康的志愿者完成了此次试验。他们的基础数据统计详见表1。在治疗前，记录各组性别、年龄、体重指数、收缩压、舒张压，各组之间上述各项指标无统计学差异。FH+DM组和FH-DM组HbA1c、血糖及HOMA2-IR水平均高于各自正常对照组（P<0.05）；FH+DM组和FH-DM组HOMA2-%β明显低于各自正常对照组（P<0.01）；但FH+DM组和FH-DM组之间HbA1c、血糖、HOMA2-%β及HOMA2‑IR比较差异均无统计学意义（P>0.05）；FH-对照组除HOMA2-%β要高于FH+对照组（P<0.05）外，其它指标两组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。表1治疗前各组基础数据比较(x±s)项目FH+DM组FH-DM组FH+对照组FH-对照组男/女（n）22/2613/174/613/17年龄（岁）57.9±1.659.0±1.258.0±1.059.3±1.8体重指数BMI（kg/m2）27.04±5.8026.80±3.5326.76±3.6527.30±2.39收缩压SBP（mmHg）131±15129±15128±15130±19舒张压DBP（mmHg）86±1084±1084±1185±11糖化血红蛋白8.34±2.10a8.51±2.37a5.21±1.195.39±1.31HbA1c（%）空腹血糖10.48±3.68a9.94±1.99a5.22±0.465.15±0.50FPG（mmol/L）餐后血糖13.67±4.35a13.16±6.24a6.35±1.566.84±1.24PPG（mmol/L）胰岛素抵抗指数4.71±1.10a4.70±0.90a2.51±0.662.43±0.42（HOMA2-IR）胰岛β细胞功能指数16.20±0.60b15.92±0.53b70.91±15.3278.67±16.84c（HOMA2-%β）注：与各自正常对照组比aP<0.05；与各自正常对照组比bP<0.01；与FH+对照组比cP<0.05。13 青岛大学硕士学位论文刺激前（即0min），FH+DM组和FH-DM组空腹胰岛素水平要明显低于各自正常对照组（P<0.01）；但FH+DM组和FH-DM组之间差异无统计学意义（P>0.05）。注射精氨酸刺激后，2-3分钟胰岛素分泌达到最高水平，此后胰岛素水平开始下降。见表2。表2刺激前后各组胰岛素分泌情况比较(x±s)组别0min1min2min3min6minFH+对照组7.5±2.279.6±2.610.2±310.7±49.5±3FH+DM组4.0±2.3a7.8±5.09.8±5.19.2±37.8±5FH-对照组7.6±2.09.7±2.510.2±310.6±49.4±3FH-DM组4.3±2.6a9.5±2.210.5±6.110.8±59.8±3注：与各自正常对照组比aP<0.01；FH+DM组和FH-DM组之间无显著差异，P>0.05；FH+对照组与FH-对照组之间无显著差异，P>0.05。2持续皮下胰岛素输注对血糖控制的影响持续皮下胰岛素输注治疗之前，2型糖尿病组血糖水平很高，FH+DM组平均空腹血糖水平为10.48±2.68mmol/L，FH-DM组平均空腹血糖水平为9.94±1.99mmol/L；此外，FH+DM组平均餐后血糖水平为13.67±2.35mmol/L，FH-DM组平均餐后血糖水平为13.16±3.21mmol/L。经过持续皮下胰岛素输注治疗，所有的患者血糖都在6.2±3.6天内得到很高的控制，空腹血糖水平：FH+DM组10.48±2.68对比5.38±0.61mmol/L；FH-DM组9.94±1.99对比5.56±1.77mmol/L；餐后血糖水平：FH+DM组13.67±2.35对比6.89±1.05mmol/L；FH-DM组13.16±3.21对比6.76±0.43mmol/L，都有明显的下降（P<0.01）。见表3，图1。表3持续皮下胰岛素输注（CSII）后2型糖尿病患者的血糖变化(x±s)FH+DM组FH-DM组参数治疗前治疗后治疗前治疗后空腹血糖FPG（mmol/L）10.48±2.685.38±0.61a9.94±1.995.56±1.77b餐后血糖PPG（mmol/L）13.67±2.356.89±1.05a13.16±3.216.76±0.43b注：FH+DM组与治疗前aP<0.01；FH-DM组与治疗前bP<0.01。14 结果注：**P<0.01图1持续皮下胰岛素输注（CSII）后2型糖尿病患者的血糖比较3持续皮下胰岛素输注对胰岛素抵抗和β细胞功能的影响治疗结束后的第二天，FH+DM组和FH-DM组空腹胰岛素水平均低于治疗后水平（FH+DM组7.3±2.5mIU/L对比15.3±2.5mIU/L；FH-DM组7.3±2.0mIU/L对比17.0±2.3mIU/L）（P<0.01）；FH+DM组和FH-DM组HOMA2-IR均低于持续皮下胰岛素输注前数值（FH+DM组4.7±1.1对比3.5±0.6；FH-DM组4.7±0.9对比3.0±0.5）（P<0.05）；FH+DM组和FH-DM组HOMA2-%β均高于治疗前数值（FH+DM组76.6±17.7对比16.2±0.6；FH-DM组75.3±15.6对比15.9±0.5）（P<0.01），但FH+DM组和FH-DM组两组之间无论治疗前、治疗后比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见表4，图2，图3。表4治疗前后两组2型糖尿病患者胰岛β细胞功能状态改善情况比较(x±s)指标FH+DM组FH-DM组治疗前治疗后治疗前治疗后空腹胰岛素（mIU/L）7.3±2.515.3±2.5a7.3±2.017.0±2.3bHOMA2-IR4.7±1.13.5±0.6c4.7±0.93.0±0.5dHOMA2-%β16.2±0.676.6±17.7a15.9±0.575.3±15.6b注：FH+DM组与治疗前aP<0.01；FH-DM组与治疗前bP<0.01；FH+DM组与治疗前cP<0.05；FH-DM组与治疗前dP<0.05。15 青岛大学硕士学位论文注：**P<0.01；*P<0.05图2治疗前后两组2型糖尿病患者空腹胰岛素和HOMA2-IR状态改善情况比较注：**P<0.01图3治疗前后两组2型糖尿病患者胰岛HOMA2-%β状态改善情况比较16 结果4外周血清中细胞因子的变化治疗前，FH+DM组和FH-DM组血清TNF-α、IL-6及IL-8水平显著高于各自正常对照组，差异均具有统计学意义（P<0.01）；但三种细胞因子FH+对照组与FH-对照组比较、FH+DM组与FH-DM组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。如表5，图4，5，6。表5治疗前各组血清细胞因子水平比较(x±s)指标FH+对照组FH-对照组FH+DM组FH-DM组TNF-αμg/ml1.22±0.411.21±0.511.92±0.42a2.01±0.53aIL-6pg/ml104.13±19.01105.21±20.03135.62±14.04b136.31±20.07bIL-8pg/ml120.21±15.23126.14±11.43160.33±15.42b162.45±14.06b注：与各自正常对照组比aP<0.01；与各自正常对照组比bP<0.05；FH+DM组和FH-DM组之间无显著差异，P>0.05；FH+对照组与FH-对照组之间无显著差异，P>0.05。注：**P<0.01图4各组TNF-α结果比较17 青岛大学硕士学位论文注：*P<0.05图5各组IL-6结果比较注：*P<0.05图6各组IL-8结果比较18 结果经过治疗后2型糖尿病组患者血清中TNF-α、IL-6和IL-8水平均显著降低，FH+DM组和FH-DM组三种细胞因子与各自治疗前比较差异均具有统计学意义（P<0.05）；但治疗后FH+DM组与FH-DM组三种细胞因子比较差异均无统计学意义（P>0.05）。如表6，图7，图8。表62型糖尿病组治疗前后血清细胞因子水平比较(x±s)指标FH+DM组FH-DM组治疗前治疗后治疗前治疗后TNF-αμg/ml1.92±0.421.54±0.41a2.01±0.531.62±0.31bIL-6pg/ml135.62±14.04115.63±15.02a136.31±20.07116.64±16.02bIL-8pg/ml160.33±15.42139.90±12.11a162.45±14.06126.53±9.64b注：FH+DM组与治疗前aP<0.05；FH-DM组与治疗前bP<0.05。注：*P<0.05图7各组细胞因子水平比较19 青岛大学硕士学位论文注：*P<0.05图8各组TNF-α水平比较5外周血中T淋巴细胞亚群的变化FH+DM组和FH-DM组CD3+T细胞数、CD4+T细胞数、CD4+T细胞/CD8+T细胞比值均低于正常对照组，CD8+T细胞数要高于正常对照组，与正常对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）；但上述指标FH+对照组与FH-对照组比较、FH+DM组与FH-DM组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。如表7，图9。表7各组T淋巴细胞亚群及CD4+/CD8+T细胞比值比较(x±S)指标FH+对照组FH-对照组FH+DM组FH-DM组CD3+T细胞数量60.62±2.3161.73±8.4654.14±7.57a56.25±5.23aCD4+T细胞数量39.21±3.0238.94±6.2733.16±6.12a35.22±4.21aCD8+T细胞数量24.05±3.0224.06±3.1527.87±3.63a27.25±3.27aCD4+/CD8+比值1.63±0.211.65±0.271.47±0.21a1.29±0.25a注：与各自正常对照组比aP<0.05；FH+DM组和FH-DM组之间无显著差异，P>0.05；FH+对照组与FH-对照组之间无显著差异，P>0.05。20 结果2101.012101.01100.00%54.17%100101102103104100101102103104CD45-PerCPCD3-FITC2101.012101.011.03%26.41%35.26%100101102103104100101102103104CD3-FITCCD3-FITC图92型糖尿病患者外周血T淋巴细胞亚群比例21 讨论讨论2型糖尿病患者在临床上的表现通常为高血糖，如果不能将患者的血糖稳定在一个正常范围，必然会使得患者的各个免疫器官出现合并感染[16]。对2型糖尿病患者直接使用胰岛素强化治疗方案，是一种极为有效的应急治疗方案。通过胰岛素强化治疗方案的患者都能够在短时间内取得良好的治疗效果，血糖恢复平稳所用的时间极短，基本能够使得血糖维持在正常水平[17]。通过胰岛素强化治疗能够最大限度的防止2型糖尿病人出现微血管并发症。当就诊的患者经检测发现存在酮尿并且体型正常的患者中出现了高血糖症状，医生完全可以使用小剂量的胰岛素强化治疗，但是如果患者的症状十分严重，已经对患者的生命健康造成了威胁，应立即让患者住院接受胰岛素强化治疗，并且口服胰岛素，尽可能的让患者的血糖恢复正常水平，然后开展下一步治疗方案。在临床医学上，2型糖尿病人在整个治疗过程中出现低血糖的频率以及概率都高于1型糖尿病患者，这与前者胰岛素抵抗的病理相关。需要特别注意的是，如果使用的胰岛素剂量较大，应当安排医护人员实时观察患者的状况，以免患者出现动脉粥样硬化得不到有效缓解而危机生命健康[18]。由此可以确定在治疗2型糖尿病患者的过程中应当尽可能的先让患者的血糖恢复正常水平，然后开展下一步治疗方案。在住院治疗的过程中医生要根据不同患者的不同症状，制定具有针对性的治疗方案。在临床医学上将2型糖尿病归为治疗期较长并且没有有效治疗方案的一种全身性的疾病。在医学界普遍的认为患者糖耐量受损与病情的加重有关，同时会伴有进行性β细胞功能下降的症状[19-21]。葡萄糖激酶能够在胰岛β细胞膜上发挥着类似感受器的作用，进而促进β细胞的合成以及胰岛素的分泌，最终达到降低血糖含量的目的[22]。如果人体内的血糖长期处于高水平状态，必然会导致葡萄糖激酶感受器不能发挥正常作用，胰岛素合成也就相应的减少，血糖迅速升高。由于胰岛β细胞长期无法正常分泌胰岛素，会缩短该细胞的寿命，提早进入衰败期[23-24]。由此不难看出高血糖环境下对于β细胞来说会有毒性作用，这就要求医师在整个治疗过程中都要严格的控制患者的血糖水平，最大限度的阻止高血糖对β细胞正常功能的毒性作用。如果在治疗过程中出现胰岛β-细胞大量凋亡，即使患者的血糖水平恢复到正常数值，也无法修复高血糖环境下β-细胞出现的功能的损伤。通过胰岛素强化治疗能够有效的控制血糖水平，并且能够在短期内使得胰岛素释放曲线恢复到正常水准，除此以外，还能够使得血糖水平因为胰岛素抵抗的恢复而逐渐趋于稳定，并且胰岛β细胞分泌胰岛素的功能也向好的方向发展[25-26]。通过前文所述，对于2型糖尿病患者的治疗应当以改善血糖水平为目标，甚至可以通过强化治疗来恢复患者部分受损胰岛β细胞的基本功能。另外，根据研究结果来看，患者在接受强化治疗后，患者的血糖、胰岛素抵抗22 青岛大学硕士学位论文指数都有着明显的改善，因此可以确定胰岛素强化治疗对于2型糖尿病的应用有着十分显著的作用。在整个治疗的过程中医师要实时检测患者的血糖水平，以免患者的胰岛功能受损或出现其他并发症[27]。尽管近些年来关于2型糖尿病的研究已经持续多年，但是其病因、病理以及发病机制都尚未明了，而国外兴起的炎症学说在小范围内受到关注得到部分医学研究人员的认可。炎症学说将2型糖尿病当作是由细胞因子介导引发的炎症反应[28]。当患者体内的IR以及胰岛素分泌不足时会使得血糖水平快速升高，从而促使胰岛细胞在极短的时间内分泌高于平均水平的IL-6，过度激活B淋巴细胞以及T淋巴细胞，在受到其他细胞因子的作用后会产生毒作用，直接导致胰岛β细胞加快凋亡速度[29]。IL-6在临床医学中常被视为一种多功能的细胞因子，该因子的分泌与T细胞、巨噬细胞、上皮细胞等免疫群体有着直接的关联。IL-6可以通过释放继发性细胞因子或活化宿主细胞以直接或间接实现其效应，在免疫系统、造血系统、神经系统、肝脏代谢中均起重要作用。目前国内外的医学研究人员尚未掌握IL-6活性的改变真正原因，但对其进行推测后一致认为IL-6升高会导致β细胞的功能受损，与2型糖尿病的发病有直接的关联[30-31]。患者内皮细胞在缺氧的环境下会释放IL-8，诱导中性粒细胞的激活和定向迁移，是介导病理损伤的重要因子。研究表明，高血糖和高胰岛素血症对血管具有毒性，使内皮细胞缺氧，导致死亡，而缺氧条件下的内皮细胞可直接产生IL-8，也可以通过刺激中性粒细胞和单核细胞产生IL-8，导致IL-8急速升高，产生的大量IL-8又可以通过趋化或活化中性粒细胞，使它们释放溶酶体酶从而损伤了毛细血管，造成组织的损伤[32-33]。肥胖者即使是在健康的状况下其脂肪组织细胞TNF-α蛋白以及mRNA的表达依然要高于正常标准。研究发现TNF-α能够活化吞噬细胞，直接促进B细胞内的NOS以及NO数量的增加，在一定程度上有抑制胰岛素的效果；TNF-α能够充当人体免疫防线的重要介质，帮助人体构建生物防线，根据细胞受损的状况随时参与到机体的免疫病理损伤修复中，在免疫性疾病的防治研究中具有重要的临床价值。在正常情况下，具有抗肿瘤、抗感染的作用，但如持续释放或释放过多，或与其他细胞因子的关系失调，与会引起机体的发热等。TNF-α参与激活免疫细胞，从而促进炎性反应细胞的聚集黏附，导致微血管扩张，使其通透性增强，诱发了炎性反应[34-35]。在人体免疫系统中T淋巴细胞发挥着不可替代的作用，能够随时针对外来入侵病菌及时做出免疫应答。现代免疫学中一致认为人体的正常免疫离不开T淋巴细胞的调节，与CD4、CD8细胞相互制约，共同确保免疫平衡。本研究在进行一段时间的研究后发现，2型糖尿病患者CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD4+/CD8+比值明显降低，CD8+T细胞明显增多的情况，因此可以确定T细胞亚群丧失免疫功能与患者发病有直接的联系。CD3+T细胞数量来表示总T细胞数量，用CD4+T细胞数量来表示辅助性T细胞数量，而抑制和细胞毒性T细胞通常会用CD8+T细胞数量来表示。经过长期的23 讨论医学研究实验后发现，在所有动物的T细胞亚群当中，如何保持CD4+T细胞以及CD8+T细胞的数量以及比例的稳定对于调节整个生物免疫系统发挥着不可替代的作用。但目前并没有任何实质性的证据能够支持上述推测，但可以确定的是人体细胞免疫功能的异常化和2型糖尿病发病必然相关[36-37]。本研究显示，2型糖尿病组和正常对照组比较，患者体内的T细胞亚群与正常人相比有着非常明显的差距，表现在CD4+/CD8+的数量失衡，使得患者的免疫系统无法发挥正常的作用[38]。患者体内的CD3+T细胞数量减少，必然会使得体内能够参与构建免疫防线的T细胞也减少，直接使得人体的免疫系统出现漏洞。患者体内CD4+以及CD8+T细胞数量的减少可能与细胞免疫紊乱有着之间的关联[39]，CD4+/CD8+比值的降低是患者细胞免疫功能出现缺陷的重要指征，同时也表明当患者体内的CD4+/CD8+比例失调时，必然会导致机体免疫功能大幅度减弱，最终导致患者的免疫功能紊乱。因此确保CD4+/CD8+细胞比值的平衡能够帮助患者恢复正常的细胞免疫功能。24 结论结论1持续皮下胰岛素输注强化治疗是改善2型糖尿病患者胰岛β细胞相关指标及HOMA2-IR的有效手段。2血清IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平与2型糖尿病胰岛素抵抗密切相关，但与家族史无相关性。32型糖尿病患者存在T细胞亚群数量及CD4+T细胞/CD8+T细胞比值紊乱情况。25 参考文献参考文献[1]李润乔.初发圆型糖尿病患者胰岛素强化治疗对胰岛β细胞功能的影响探讨[J].中外医学研究，2011,9（27）：27-28.[2]盛志新，谢丹红，孙辽，等.T2DM患者血浆炎症因子水平与糖代谢及胰岛素抵抗的关系[J].中国糖尿病杂志，2012,4（2）：253-254.[3]LiY，XuW，LiaoZ，eta1．Inductionoflong-termglycemiccontrolinDewlydiagnosedtype2diabeticpatientsisassociatedwithimprovementofbetacel1function．DiabetesCare，2004，27：2597-2602．[4]BodeBW,SabbahHT,GrossTM,etal.Diabetesmanagementinthenewmillenniumusinginsulinpumptherapy.DiabetesMetabResRev,2002,18(suppl1):S14-S20.[5]KrameiCK,ZinmanB,RetnakaranR.Short-termintensiveinsulintherapyintype2diabetesmellitus:asystematicreviewandmetaanalysia.LancetDiabetesEndocrinol,2013,1(1):28-34.[6]DunningBE，GerichJE．Theroleofalpha-celldysregulationinfastingandpostprandialhyperglycemiaintype2diabetesandtherapeuticimplications．EndocrRev，2007，28：253-283．[7]KahnSE，ZraikaS，UtzschneiderKM，eta1．Thebetacelllesionintype2diabetes：therehastobeaprimaryfunctionalabnormality．Diabetologia，2009，52：1003-1012．[8]QuesadaI，TuduriE，RipollC，eta1．Physiologyofthepancreaticalpha-cellandglucagonsecretion：roleinglucosehomeostasisanddiabetes．JEndoerinol，2008．199：219．[9]DunningBE，GerichJE．Theroleofalpha-celldysregulationinfastingandpostprandialhyperglycemiaintype2diabetesandtherapeuticimplications．EndocrRev，2007，28：253-283．[10]郭航常宝成杨菊红,不同病程T2DM患者胰岛α及细胞功能评价。中华全科医师杂志,2013,l2：874-877.[11]魏雯，涂梅，陈彤,糖尿病及糖调节受损危险因素及胰岛β细胞功能分析,中华全科医学,2012,10:597-599.[12]WilsonPW，MeigsJB，SullivanL，eta1．Predictionofincidentdiabetesmellitusinmiddle-agedadults：theFraminghamOffspringStudy．ArchInternMed，2007，167：1068-1074．[13]HumphriesSE，GableD，CooperJA，eta1．CommonvarianlsintheTCFTL2geneandpredispositiontotype2diabetesinUKEuropeanWhites，IndianAsiansandAfro-Caribbeanmenandwomen．JMolMed(Ber1)，2006，84：1005-1014．26 青岛大学硕士学位论文[14]MccarthyMI．Genomics，type2diabetes，andobesity[J]．NEnglJMed，2010，363(24)：2339-2350．[15]IlkovaH，GlaserB，TuncaleA，eta1．Inductionoflong-terraglycoliccontrolinnewlydiagnosedtype2diabeticpatientsbytransientintensiveinsulintreatment．DiabetesCare，1997，20：1353．1356．[16]中华医学会糖尿病学分会.新诊断T2DM患者短期胰岛素强化治疗专家共识.中华医学杂志，2013，93：1524-1526.[17]中华医学会糖尿病学分会.中国T2DM防治指南(2013年版).中华内分泌代谢杂志，2014，3O：893-942.[18]LiuJ，LiuJ，FangD，eta1．Fastingplasmaglucoseafterintensiveinsulintherapypredictedlong-termglycemiccontrolinnewlydiagnosedtype2diabeticpatients[J]．EndocrJ，2013，60：725-732.[19]刘娟，JasmeenTuladhar，柯伟健，等.短期胰岛素泵强化治疗期间T2DM患者胰岛功能变化对预后的影响.中华糖尿病杂志，2014，6：293-298.[20]HuangZ，WangX，LiuJ，eta1．Short-termcontinuoussubcutane-ousinsulininfusioncombinedwithinsulinsensitizersrosiglita-zone，metformin，orantioxidantα-lipoicacidinpatientswithnewlydiagnosedtype2diabetesmellitus．DiabetesTechnolTher，2013，15：859869．[21]ParkS，ChoiSB．Inductionoflong-termnormoglycemiawithoutmedicationinKoreantype2diabetespatientsaftercontinuoussubcutaneousinsulininfusiontherapy．DiabetesMetabResRev，2003，19：124-130．[22]金爽.短期胰岛素泵强化治疗对不同病程2型糖尿病的疗效及安全性分析[D].大连：大连医科大学，2012：1-2.[23]SennJJ,KloverPJ,NowakIA,etal.Interleukninducescellularinsulinresistanceinhepatocytes[J].Diabetes,2002,51:3391-3399.[24]TakahanshinM,MasuyamQJ,IkedaU,etal.Effectsofendogenousendothelialinterleukin-8onneutrophilmigrationacrossanendothelialmonolayer[J].CardiovascRes,1995,29:670-675.[25]WengJ，LiY，XuW，eta1．Effectofintensiveinsulintherapyonbetacellfunctionandglycaemiccontrolinpatientswithnewlydiagnosedtype2diabetes：amulticentrerandomisedparallel—grouptria1．Lancet，2008，371：1753—1760．[26]KramerCK．ZinmanB．RetnakaranR．Shorttermintensivein～sulintherapyintype2diabetesmellitus：asystematicreviewandmeta～analysis．LancetDiabetesEndocrinol，2013，1：28—34．27 参考文献[27]LiuJ，LiuJ，FangD，eta1．Fastingplasmaglucoseafterintensiveinsulintherapypredictedlongtermglycemiccontrolinnewlydiagnosedtype2diabeticpatients．EndocrJ，2013，6O：725732．[28]ChenA，HuangZ，WanX，eta1．Attitudestowarddiabetesaf—fectmaintenanceofdrug—freeremissioninpatientswithnewlydiagnosedtype2diabetesaftershort-termcontinuoussubcuta—neousinsulininfusiontreatment．DiabetesCare，2012，35：474—481．[29]农天雷，曾鸿毅.TNF-α、IL-6、IL-8与DM2关系[J].放射免疫学杂志，2014,24（2）:140-141.[30]晏涛.早期胰岛素泵联合西格列汀强化治疗初诊断2型糖尿病的疗效及影响因素分析[J].实用临床医药杂志，2015,19（13）：12-15.[31]岳建美，井庆平．新诊断2型糖尿病患者胰岛素泵强化治疗血糖长期控制的效果及影响因素分析[J].中国糖尿病杂志，2014，22（11）：994.[32]郭建．甘精胰岛素联合阿卡波糖治疗初诊2型糖尿病的疗效观察[J].实用临床医药杂志，2012，16（13）：76.[33]刘红丽，郝建宁，王叶菊，等．影响新诊断型糖尿病患者短期胰岛素强化治疗后无药缓解的相关因素研究[J].实用临床医药杂志，2014，18（13）：23.[34]KrameiCK,ZinmanB,RetnakaranR.Short-termintensiveinsulintherapyintype2diabetesmellitus:asystematicreviewandmetaanalysia.LancetDiabetesEndocrinol,2013,1(1):28-34.[35]印永.2型糖尿病运用早期胰岛素强化治疗的效果观察[J].中国社区医师，2016,32（30）：59－60.[36]王保霖.早期胰岛素强化治疗新诊断2型糖尿病患者效果观察[J].中国社区医师,2016,32（29）:34－35.[37]王勇，李晶晶，曾刚沂.初诊与非初诊2型糖尿病患者短期胰岛素泵（CSII）强化治疗应用的胰岛素剂量比较[J].医学信息，2011，24（5）：1738.[38]林秀红,邱凯锋,徐明彤.短期胰岛素强化治疗对新诊断T2DM患者胰岛功能及胰岛素敏感性的影响[J].今日药学,2016,26（1）：22－26.[39]张婷，赵岚，徐国英，等.应用动态血糖监测系统评估不同病程2型糖尿病患者血糖变化的特点及临床意义[J].医学信息，2011，24（17）：574.28 综述综述胰岛素强化治疗对2型糖尿病胰岛细胞功能改善的研究进展摘要：国内外的相关医学研究人员普遍认为2型糖尿病在现代医学领域中是一种难以有效治愈的多基因遗传性疾病，其发病过程与病理在经过一段时间的研究后已经初步了解，年龄、不健康的饮食、生活习惯以及肥胖等客观因素都有可能会提高2型糖尿病的患病几率。部分研究人员还认为胰岛β细胞功能异常导致患者胰岛素抵抗从而诱发2型糖尿病。诸多医师在治疗的过程中十分依赖胰岛素强化治疗，能够在最短的时间内有效的增强的2型糖尿病患者β细胞的功能，且家族病史是2型糖尿病的一个重要的独立危险因素。因此研究有无糖尿病家族史的2型糖尿病患者之间胰岛素第一时相分泌的区别和用胰岛素强化治疗改善有无糖尿病家族史的2型糖尿病患者的β细胞功能方面的不同作用，为预防和治疗2型糖尿病提供重要的科学依据。关键词：2型糖尿病；β细胞；胰岛素现阶段国内外的医学研究人员一致认为2型糖尿病的发病受遗传因素、环境因素以及不良生活方式的影响较大，是一种难以治愈的代谢性疾病。2型糖尿病是一种慢性代谢性疾病，其在全球范围内的流行给患者和社会带来沉重负担，是威胁人类健康的公共卫生问题。该病在中老年群体中有着极高的发病率，占我国2型糖尿病患者的一半以上，目前病因不明确，与胰岛素分泌不足，抵抗伴胰岛素分泌失衡等有关，并且诸多医学研究人员在进行大量临床实验后发现胰岛β细胞分泌胰岛素的功能出现障碍是导致2型糖尿病发生的关键因素。国内外的相关医学研究人员普遍认为2型糖尿病在现代医学领域中是一种难以有效治愈的多基因遗传性疾病，其发病过程与病理在经过一段时间的研究后已经初步了解，年龄、不健康的饮食、生活习惯以及肥胖等客观因素都有可能会提高2型糖尿病的患病几率。胰岛β细胞功能的异常及胰岛素的抵抗是2型糖尿病发病的重要环节。研究证实，胰岛细胞早相分泌受损在高血糖发展的最初阶段就一直存在，与糖耐量正常导致糖耐量受损、2型糖尿病发展的转归有关，而且可以预测2型糖尿病的进程，是2型糖尿病发病的独立危险因素。一般来说，2型糖尿病的发病受遗传因素的影响最大，往往表现出家族聚集性。而胰岛β细胞出现功能障碍是检测2型糖尿病发病的重要指标。1胰岛细胞功能研究进展29 青岛大学硕士学位论文1.1胰岛α、β细胞调控机制血糖水平的稳定主要由胰岛α细胞分泌的胰高糖素和β细胞分泌的胰岛素共同参与调节。胰岛α、β细胞分泌模式的异常改变共同导致了2型糖尿病患者血糖的升高[1]。2型糖尿病患者体内的胰岛β细胞在高血糖的环境下其功能会出现障碍，具体表现为胰岛素分泌困难，并且发病时间越长，β细胞功能进行性减退，胰岛β细胞分泌受损导致人体对于胰高糖素的分泌控制减弱，使得患者在饭后血糖会迅速飙升[2-3]。在人体内环境中胰岛α细胞与β细胞互相协调，相互拮据，构成重要的负反馈调解系统。饭后随着葡萄糖的分解内环境中血糖的含量会迅速升高，胰岛素大量分泌，控制血糖含量[4]。与空腹相比，餐后30分钟迅速降低，餐后60分钟达最低，餐后180分钟升高至空腹水平[5]。胰岛素的快速分泌和胰升糖素的分泌抑制共同控制了血糖过度升高。2型糖尿病患者血糖升高的背后是胰岛α、β细胞分泌模式的异常改变[6]。2型糖尿病患者β细胞的分泌功能障碍会使得患者内环境中的胰岛素迅速减少，无法控制血糖的升降[7]，类似此患者的胰岛素早时相分泌的受损会直接导致第二时相的代偿性高分泌随β细胞功能的减退而抑制[8]；除此以外，人体对于血糖的控制减弱，胰高血糖素大量分泌，二者共同作用使得患者在饭后血糖水平突破正常水平[9-11]。近些年来关于2型糖尿病的研究报告一致认为患者体内缺乏胰岛素或者胰岛素抵抗减弱，导致胰高血糖素大量分泌，分解葡萄糖的速度过快，最终导致患者高血糖[12-13]。临床医学研究的过程中对正常人体进行检测发现，胰岛素的分泌呈双相。第一时相分泌能够直接的反映出胰岛β细胞的储备功能是否正常，第二时相分泌能够直接的反映出葡萄糖对β细胞合成胰岛素是否具备正常的刺激功能。研究发现，早期2型2型糖尿病患者通常表现为第一时相分泌功能受损[14-15]。1.2胰岛细胞功能评估在医学研究的过程中治疗人体胰岛素早期分泌功能通常都会采用静脉葡萄糖刺激法，但是该方法过于刺激人体，会使得人体内环境中的血糖迅速升高，因此不适用于高血糖的人群。但是该试验的基本不会出现不良反应，仅有部分患者会出现舌头短暂麻木、灼热感等[16]。精氨酸在正常情况下不会引起人体出现高血糖，主要是由于精氨酸能够同时刺激胰岛α及β细胞，使得控制血糖含量的两种激素保持在动态平衡中。（1）胰岛素敏感性的评估：HOMA，以胰岛素敏感指数[ISI，ISI=-ln（FI×FPG）]评价胰岛素敏感性。（2）胰岛素分泌的评估：HOMA-β=20×FINS/（FPG-3.5）；（3）胰岛β细胞功能评估：①以精氨酸刺激第一时相分泌功能。第一时相AIR的计30 综述算方法为：取1、3及6分钟胰岛素平均值减去空腹胰岛素值。第一时相C肽分泌（ACPR）的计算方法同AIR。②以OGTT胰岛素及C肽曲线下面（areaunderthecurve，AUC）代表胰岛B细胞第二时相分泌功能，反映胰岛素和胰高糖素水平。OGTT胰岛素AUC=0.5×10+I30+I60+I120+0.5×Il80（公式中代码分别代表OGTT各时间点的胰岛素值）。OGTTC肽AUC的计算方法同胰岛素AUC。研究人员发现，随着病程的延长，早时相胰岛素分泌明显受损，与病程≤1年患者相比，病程为5～10年的患者△I30/△G30下降约50%，而病程>10年患者的△I30/△G30仅相当于病程≤1年者的25%。与之相对应，第二时相的分泌也显示，与初发2型糖尿病患者相比，伴随着病程的延长，AUC出现不同程度下降，考虑这部分患者随病程越长，β细胞分泌功能逐渐减退[17]。从胰高糖素的分泌来看，随病程延长，空腹及餐后各时相胰高糖素均升高，且病程>10年的患者明显高于病程≤5年的患者，提示胰高糖素与早时相胰岛素分泌间的相互调节作用，所以如何使胰岛素分泌的第一时相得到修复和保护，将是治疗2型糖尿病的重点目标。此外，有研究者提出了葡萄糖处置指数的评估方法，能够将胰岛素抵抗所产生的干扰排除在外，进而准确的检测的β细胞功能[18-19]。2胰岛细胞功能改变的影响因素2.1遗传因素近些年来关于遗传因素对β细胞早相分泌功能所造成的影响的研究受到诸多医学研究人员的重视。部分研究报告表明，2型糖尿病后代与正常群体相比较出现胰岛β细胞功能缺陷的可能性更高。有研究[20-22]显示，如果在接受左旋精氨酸刺激后，有遗传背景的人群其胰岛素峰倍数与无遗传背景的人群相比较而言有明显下降。研究者认为2型糖尿病患者的直系亲属在临床上往往表现为胰岛素脉冲式分泌缺陷。研究人员在进行长期的走访调查后发现，有2型糖尿病遗传背景的家族往往能够推测出2型2型糖尿病的出现几率[23-24]。研究发现，TCF7L2的高危基因型和胰岛β细胞功能受损有直接的关联，但是和胰岛素抵抗却没有联系[25-26]。2型糖尿病作为一种受多种基因调控的代谢紊乱性疾病，其病因和发病机制十分复杂，目前尚未完全明确。近年来全基因组关联扫描（genomewideassociationscan，GWAS）的广泛应用使代谢性疾病的遗传因素检测得以深入研究，目前已确定30～40个基因位点与2型糖尿病相关，但这仅占发病机制的小部分（＜5%），其他遗传因素的作用尚不明确[27-28]。2.2胰岛素强化治疗近些年来围绕2型糖尿病展开的所有医学研究一致认为高血糖是治愈2型糖尿病患者最大的难题。自从我国的市场市场化经济迅速发展，市场经济体制愈发健全以31 青岛大学硕士学位论文来，我国人民的平均生活水平越来越高，在饮食上摄取的高糖、高胆固醇等亚健康食品直接导致国内2型糖尿病患者的数量在短时间内上升到了前所未有的水平。医学研究人员普遍认为2型糖尿病产生的根本原因是胰岛素分泌过程异常，出现胰岛素抵抗的情况，并且同时出现微生物感染，造成患者细胞免疫功能缺陷，甚至彻底瓦解，从而出现各类并发症较差感染，严重威胁患者的生命健康安全。研究者利用胰岛素强化治疗来尝试治愈2型糖尿病患者，在两周的治疗过程中有9例患者的病情明显好转[29-31]。研究小组尝试对大量的2型糖尿病患者做平行对照组研究，发现短期强化治疗具有良好的临床疗效[32-34]。研究人员表示胰岛素强化治疗能够在短时间内通过诱导2型糖尿病患者的血糖以恢复正常，表现为HOMA-IR得到明显改善[35-37]。胰岛素强化治疗改善β细胞功能的机制目前认为是由于外源性胰岛素替代治疗快速稳定地降低高血糖，清除“糖毒性”对β细胞功能的损害作用，并且通过抑制内源性胰岛素分泌使β细胞能充分地进行休息、调整以及修复，从而改善其胰岛素分泌功能[38]。国内的2型糖尿病研究分会建议医师对HbA1c大于9%的患者使用胰岛素强化治疗，2013版《中国2型糖尿病防治指南》对此提出了明确的意见。胰岛素强化治疗时应同一时间段对患者进行运动治疗和医学营养治疗；胰岛素剂量的具体调整方法参考2013版中国2型糖尿病防治指南。治疗后胰岛β细胞功能恢复尤其是胰岛素第一分泌时相重建和空腹血糖（FPG）水平降低是新诊断2型糖尿病患者病情缓解的独立预后因素[39]。短期胰岛素强化治疗能明显改善2型糖尿病患者的β细胞功能[40]，治疗期间C肽降低，治疗结束后可即刻恢复；治疗前残存β细胞功能较差的患者在强化治疗中C肽降低更明显，治疗后β细胞功能恢复也较差，提示这些患者可能需要较长时间的强化治疗；治疗前残存β细胞功能较好的患者，治疗期间C肽水平有相当程度的抑制，可能有助于治疗后β细胞功能的改善。研究者认为，FPG大于11.1mmol/L的2型糖尿病患者在接受一段时间的CSII强化治疗后HOMA-β、PI/I以及胰岛β细胞功能指标都有着显著的改善[41-43]。研究者发现在针对2型糖尿病患者进行一段时间的临床研究后发现胰岛素强化治疗无论是胰岛β细胞功能的改善还是IR方面都要比口服降糖药取得的疗效更好[44-47]。]研究显示，与单纯使用CSII相比而言，联用二甲双胍能够使胰岛β细胞功能指标得到极大的改善。研究人员[48]在分析91例2型糖尿病患者进行分析后发现，病程在七年左右的患者在接受短期CSII强化治疗以后百分之三十的患者的血糖水平都得到了缓解。研究人员利用CSII强化治疗后发现，病程八年以上的患者所取得的疗效比常规治疗组更加明显[49-50]。本研究在对CSII强化治疗进行一段时间的研究后认为该治疗方法可贯穿于2型32 综述糖尿病患者整个治疗过程。另外，使用CSII强化治疗所取得的效果以及血糖缓解率与患者的病程呈负相关[51-53]。临床医学研究过程中目前将2型糖尿病归为治疗期较长并且没有有效治疗方案的一种全身性的疾病[54]。相关医学研究人员尽管已经围绕此病症进行多年的临床医学研究，但是至今未能完全掌握其发病的原因[55]。在医学界普遍的认为患者糖耐量受损与病情的加重有关，同时会伴有进行性β细胞功能下降的症状[56]。国外相关医学研究实验室发现，葡萄糖激酶能够在胰岛β细胞膜上发挥着类似感受器的作用，进而促进β细胞的合成以及胰岛素的分泌，最终达到降低血糖含量的目的[57]。如果人体内的血糖长期处于高水平状态，必然会导致葡萄糖激酶感受器不能发挥正常作用，胰岛素合成也就相应的减少，血糖迅速升高。由于胰岛β细胞长期无法正常分泌胰岛素，会缩短该细胞的寿命，提早进入衰败期[58]。由此不难看出高血糖环境下对于β细胞来说会有毒性作用，这就要求医师在整个治疗过程中都要严格的控制患者的血糖水平，最大限度的阻止高血糖对β细胞正常功能的毒性作用如果在治疗过程中出现胰岛β细胞大量凋亡，即使患者的血糖水平恢复到正常数值，也无法修复高血糖环境下β细胞出现的功能的损伤。国外相关医疗报告中曾指出，通过胰岛素强化治疗能够有效的控制血糖水平，并且能够在短期内使得胰岛素释放曲线恢复到正常水准[59]，除此以外，还能够使得血糖水平因为胰岛素抵抗的恢复而逐渐趋于稳定，并且胰岛β细胞分泌胰岛素的功能也向好的方向发展。本研究在研究的过程中对患者的各项数值进行检测后发现，在空腹状态以及饭后患者的胰岛素水平较低，应当通过口服胰岛素进行快速治疗。通过前文所述，对于2型糖尿病患者的治疗应当以改善血糖水平为目标，甚至可以通过强化治疗来恢复患者部分受损胰岛β细胞的基本功能。另外，根据研究结果来看，患者在接受三个月的强化治疗后，无论是空腹还是饭后，患者的血糖、胰岛素抵抗指数都有着明显的改善，因此可以确定胰岛素强化治疗对于2型糖尿病的应用有着十分显著的作用。在整个治疗的过程中医师要实时检测患者的血糖水平，以免患者的胰岛功能受损或出现其他并发症。尽管近些年来关于2型糖尿病的研究已经持续多年，但是其病因、病理以及发病机制都尚未明了，而国外兴起的炎症学说在小范围内受到关注得到部分医学研究人员的认可。炎症学说将2型糖尿病当作是由细胞因子介导引发的炎症反应[60]。相关研究发现，当患者体内的IR以及胰岛素分泌不足时会使得血糖水平快速升高，从而促使胰岛细胞在极短的时间内分泌高于平均水平的IL-6，过度激活B淋巴细胞以及T淋巴细胞，在受到其他细胞因子的作用后会产生毒作用，直接导致胰岛β细胞加快凋亡速度[61]。患者内皮细胞在缺氧的环境下会释放IL-8，诱导中性粒细胞的激活和定向迁移，是介导病理损伤的重要因子。研究表明，高血糖、高胰岛素血症对血管有毒性，使内皮细胞缺氧，甚至死亡，而缺氧条件下的内皮细胞可直接IL-8，也可以刺激中性粒细胞、单核细胞产33 青岛大学硕士学位论文生IL-8，导致IL-8急剧升高，这在本实验结果中有明显反映。产生的大量IL-8又通过趋化、活化中性粒细胞，使之释放溶酶体酶而损伤毛细血管，造成组织损伤。肥胖者即使是在健康的状况下其脂肪组织细胞TNF-α蛋白以及mRNA的表达依然要高于正常标准。研究发现TNF-α能够活化吞噬细胞，直接促进B细胞内的NOS以及NO数量的增加，在一定程度上有抑制胰岛素的效果[62-64]；TNF能够充当人体免疫防线的重要介质，帮助人体构建生物防线，根据细胞受损的状况随时参与到机体的免疫病理损伤修复中，在免疫性疾病的防治研究中具有重要的临床价值。在正常情况下，具有抗肿瘤、抗感染的作用，但如持续释放或释放过多，或与其他细胞因子的关系失调，与会引起机体的发热等。TNF-α参与免疫细胞的激活，促进炎性反应细胞聚集黏附，使微血管扩张，通透性增强，诱发炎性反应[65-66]。由此表明人体内环境下的IL-6，TNF-α的数量迅速增多必然与IR有着直接的联系，在下一阶段的临床医学检测中可以尝试将IR作为新的检测指标。2型糖尿病与细胞亚群的关系近些年来关于2型糖尿病的研究尽管十分深入，但由于其本身是一种发病机制十分复杂并且临床表现又相近的疾病，因此并没有取得实质性的进展。诸多医学研究人员一致认为2型糖尿病的出现与人体免疫系统的异常有着直接的联系[67]。在众多人体细胞群中，T细胞是构成人体免疫系统的重要组成部分，并且CD4+T细胞与CD8+T细胞之间的相互调节、相互拮据对于维护人体免疫系统的平衡发挥着不可替代的作用。另外，在对2型糖尿病患者进行长期的研究过程中发现，患者体内的T细胞亚群与正常人相比有着非常明显的差距，体表现在CD4+/CD8+的数量失衡，使得患者的免疫系统无法发挥正常的作用，在抵抗外来病菌的过程中十分乏力，因此各类疾病的感染在2型糖尿病患者中十分常见[68]。2型糖尿病患者之所以十分容易受到各类病菌的感染与其本身免疫系统的失衡有着直接的联系，因此本研究决定对2型糖尿病患者的T细胞亚群状态进行检测，将细胞免疫作为切入口深入的研究2型糖尿病的感染过程以期能够找到较好的治愈方法[69]。关于2型糖尿病患者T细胞亚群内的CD3+T细胞数量变化近些年来诸多研究人员在对2型糖尿病患者进行长期的观察并开展诸多病理研究工作后发现，2型糖尿病患者外周血的CD3+T细胞数量与正常值相比明显过低[70]。有研究者在对住院治疗的30例2型糖尿病患者的血液进行一段时间的研究分析后发现患者体内的CD3+T细胞百分率基本稳定在百分之四十七，远远低于正常百分比。正常情况下CD3+T细胞分子能够在病菌入侵人体以后和TCR结合，形成TCR-CD3复合受体分子，能够准确的识别入侵抗原，并且起到传导信号的作用，从而诱导淋巴细胞分泌更多的免疫因子[71]。患者体内的CD3+T细胞细胞数量减少，必然会使得体内能够参与构建免疫防线的T细胞也减少，直接使得人体的免疫系统出现漏洞，免疫功能被大幅度的削弱。研34 综述究小组认为这和2型糖尿病患者易出现合并感染的症状有着直接的联系。关于2型糖尿病患者T细胞亚群内的CD4+T细胞数量变化根据相关医学研究人员的研究结果可以确定，2型糖尿病患者外周血CD4+T细胞数量与正常值相比较而言明显较低[72]，患者体内CD4+T细胞数量的减少可能与细胞免疫紊乱有着之间的关联。研究者对2型糖尿病患者的血液以及其他分泌物进行长期的研究后发现，存在血糖控制不良症状的2型糖尿病患者其体内的CD4+T细胞数量十分稀少，这极有可能会使得免疫器官在高血糖的内环境下减少T细胞的分泌以及免疫应答行为，最终使得细胞的免疫功能出现瘫痪。研究者认为2型糖尿病患者中出现合并感染症状的病例其体内的CD4+T细胞数量与正常患者相比明显更高，因此可以确定当患者在刚受到感染的时候保留着一定的细胞免疫功能，但是T细胞在转换淋巴细胞以及增殖的过程中受到了抑制，这是导致患者出现细胞缺陷的根本所在。研究者认为高血糖环境是抑制T细胞增殖的根本原因。因此，如何有效的控制血糖将其降低至正常水平便成为有效防治2型糖尿病患者出现合并感染症状的关键所在。关于2型糖尿病患者T细胞亚群内的CD8+T细胞数量变化近些年来关于2型糖尿病临床病理的研究越来越多，但是关于2型糖尿病患者的外周血CD8+T细胞数量变化与细胞免疫缺陷之间的关联并没有一个明确的结果。有的研究人员认为患者体内的CD8+T细胞数量明显增多，有的则认为患者体内的CD8+T细胞数量明显减少，甚至有部分研究认为患者体内的CD8+T细胞数量没有任何变化。本研究在对其进行一段时间的研究分析后初步认为造成实验结果差异如此之大的原因与各医学研究小组选定的研究目标、研究方向以及研究过程中使用到的仪器、材料、方法等相关联。患者体内研究者发现的CD8+T细胞分子能够与MHCⅡ类分子结合，生成的复合物对免疫过程中发挥重要作用的靶细胞有较强杀伤作用，从而使得免疫功能衰弱。在进行一段时间的研究工作并结合相关研究资料后本研究认为CD8+T细胞数量的减少与T细胞增殖的衰弱有更为直接的联系。由于患者细胞免疫功能存在缺陷，从而直接大幅度降低了患者抗感染免疫能力。另外，如果人体内Ts细胞数量减少，必然会导致本身的调节功能出现异常情况，最终使得占据辅助性地位的抗体发挥的功能越来越强，患者体内的抗体数量也就越来越多。因此，本研究认为CD8+T细胞数量的减少与患者细胞免疫功能的缺陷有关[72]。关于2型糖尿病患者T细胞亚群内的CD4+/CD8+比值变化在临床医学上一般会将CD4+/CD8+的比值作为检测患者体内细胞免疫功能缺陷状况的指标。但目前在国内外的诸多研究中对于CD4+/CD8+的比值增多还是减少或保持不变并没有一个十分明确的答案。部分研究人员的研究结果显示，2型糖尿病患者体内的CD4+/CD8+的比值与正常人相比较而言明显偏低[73]。因此确定CD4+/CD8+的比值的降低是患者细胞免疫功能出现缺陷的重要指征，同时也表明当患者体内的CD4+/CD8+的比值比例失35 青岛大学硕士学位论文调时，必然会导致机体免疫功能大幅度减弱，最终导致患者的免疫功能紊乱，无法构建平衡的免疫防线。相关医学研究人员让2型糖尿病患者在空腹状态下口服葡萄糖，一段时间后对患者体内的CD4+/CD8+的比值进行检测，明显发现数值降低，并且CD4+T细胞活化受到严重抑制，特异性免疫功能出现异常。除此以外，如果患者长期保持高血糖状态，必然会使得CD4+/CD8+的比值下降，从而降低CD4+T细胞活性，并且会导致使CD4+细胞膜上的IL-2R脱落进入人体内环境中的血液循环过程，直接抑制T细胞的活化，并且使其克隆化扩增的过程受到影响，最终机体免疫功能丧失。现代医学研究认为，2型糖尿病患者之所以容易出现合并特异以及非特异性交叉感染，主要是因为患者体内长期处于高血糖状态，为细菌的增殖提供了良好的内环境，另外，高血糖环境下会使得白细胞内的糖代谢过程紊乱，对中性粒细胞吞噬抗原造成影响。除此以外，患者体内胰岛素长期供应不足，降低了抗原的呈递作用，吞噬细胞无法准确识别抗原，最终导致患者免疫体统的吞噬毒素功能下降。基于此研究结果，国内外的诸多研究人员一直认为必须控制2型糖尿病患者体内的血糖水平，恢复患者一部分的机体免疫功能。在治疗的过程中实时对2型糖尿病合并感染患者进行检查，确定患者体内T细胞亚群的数量变化，能够有效的帮助医生分析患者的病情。如果检测到2型糖尿病合并感染患者体内的CD4+/CD8+比值存在下降的情况，医生可以建议患者适当使用干扰素、白介素等直接增强患者的免疫能力。根据相关医学研究人员的研究报告可以确定，胰岛功能受损与免疫功能缺陷直接相关，但对T细胞免疫功能的影响还需要在下一阶段的研究工作中做进一步检测。36 综述参考文献综述参考文献[1]DunningBE，GerichJE．Theroleofalpha-celldysregulationinfastingandpostprandialhyperglycemiaintype2diabetesandtherapeuticimplications．EndocrRev，2007，28：253-283．[2]UngerRH．Roleofglucagoninthepathogenesisofdiabetes：Thestatusofthecontroversy．Metabolism．1978，27：1691-1709．[3]庞璨，贾伟平．空腹血糖和胰岛β细胞功能的关系．中华内分泌代谢杂志．2006，22：附录4a-5．[4]KahnSE，ZraikaS，UtzschneiderKM，eta1．Thebetacelllesionintype2diabetes：therehastobeaprimaryfunctionalabnormality．Diabetologia，2009，52：1003-1012．[5]QuesadaI，TuduriE，RipollC，eta1．Physiologyofthepancreaticalpha-cellandglucagonsecretion：roleinglucosehomeostasisanddiabetes．JEndoerinol，2008．199：219．[6]DunningBE，GerichJE．Theroleofalpha-celldysregulationinfastingandpostprandialhyperglycemiaintype2diabetesandtherapeuticimplications．EndocrRev，2007，28：253-283．[7]ButlerAE，JansonJ，Bonner-WeirS，eta1．Beta-celldeficitandincreasedbeta-cellapoptosisinhumanswithtype2diabetes．Diabetes，2003，52：102-110．[8]DelPratoS．Lossofearlyinsulinsecretionleadstopostprandialhyperglycaemia．Diabelologia，2003，46(Suppl1)：M2-M8．[9]PCrksenN．Earlychangesinbeta-cellfunctionandinsulinpulsatilityaspredictorsfortype2diabetes．DiabetesNutrMetab，2002，15(6Snpp1)：9-l4．[10]赵世华，王颜刚，闫胜利，等．有T2DM家族史的初诊糖尿病患者胰岛素第一和第二时相分泌的异常．中华内分泌代谢杂志，2004，20：532-533．[11]郭航常宝成杨菊红,不同病程T2DM患者胰岛α及细胞功能评价。中华全科医师杂志,2013,l2：874-877.[12]魏雯，涂梅，陈彤,糖尿病及糖调节受损危险因素及胰岛β细胞功能分析,中华全科医学,2012,10:597-599.[13]PφrksenN．Earlychangesinbeta-cellfunctionandinsulinpulsatilityaspredictorsfortype2diabetes．DiabetesNutrMetab，2002，15(6Snpp1)：9-l4．[14]WilsonPW，MeigsJB，SullivanL，eta1．Predictionofincidentdiabetesmellitusinmiddle-agedadults：theFraminghamOffspringStudy．ArchInternMed，2007，167：1068-1074．[15]HumphriesSE，GableD，CooperJA，eta1．CommonvarianlsintheTCFTL2geneandpredispositiontotype2diabetesinUKEuropeanWhites，IndianAsiansandAfro-Caribbeanmenandwomen．JMolMed(Ber1)，2006，84：1005-1014．37 青岛大学硕士学位论文[16]NgMC，TamCH，LainVK，eta1．ReplicationandidentificationofnovelvariantsatTCF7L2associatedwithtype2diabetesinHongKongChinese．JClinEndocrinolMetab，2007，92：3733-3737．[17]HayashiT，lwamotoY，KakuK，eta1．ReplicationstudyfortheassociationofTCF7I2withsusceptibilitytotype2diabetesinaJapanesepopulation．Diabetologia，2007，50：980-984．[18]MccarthyMI．Genomics，type2diabetes，andobesity[J]．NEnglJMed，2010，363(24)：2339-2350．[19]IlkovaH，GlaserB，TuncaleA，eta1．Inductionoflong-terraglycoliccontrolinnewlydiagnosedtype2diabeticpatientsbytransientintensiveinsulintreatment．DiabetesCare，1997，20：1353．1356．[20]WengJ，LiY，xuW，eta1．Effectofintensiveinsulintherapyonbeta-cellfunctionandglycaemiccontrolinpatientswithnewlydiagnosedtype2diabetes：amuhicentrerandomisedparallel-grouptria1．Lancet，2008，371：1753-1760．[21]KramerCK，ZinmanB，RetnakaranR．Short．termintensiveinsulintherapyintype2diabetesmellitus：asystematicreviewandmeta-analysis．LancetDiabetesEndoerinol，2013[20134)310]．[22]中华医学会糖尿病学分会.新诊断T2DM患者短期胰岛素强化治疗专家共识.中华医学杂志，2013，93：1524-1526.[23]中华医学会糖尿病学分会.中国T2DM防治指南(2013年版).中华内分泌代谢杂志，2014，3O：893-942.[24]LiuJ，LiuJ，FangD，eta1．Fastingplasmaglucoseafterintensiveinsulintherapypredictedlong-termglycemiccontrolinnewlydiagnosedtype2diabeticpatients[J]．EndocrJ，2013，60：725-732.[25]刘娟，JasmeenTuladhar，柯伟健，等.短期胰岛素泵强化治疗期间T2DM患者胰岛功能变化对预后的影响.中华糖尿病杂志，2014，6：293-298.[26]LiY，XuW，LiaoZ，eta1．Inductionoflong-termglycemiccontrolinnewlydiagnosedtype2diabeticpatientsisassociatedwithimprovementofbeta-cel1function．DiabetesCare，2004，27：2597-2602．[27]HuangZ，WangX，LiuJ，eta1．Short-termcontinuoussubcutane-ousinsulininfusioncombinedwithinsulinsensitizersrosiglita-zone，metformin，orantioxidantα-lipoicacidinpatientswithnewlydiagnosedtype2diabetesmellitus．DiabetesTechnolTher，2013，15：859869．[28]ParkS，ChoiSB．Inductionoflong-termnormoglycemiawithoutmedicationinKoreantype2diabetespatientsaftercontinuoussubcutaneousinsulininfusiontherapy．DiabetesMetabResRev，2003，19：124-130．[29]ShichiriM，KishikawaH，OhkuboY，eta1．Long-termresultsoftheKumamotoStudyonoptimal38 综述参考文献diabetescontrolintype2dia-beticpatients．DiabetesCare，2000，23(Suppl2)：B21-B29．[30]钱云.中国人群2型糖尿病遗传易感性的分子流行病学研究[D].南京：南京医科大学，2012.[31]葛均波，徐永健，等.内科学[M].8版.人民卫生出版社，2013：739.[32]黄少妙.胰岛素泵强化治疗新诊断2型糖尿病对患者胰岛β细胞功能和血糖水平的影响[J].海南医学，2014，25（23）：3515-1517.[33]朱旅云，杨少玲，胡丽叶，等.定期胰岛素泵强化治疗对2型糖尿病胰岛β细胞功能的影响[J].中国现代医学杂志，2011，21（29）：3655-3658.[34]曾志红，周晓明，翁利红.两种胰岛素强化治疗对初诊T2DM患者胰岛β细胞功能的影响[J].浙江实用医学，2010，15（1）：29-30.[35]林萱，崔静，何汉武，等.两种胰岛素强化治疗方法对初诊2型糖尿病患者胰岛素β细胞功能的影响[J].武汉大学学报（医学版），2010，31（1）：76-78.[36]中国医师协会内分泌代谢科医师分会.中国胰岛素泵治疗指南（2009）[J].药品评价，2010，7（4）：4-10.[37]母义明，尹士男，纪立农，等.胰岛素泵规范治疗教程[M].北京：人民军医出版社，2011：34-39.[38]赵嘉晶.动态血糖监测进展[J].海南医学，2009，20（S4）：296-298.[39]夏景义.胰岛素泵治疗糖尿病16例临床疗效观察[J].河北医学，2013，19（3）：475-476.[40]中国医师协会内分泌代谢科医师分会.中国胰岛素泵治疗指南（2010）[J].中国医学前沿杂志：电子版，2011，3（4）：78-86.[41]彭新华，李光伟.胰岛素泵在糖尿病治疗中的应用[J].国外医学内分泌学分册，2001，21（1）：22-24.[42]金爽.短期胰岛素泵强化治疗对不同病程2型糖尿病的疗效及安全性分析[D].大连：大连医科大学，2012：1-2.[43]赵树玉，杜明杰，李晨阳，等.短期胰岛素强化治疗对初诊2型糖尿病胰岛β细胞功能和胰岛素敏感性的影响[J].中国老年学杂志，2010，30（13）：1901-1903.[44]朱旅云，杨少玲，胡丽叶，等.定期胰岛素泵强化治疗对2型糖尿病胰岛β细胞功能的影响[J].中国现代医学杂志，2011，21（29）：3655-3658.[45]SennJJ,KloverPJ,NowakIA,etal.Interleukninducescellularinsulinresistanceinhepatocytes[J].Diabetes,2002,51:3391-3399.[46]SennJJ,KloverPJ,NowakIA,etal.Interleukninducescellularinsulinresistanceinhepatocytes[J].Diabetes,2002,51:3391-3399.[47]TakahanshinM,MasuyamQJ,IkedaU,etal.Effectsofendogenousendothelialinterleukin-8onneutrophilmigrationacrossanendothelialmonolayer[J].CardiovascRes,1995,29:670-675.[48]WengJ，LiY，XuW，eta1．Effectofintensiveinsulintherapyonbetacellfunctionand39 青岛大学硕士学位论文glycaemiccontrolinpatientswithnewlydiagnosedtype2diabetes：amulticentrerandomisedparallel—grouptria1．Lancet，2008，371：1753—1760．[49]KramerCK．ZinmanB．RetnakaranR．Shorttermintensivein～sulintherapyintype2diabetesmellitus：asystematicreviewandmeta～analysis．LancetDiabetesEndocrinol，2013，1：28—34．[50]LiuJ，LiuJ，FangD，eta1．Fastingplasmaglucoseafterintensiveinsulintherapypredictedlongtermglycemiccontrolinnewlydiagnosedtype2diabeticpatients．EndocrJ，2013，6O：725732．[51]ChenA，HuangZ，WanX，eta1．Attitudestowarddiabetesaf—fectmaintenanceofdrug—freeremissioninpatientswithnewlydiagnosedtype2diabetesaftershort-termcontinuoussubcuta—neousinsulininfusiontreatment．DiabetesCare，2012，35：474—481．[52]祝方,纪立农,韩学尧,等.短期胰岛素强化治疗诱导初诊2型糖尿病患者血糖长期良好控制的临床试验.中国糖尿病杂志,2003,11(1):5-9.[53]钱云.中国人群2型糖尿病遗传易感性的分子流行病学研究[D].南京：南京医科大学，2012.[54]葛均波，徐永健，等.内科学[M].8版.人民卫生出版社，2013：739.[55]黄少妙.胰岛素泵强化治疗新诊断2型糖尿病对患者胰岛β细胞功能和血糖水平的影响[J].海南医学，2014，25（23）：3515-1517.[56]朱旅云，杨少玲，胡丽叶，等.定期胰岛素泵强化治疗对2型糖尿病胰岛β细胞功能的影响[J].中国现代医学杂志，2011，21（29）：3655-3658.[57]曾志红，周晓明，翁利红.两种胰岛素强化治疗对初诊T2DM患者胰岛β细胞功能的影响[J].浙江实用医学，2010，15（1）：29-30.[58]林萱，崔静，何汉武，等.两种胰岛素强化治疗方法对初诊2型糖尿病患者胰岛素β细胞功能的影响[J].武汉大学学报（医学版），2010，31（1）：76-78.[59]中国医师协会内分泌代谢科医师分会.中国胰岛素泵治疗指南（2009）[J].药品评价，2010，7（4）：4-10.[60]母义明，尹士男，纪立农，等.胰岛素泵规范治疗教程[M].北京：人民军医出版社，2011：34-39.[61]赵嘉晶.动态血糖监测进展[J].海南医学，2009，20（S4）：296-298.[62]夏景义.胰岛素泵治疗糖尿病16例临床疗效观察[J].河北医学，2013，19（3）：475-476.[63]中国医师协会内分泌代谢科医师分会.中国胰岛素泵治疗指南（2010）[J].中国医学前沿杂志：电子版，2011，3（4）：78-86.[64]林萱，崔静，何汉武，等.两种胰岛素强化治疗方法对初诊2型糖尿病患者胰岛素β细胞功能的影响[J].武汉大学学报（医学版），2010，31（1）：76-78.[65]中国医师协会内分泌代谢科医师分会.中国胰岛素泵治疗指南（2009）[J].药品评价，2010，7（4）：4-10.[66]母义明，尹士男，纪立农，等.胰岛素泵规范治疗教程[M].北京：人民军医出版社，2011：40 综述参考文献34-39.[67]赵嘉晶.动态血糖监测进展[J].海南医学，2009，20（S4）：296-298.[68]夏景义.胰岛素泵治疗糖尿病16例临床疗效观察[J].河北医学，2013，19（3）：475-476.[69]中国医师协会内分泌代谢科医师分会.中国胰岛素泵治疗指南（2010）[J].中国医学前沿杂志：电子版，2011，3（4）：78-86.[70]彭新华，李光伟.胰岛素泵在糖尿病治疗中的应用[J].国外医学内分泌学分册，2001，21（1）：22-24.[71]金爽.短期胰岛素泵强化治疗对不同病程2型糖尿病的疗效及安全性分析[D].大连：大连医科大学，2012：1-2.[72]赵树玉，杜明杰，李晨阳，等.短期胰岛素强化治疗对初诊2型糖尿病胰岛β细胞功能和胰岛素敏感性的影响[J].中国老年学杂志，2010，30（13）：1901-1903.[73]朱旅云，杨少玲，胡丽叶，等.定期胰岛素泵强化治疗对2型糖尿病胰岛β细胞功能的影响[J].中国现代医学杂志，2011，21（29）：3655-365841 攻读学位期间的研究成果攻读学位期间的研究成果[1]孙晓琳，孙爱东，王静，胰岛素强化治疗对初诊2型糖尿病胰岛β细胞功能的影响与临床分析，中国医药指南，2018年4月第16卷第10期（89-90）.42 英文缩略词汇表及中文对照英文缩略词汇表及中文对照英文缩略词英文全称中文名称T2DMtype2diabetesmellitus2型糖尿病IRinsulinresistance胰岛素抵抗IL-6Interleukin6白细胞介素因子6IL-8Interleukin8白细胞介素因子8TNF-αTumorNecrosisFactor肿瘤坏死因子LTlymphotoxin淋巴毒素MHCMajorHistocompatibilityComplex主要组织相容性复合物GWASgenomewideassociationscan全基因组关联扫描43 致谢致谢时光荏苒，在职研究生的学习今天即将结束，过去的时光有艰辛也有快乐，但这段学习时间也是我倍感充实的时光。首先，由衷的感谢我的导师王静副教授，在读研期间，老师对我的科研思维、学术思想和实验实践进行了悉心培养与指导，也让我开阔了眼界，并深刻体会到了科研的魅力。老师严谨求实的治学态度，高瞻远瞩的学术思想、热情忘我的工作精神将是我终身学习的榜样。感谢一直以来默默关心和支持我的家人，正是他们的无条件支持，让我能够没有压力的、顺利的完成学业。感谢所有曾经给过我帮助和支持的人，我会永远记住这段美好的时光。44 学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。文中依法引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果。论文作者签名：日期：年月日学位论文知识产权权属声明本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属学校。学校享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为青岛大学。本学位论文属于：保密□，在年解密后适用于本声明。不保密□。（请在以上方框内打“√”）论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日（本声明的版权归青岛大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用）45