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《新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
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新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究摘要阿勒泰市是新疆重要的牧业基地之一，随着牛存栏量的增加，牛的结核病也有所回升，通过对牛结核病流行病学调查，有助于阿勒泰市控制疫病及制定牛结核病评价防治对策和措施。本文根据GB／T18645-2002方法检测标准，用牛型提纯结核菌素皮内变态反应试验和细菌学检查法对新疆阿勒泰市12个乡镇农牧民及养殖场的各类牛只进行牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究，结果显示调查的10987头牛中，PPD试验阳性的有10头，牛结核病阳性率为0.09%，与我国牛感染结核病的相关调查结果基本相符。阿勒泰市参与调查的12个乡镇中，有三个乡镇与市区距离较近，农牧民养殖牛的的规模比较大，其场内的牛结核病感染率较高，其中有2个乡镇的牛结核感染情况最为严重，分别为0.11%和0.20%，按时间分布来看，12月和1月份检出率较高。根据对新疆阿勒泰市牛结核病的流行情况进行了流行病学调查及防控措施的研究，本文给出了防控牛结核病的具体措施：一要加强动物防疫检疫体系制度，深化兽医管理的体系建设，加强兽医防疫的项目建设，落实好基层兽医岗位制度建设；二要加强防疫检疫工作，加强牲畜流通管理制度，建立健全科学的补偿机制，要加强检疫监督；三要加强技术培训和宣传力度，对广大牧民进行宣传教育，对基层兽医人员进行定期培训；四要积极预防，提高牛群的免疫力，定期检疫，防止结核病传人，净化污染牛群，培养健康犊牛群，加强消毒，饲养管理，积极引进优良牛种，做好相对应急处治工作。关键词：阿勒泰市；牛；结核病；流行病学；调查；防控措施 StudyonepidemiologyandpreventionandcontrolmeasuresbovinetuberculosisinXinjiangAltaycityAbstractXinjiangAltayCityisoneoftheimportantanimalhusbandrybase,withtheincreaseintheamountofcattle,bovinetuberculosishasalsobeenpickedup,Throughepidemiologicalinvestigationofbovinetuberculosis,helpcontrolthediseaseandthedevelopmentofAltayevaluationbovinetuberculosiscontrolstrategiesandmeasures.AccordingtothestandardGB/T18645-2002method,WithbovinetypepurificationintradermaltuberculinallergytestandbacteriologicalmethodsofAltayCityXinjiangbovinetuberculosisepidemicsituationofepidemiologicalinvestigationandpreventionmeasuresoftheresearch,resultsshowthatthe10987headofcattle,10headofPPDtestwaspositive,thepositiverateofbovinetuberculosisis0.09%,consistentwiththerelevantinvestigationinChinabovinetuberculosisinfectionresults.12townshipsinthecityinvolvedintheinvestigation,allofthethreetownsandurbandistance,farmersbreedingcowsoftherelativelylargesizeofthefloor,thehigherrateofbovinetuberculosisinfection,ofwhichtwotownofbovinetuberculosisinfectionsituationismostserious,respectively0.11%and0.20%,Timedistribution,inDecemberandJanuarydetectionrateishigher.AccordingtotheepidemicsituationofbovinetuberculosisinXinjiangofAltaycitywasstudiedbyinvestigatingtheepidemiologyandpreventionandcontrolmeasures,thispaperputsforwardtheconcretemeasuresofpreventionandcontrolofbovinetuberculosis;first,tostrengthenthesystemofanimalepidemicpreventionandquarantinesystem:systemconstructiondeepenveterinarymanagement,strengthenveterinaryepidemicpreventionprojectconstruction,implementgrassrootsveterinarypostsystemconstruction;two,tostrengthentheepidemicpreventionandQuarantineoflivestock:strengtheningthecirculationmanagementsystem,establishascientificcompensationmechanism,tostrengthenthesupervisionandquarantine;three,tostrengthentechnicaltrainingandpublicity:publicityandeducationforherders,regulartrainingofgrassrootsveterinarystaff;four,activeprevention,improveherdimmunity:regularquarantine,topreventtuberculosishowever,purifyingcontaminatedcattle,cultivatehealthycalf,strengthendisinfection,feedingandmanagement,andactivelyintroducegoodcow,dogoodrelativeemergencytreatmentwork.Keyworlds：Altaycity;Bovine;Tuberculosis(TB);Epidemiology;Survey;Preventionandcontrolmeasures 目录第1章综述.......................................................................................................11.1牛结核病的概念及其分类..........................................................................11.2牛结核病流行病学研究进展......................................................................11.3牛结核病的危害..........................................................................................41.4牛结核病的病原学研究进展......................................................................41.5牛结核病的发病机制..................................................................................61.6牛结核病诊断的研究进展及方法..............................................................71.7本研究的目的及意义................................................................................10第2章对新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查.....................................122.1材料与方法................................................................................................122.2结果............................................................................................................152.3分析............................................................................................................18第3章调查评价与措施探讨.........................................................................203.1阿勒泰市牛结核病的流行情况及特点....................................................203.2流行原因分析............................................................................................203.3综合防治措施的探讨................................................................................22第4章结论.....................................................................................................28参考文献.............................................................................................................29致谢.................................................................................................................31个人简历.............................................................................................................32 插图和附表清单表12013年各乡镇的牛结核病调查结果统计表.................................................15表22013年阿勒泰市各乡镇的牛结核病调查各月份结果统计表.....................16表32009至2013年各乡镇的牛结核病调查结果统计表...................................17表42009至2013年新疆阿勒泰市的牛结核病检出阳性率统计表...................17 符号、缩略词注释缩写词英文全称中文全称CDCCentersforDiseaseControl疾病控制中心WHOWorldHealthOrganization世界卫生组织BACBacterialartificialchromosome细菌人工染色体PPDpurifiedproteinderivative提纯蛋白衍生物PCRPolymerasechainreaction聚合酶链反应ELISAEnzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附测定法OIEOfficeInternationalDesEpizooties世界动物卫生组织IUInternationalUnit国际单位CFTCubicfoot立方英尺SDSsodiumdodecylsulfate,sodiumsalt十二烷基硫酸钠PAGEpolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳MTBM.tuberculosis结核分枝杆菌CFTComplomengfixatingtest补体结合试验 新疆农业大学硕士学位论文第1章综述结核病是由分支杆菌属的结核分支杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)、牛分支杆菌(M.bovis)和禽分支杆菌(M.avium)引起的一种严重的人兽共患的慢性消耗性传染病。其病理特征是被结核分枝杆菌感染的肺、肾、乳腺等多种组织器官形成结节性肉芽肿，继而出现了结核性肉芽肿的中心干酪样变性、坏死和钙化。感染力较强的结核分支杆菌、牛分支杆菌和禽分支杆菌，主要分别感染人、牛和禽类，能够引起人结核、牛结核和禽[1]结核。其中，牛结核病可通过病畜传播给人类或其他动物。牛结核病和人结核病通过[2]传播媒介可以相互感染，禽结核病经过接触也可以感染牛和人类。牛结核病感染宿主谱广，几乎可以感染所有的温血脊椎动物，该病可导致患病牛寿命缩短、产奶量显著减少、不孕。结核病在我国的发病率一直比较高，目前我国一些省、自治区牛结核病的发[3]病率呈部分上升的趋势，有的已达到6%甚至更高的阳性检出率。阿勒泰市是我自治区重点畜牧业基地，因此，做好牛结核病的定期检测普查工作相当重要。1.1牛结核病的概念及其分类牛结核病是由牛分枝杆菌和结核分枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染[4]病，牛结核病(Bovinetuberculosis)主要是由牛分支杆菌所引起，该病的特征是在多种组织和器官形成的结节性肉芽肿，随后发生肉芽肿(结核结节)和钙化结节，机体呈慢性消耗性病变。在家畜中，牛最易感染结核病，特别是奶牛；世界动物卫生组织(OIE)将[5-8]牛结核病列为B类动物疫病。1.2牛结核病流行病学研究进展1.2.1牛结核病流行病学结核杆菌除感染人类以外，还能引起50多种哺乳动物和25种禽类发病。在家畜中，[9]牛最易感染结核病，猪、禽次之，羊极少，马罕见，特别是奶牛，其次是水牛、黄牛。1 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究禽类结核菌素的变态反应可用于牛结核病的检验。牛结核病在世界各地均有发生，在我国是最常见的多发性传染性疾病，牛结核有众多的易感动物，几乎可以感染所有的哺乳动物。病牛尤其是开放性结核病牛为主要的传染源。本病原是由咳嗽将呼吸道的分泌物喷散于空气中，也可随着体液：鼻汁、唾液、痰液、乳汁和生殖器官分泌物排出体外，能污染饲料、饮水、空气周围环境。传播途径，成年牛主要通过被污染的飞沫或尘埃经呼吸道而感染，犊牛则被污染的饲料、饮水以及从健康奶牛挤出的乳汁也通过牛舍中的传播介质比如飞沫和尘埃而被结核分枝菌所污[10]染，主要以消化道感染为主。有时也可经生殖道交配或胎盘传染，甚至饲管人员也是传播媒介。经皮肤感染者极少见。本病无季节流行性，一年四季均可发生。流行特点是流行过程缓慢且隐性感染多为散发，有时可在畜群中呈地方性流行。有随年龄增高而发病率增高倾向。集中饲养多于分散放牧。及外周及小环境不良，如牛舍常年潮湿、没有光线、通风不良、畜舍拥挤、过重劳役、挤奶量大，病牛与健康牛同栏饲养以及饲料配比不当、饲料中缺乏维生素和[11]矿物质等，都可以促使本病的发生和流行。1.2.2牛结核病流行病学国内外现状20世纪80年代中期以来，一些主要的发达国家结核病感染率没有下降，反而逐年上升,而在一些贫困国家的结核病也失去了控制，特别是中非、南亚，为此1993年世界卫生组织(WHO)宣布了结核病处于全球紧急状态。造成牛结核病不断发生和流行的主要原因是对于检出的阳性牛只不能及时处理，检测手段的有限，导致感染牛只无法限制[11]流通,不能从根本上消灭传染源。另外整体外周环境差,比如牛舍光线不足、阴暗潮湿、通风较差、牛群拥挤、粪便堆积、牛舍不定期消毒，病健牛同栏饲养，饲养用具污染以及饲料配比不当、饲料中缺乏维生素和矿物质营养等，均可促进本病的发生。由于野生动物獾、野牛、猴子、狐狸等动物结核病也经常出现，并呈隐性，常出没于牛舍、牛场周围，野生动物通过分泌物、排泄物将结核杆菌排出体外，污染了环境，饲草、饲料和饮水等，家畜在采食或饮水后感染结核杆菌，进而造成牛结核病的发生，增加了牛结核[12]病感染的又一途径。由于人类耐药结核菌株的出现，以及牛奶在人们正常饮食中的比2 新疆农业大学硕士学位论文例加大，造成结核病人的感染比例攀升，也增加了人畜间结核病的相互传播机率，国际上由牛型分枝杆菌引起的人结核病的比例为10%左右。当前,大多数国家和地区都已不提倡用疫苗来控制牛的结核病，而是采用定期牛结核菌提纯蛋白衍生物（PPD）皮试法检测，根据检查结果，淘汰牛结核菌PPD皮试诊断阳性牛的防控策略，许多发达的国家已利用该策略对控制牛结核病有了明显的效果。第1个根除了牛结核病的国家是美国，自1971年实施消灭牛结核病以来，已经使牛结核病的发病概率降至0.5%，随着防控的深入，到了1998年美国实现了无牛结核病的最终目标。但是后来在密歇根州还是偶有疫情发生，所以美国的牛群处在不断的检疫和高度警惕之中。欧州的很多国家于20世纪50年代签署了控制牛结核病的协定，其中有丹麦、比利时、挪威、德国和荷兰等国已基本上消灭了牛的结核病，英国和法国仍处在防控的状态。澳大利亚、新西兰等国家也已经消灭了牛结核病，但近年来由于野生动物重出现了结核病的病例，通过污染环境、交叉感染等因素，致使牛又感染了结核病。亚洲和非洲依然是牛结核病的高发区，其中印度发病最为严重。在非洲的国家中，只有7个国家将牛结核病列为必须申报的疫病而采取疫病检疫和部分扑杀的政策，其他的48个国家虽然采取的控制措施但是效果不明显或者有的国家根本就不采取任何的相关控制措施和政策。在亚洲，也只有几个国家采取检疫和部分扑杀政策，考虑进行申报，其余29个国家只采取部分的防控政策和没有采取任何的控制措施，结核病可感染的宿主品种广泛，清除感染结核的疫情的难度是很大的，出现相互交叉感染的机率非常大，各国家畜相互间的流通买卖、防控差异等原因都造成了结核病的不断发生，给预防工作造成了很大的困难。随着国内人民生活水平的不断提高，带动了奶牛业在最近几年的迅速发展，随之也使牛结核病疫情急速攀升。1979年、1985年和1990年3次全国结核病流行病学调查结果显示，由牛型分枝杆菌导致的结核菌病所占的比例分别为3.8%、4.2%和6.4%。此后虽然全国性的调查统计数据没有显示疫情，然而地方性的疫情调查结果却不容乐观，[13]因此牛结核病疫情日益受到了广泛而密切的重视。3 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究1.3牛结核病的危害牛结核病（bovinetuberculosis）作为传染源，牛型结核与人型结核相互感染。研究[14]调查显示结核病人家中饲养的牛结核病患病率高于健康人家庭饲养牛的2倍。牛结核病的传染流行严重地影响到畜牧业的持续健康发展，不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病，还造成奶牛产能乳率和乳质下降，更严重的是威胁人类的身心健康。结合分枝杆菌可以随鼻液、痰、粪便和乳汁等体液排出体外，污染饲料、水源、空气等周围环境，使其在人畜之间相互传播。食用带菌的乳汁或乳制品是人感染牛分枝杆菌的主要途径。牛结核病不仅已经给我国的养牛业造成了巨大的经济损失，尤其是对奶牛的危害极其严重。此外，由于牛和人类的关系较为密切，所以在家畜结核病中以牛结核病对人类[2]健康的威胁最为严重。患病奶牛的寿命缩短，产奶量显著降低，牛常常不能怀孕，使得牛患病后逐渐消瘦，劳动能力减弱，给养牛业带来的经济损失巨大。而且通过各种途径传染给人，牛结核病不仅是一个公共卫生问题，也是一个社会经济问题，对结核病的研究各国政府及此类疫[9]病专家应该高度重视。因此，其传播流行不但影响到畜牧业的持续稳定发展,更严重影响着人类的身心健康和社会公共安全。1.4牛结核病的病原学研究进展1.4.1牛结核病原的一般特性结核病是由结核分枝杆菌所引起的一种严重的人畜共患的慢性传染病，其中感染力[15]较强的是结核分枝。结核分枝杆菌纤细，中等大小，无芽孢，无荚膜，无鞭毛。人型结核分枝杆菌细长有分枝，牛型结核分枝杆菌较短粗，禽类结核分枝杆菌较短小而呈多种类型。革兰氏染色阳性，有抗酸性染色特征。由于结合杆菌富含类脂和蜡脂，因此对外界环境的抵抗力4 新疆农业大学硕士学位论文比较强。干燥的痰内可以存活6~8个月；冰点以下可以存活4~5个月，在污水中可保持11~15个月的活力。对消毒剂5%的石炭酸或来苏尔、4%的氢氧化钠和3%的福尔马林敏感；对湿热的抵抗力弱，60°C加热30min。即失去活性，巴氏消毒处理的奶制[16]品为无害产品。1.4.2结核分枝杆菌的研究进展目前对结核分枝杆菌菌体抗原成分的研究工作进展比较缓慢。相比较而言，研究比较清楚的结核分枝杆菌抗原成分有分子量为12000、24000、38000、65000、71000等多[17]肽成份。这些抗原在结核分枝杆菌多肽成份组成中有一定的特异性。研究结果表明，结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌菌体多肽成份SDS-PAGE电泳区带图谱和抗原免疫原性基本上一致，说明结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌多肽抗原比较，证明分子量为34000、40000和28000多肽只与少数分枝杆菌有交叉免疫反应，是较特异的多肽抗原成份，并[18]已证明是与结核特异性诊断相关的抗原成份。标志结核杆菌研究进入了结构和功能基因组学时代是1998年结核分枝杆菌H37RV基因组序列初步分析结果的公布。这一牛结核菌基因文库的构建，为分离基因带来了便利，借助合适的探针，通过分子杂交等途径立即能筛选到目的基因，又对基因的结构，功能以及基因表达调控机制的研究，都具有十分重要的意义。利用牛结核杆菌基因文库对牛结核杆菌基因及抗原鉴定和特征分析从而提出有效的诊断。并为预防和免疫措施提供了基础理论依据。总的来说，结核分枝杆菌的致病机制虽然仍不是很清楚，但功能基因组学的研究将为结核菌的致病机制、宿主免疫机制、快速诊断、免疫治疗、基因治疗[19]等等带来了新的契机。分枝杆菌比较基因组学研究：比较基因组学是一种鉴定遗传变异的有效方法，这些遗传变异可阐明比较生物体的生理、生化和毒力方面的差异。结核杆菌H37Rv全基因组序列的公布促使人们采用DNA水平上的同源性大于99.95%。利用定制的细菌人工染色体(BAC)库产生的BAC阵列作为模板，不同结核杆菌全基因组作为探针进行杂交试验。5 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究1.5牛结核病的发病机制牛结核感染最先导致原发病灶的形成，通常引起哺乳动物原发病灶区淋巴管附近的淋巴结产生干酪样病变，这种原发病对动物来说是很难治愈的。已发现牛分枝杆菌能感染人并导致肺炎和肺外感染。实验调查结果表明：给患病动物经静脉注射、气管注射、皮下注射和经口的不同方式接种牛结核菌，由于接种方式不同，发病的特征及其传染性也不同。对动物来说，结核杆菌以飞沫形式传播常引起肺和喉淋巴结不同程度的病变。但采食了污染的食物和水[20]主要引起与消化道相关的淋巴组织的病变。病原菌侵害机体被吞噬细胞吞噬后，菌体类脂质能够对抗吞噬细胞溶酶体的破坏作用，形成细菌在吞噬细胞内寄生。进而形成以细胞免疫为主的带菌免疫，这种传染性免疫与传染性变态反应，同时产生，伴随存在。形成肉芽后，进一步发展成肿瘤样的结核结节增生，结核菌的生长使这些的结节变的异常大。随着肉芽的生长，其中心肌出现坏死灶，之后，中心部分缩小或钙化、液化最终形成成干酪样的团块。在哺乳动物中，结核结节可形成致密纤维组织，该病暂时停止发展。临床病变出现进一步的发展，包括了干酪样结节，或空洞、液化。结核分枝杆菌通过淋巴液和血液的流动进行转移，从而定居在其他器官和组织中，进而又形成了其他的结核结节区，在其他器官引起一些病变，这些广泛分布的病变，在较长时间内保持较小的病理变化，通常不表现出临床症状。当出现大量的结核杆菌进入血流和淋巴液时，众多的结核结节就在肺脏、肾脏等主要器官中形成，这种发生感染是致命的。从早期感染的潜伏期发展到钙化和液化的干酪样结节的阶段，该病的发展往往需要几个月，该病的抑制、发展或病灶的蔓延扩大与宿主的相[21]关免疫应答反应机能和细菌在潜伏期的增殖程度有关。机体抵抗力强时，吞噬细胞内的细菌，在滞留局部形成原发性结核结节，并局限化，长期甚至终生不扩散。机体抵抗力弱时，细菌经淋巴管扩散，形成继发结核结节病灶，甚至进入血流散布成全身性结核结节。6 新疆农业大学硕士学位论文1.6牛结核病诊断的研究进展及方法1.6.1国内外牛结核病诊断的研究进展目前，国内外用于诊断牛结核病的检测方法，大体上可分为三类：第一类是病原学检查法，如涂片镜检、细菌培养等，病原学检查是最确实的方法之一，但由于结核菌培[22]养时间长，一般需要8周时间，且10%~20%的病例结核菌培养失败。而且细菌培养检出率较低，敏感性相对较差，不能满足于目前牛结核菌临床诊断的需要。第二类是免疫学方法，如牛结核菌PPD皮内变态反应、ELISA等方法。目前我国PPD皮内变态反应已经广泛应用于结核病的检疫诊断。ELISA反应也作为实验室诊断中常用方法，虽然简易方便，但由于目前试剂成本等价格昂贵，导致规模性生产和实施的成本过高，落实和[23]推广都有一定的困难。第三类是分子生物学方法，如核酸探针、PCR和DNA图谱等方法。虽然这些方法是有敏感、特异等特点，但由于分子生物学的检测都需要一些特殊的仪器和设备，技术性强，相对操作复杂，对实验室条件和操作人员的要求比较高，目前[24]只适用于实验室研究，还不能够用于基层的推广使用。迄今为止，经典牛结核菌PPD皮内变态反应试验虽然不足之处是显而易见的，但这种检测检疫方法仍然得到了大家的一致公认。牛结核菌PPD皮内变态反应试验一直应用于动物和人结核病的免疫诊断法，世界动物卫生组织(OIE)和我国都将此方法列为牛结核病检疫的一个标准试验。而其他检测牛血清抗体的ELISA方法或免疫金标方法，因为结核病引发的体液免疫的时间滞后性，不方便操作，成本过于高昂等原因，无法用于兽医临床试验。1.6.2牛结核病细菌学诊断方法牛结核菌的细菌学诊断方法的目的是通过临床采集，对痰液聚合酶链反应法(PCR)、痰液直接涂片镜检法、痰液常规培养法、痰液浓集涂片镜检法，进行相互比较，从而评估其诊断的价值，进而是对日常的临床检册方法的一个有效的参考。其方法是对采集到的同一组标本，运用4种方法进行检测，PCR法检测痰液中TB-DNA、常规培养法培7 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究养痰液中结核菌、直接涂片镜检法和浓集镜检法分别检测抗酸杆菌，结果是PCR法阳[25]性率＞浓集涂片镜检法阳性率＞常规培养法阳性率＞直接涂片镜检法阳性率。结论为PCR法检测TB-DNA既能缩短检测时间又具有敏感度高。要降低漏检率，可同时采用PCR法、常规培养法、浓集涂片镜检法等不同方法，从不同角度进行检测来确定结果。1.6.2.1痰涂片镜检法痰涂片镜检法是目前诊断TB的最基本的细菌学检查方法，其特点是简单、快速和价廉，不足之处是无法辨别死菌和活菌，二是敏感性比较低，通常需5000~10000个菌/ml才能够得到阳性结果，三是特异性差，各种抗酸杆菌均可着色，需要通过进一步实验才可确定是否为MTB。有关这一方法的改进研究和评价很多，但由于检测原理的限制，不[26]可能出现突破性的进展。1.6.2.2痰结核菌常规培养法痰结核菌常规培养法是所谓的“黄金标准”，用于鉴定死菌活菌的可靠方法。但其不足之处是要花费大量时间，敏感性比较低，特异性差等。1.6.2.3离心沉淀集菌法涂片目前，沉淀集菌法这种集菌方法涂片有效的检测结核杆菌的阳性检测率。沉淀集菌法:取晨痰用N-乙酰-L-半胱氨酸-NaOH法（NALC-NaOH）法将痰液化后，加入磷酸盐缓冲液，离心取沉淀，灭菌后涂片，染色，离心沉淀集菌涂片法痰内结核分枝杆菌检出率较高，是值得大量的推广和应用。1.6.2.4药物敏感性试验药物敏感性试验用于鉴定MTB对抗TB药物的敏感性水平。这项试验通常是在痰MTB培养的基础上进行，故需时更长。8 新疆农业大学硕士学位论文1.6.2.5分枝杆菌菌种鉴定分枝杆菌菌种鉴定是根据不同分枝杆菌的理化特性，以生物化学的方法为主。可以精确地鉴定分枝杆菌的不同菌种，但操作比较复杂，且个别试验使用的药品有一定的危险性。1.6.2.6痰MTB快速培养系统痰MTB快速培养系统是20世纪70年代发展起来的一种新的TB细菌学检查方法-痰MTB快速培养、药敏系统。该方法将阳性检出时间较L-J法明显缩短，从常规培养的8周缩短到3-14d，且具有操作简便、自动化强、灵敏度高等优点，在TB的细菌学诊断中起到了重要作用，促进了TB细菌学诊断的发展。其存在的主要问题是仪器与试剂的价格[27]昂贵，难以广泛应用。1.6.3提纯结核菌素皮内变态反应实验变态反应诊断方法是1890年有郭霍氏（Koch）提出来的，检出率较高。一般注射牛结核菌PPD前以卡尺测量术部中央皮厚并做好记录，注射后72h观察术部有无热、痛肿胀等炎症反应，并以卡尺测量术部皮皱厚度（皮差）及肿胀面积大小，并作为详细记[28]录。变态反应诊断是目前最有实际意义的诊断方法。迄今为止，牛结核菌PPD皮内试验是最有效地检出结核病牛。寻求特异敏感的诊断抗原以及制定一套严格统一的规范化操作标准，已成为牛结核病诊断技术研究的重要方面。目前，提法最多的趋向于用结核杆菌检测的常规方法与分子生物学技术有机结合，将成为结核病的临床诊断与防治提供科学的依据。1.6.4血清学诊断方法研究进展血清学诊断技术起始于19世纪末，主要是检测血清内的结核菌抗体。它是一种快速、简便的检查技术，并且在多种疾病的诊断中得到广泛应用。目前，报道研究最多的血清[29]学诊断技术主要有γ-干扰素诊断法、ELISA法、免疫过氧化物酶试验等。9 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究澳大利亚已研制出牛结核病的γ-干扰素ELISA试验，应用结果表明，本方法比传统的结核菌素法诊断牛结核病更敏感，并可有效解决假阳性的问题，γ-干扰素ELISA试验将是牛结核病诊断的一个主要发展趋势。牛γ-干扰素测定法的广泛性田间试验已在世界上许多国家完成，并在澳大利亚和新西兰被认可为正式试验,美国和其他欧美国家也正在进行本方法区域试验和验证，以探讨完全替代牛结核菌PPD皮试法的可行性。目前已有20多万头经过测试，本法敏感性为77.0%~93.6%，而相比较的结核菌PPD试验敏感性为65.6%~84.4%。西班牙学者选择了85个牛群1136头牛进行了牛颈部结核菌PPD比较皮试(SICCT)和γ-干扰素ELISA试验比对,并且用细菌培养和PCR予以确认，结果γ-干扰素ELISA检测法的敏感84.9%，SICCT的敏感性为80.2%，将2种方法结合起来的敏感性为92.9%。我国也同样开展了颈部牛结[13]核菌PPD皮试和γ-干扰素ELISA比较，证实二者间阳性符合率较高达90.6%。1.6.5分子生物学诊断方法分子生物学技术的发展，PCR技术的应用，开辟了分类鉴定的新途径。目前基因鉴定技术主要包括：PCR-RFIP，PCR-SSCP，PCR-核酸探针、PCR-核酸测序、多重PCR等。基因诊断技术作为结核菌非培养诊断技术是近年来结核病诊断的一项重大突破，具[30]有特异、敏感、快速鉴定结核菌的特点。PCR试验已用于许多动物的多种疫病的快速检测，但因分枝杆菌间有一定的相互交叉干扰，或者待检样品中细菌过低过杂，都很容易造成检测结果呈假阳性和假阴性，因而检测结核病的PCR诊断试验大都停留在实验室的制备和应用阶段，在牛结核病的实际[31]诊断中是少有报道的。目前，国内主要应用皮内变态反应试验来检测牛结核病，虽然有ELISA检测的相关报道，但并未推广应用。基于国内对牛结核病的研究现状和牛结核病的临床检测需要，需要建立一种适用于我国的牛结核病临床检测方法。1.7本研究的目的及意义1.7.1目的10 新疆农业大学硕士学位论文一是了解牛结核病的流行病学特点；二是了解阿勒泰市牛结核病的发病特点；三是探讨牛对结核病抗病性的机制；四是就牛结核病的发病特点做进一步的探索，为充分防治牛结核病提供一条兼顾经济效益与环境效益的新途径。1.7.2意义牛的结核病又是牛传染病中较为严重，传播较广的一种人畜共患病。牛结核病在新疆阿勒泰市流行时间较长，在牧区、城镇均有发生，结核病是人畜共患病，它不仅影响畜牧业经济发展，而且影响人民身体健康。阿勒泰市是新疆重要的牧业基地之一，有四季天然放牧草场1368万亩，刈割草场40万亩。阿勒泰市是新疆重要的肉食品基地，阿勒泰大尾羊、新疆细毛羊、新疆褐牛、阿勒泰马在区内外久负盛名。阿勒泰市牛的牲畜最高饲养量78万头只，年末存栏50万头只，产肉1.75万吨，产奶8万吨。建设集约化养殖基地120多个，年养殖优质奶牛3万余头，育肥牛羊3万头只，生产冬羔5万只，年牲畜品种改良率高达89%，年畜牧业实现产值6.2亿元，农牧民收入每年增加近2000元。近年来养牛业发展较为迅速，随着牛群数量的增加，牛的传染性疾病发生比例也逐渐增多，对牛结核病调查，有助于掌握阿勒泰市周边地区牛结核病的流行趋势，对当地牛结核病的控制以及制定并评价防制疾病的对策和措施有一定的指导意义。这几年阿勒泰地区调整产业机构，把阿勒泰畜牧产业作为地区支柱型产业之一，大力发展。阿勒泰市作为重要的牧区之一，及时掌握该地牛结核病流行状况，对于经济发展和农牧民致富也起着关键作用。11 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究第2章对新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查2.1材料与方法2.1.1调查对象涉及2009~2013年阿勒泰市12个乡镇的牛只的牛结核病调查，抽样比率为1%。当地的凡是满三月龄的牛均可检测，由于刚配种或临近妊娠的牛容易发生流产或死胎，所以排除3月龄以内、配种及临产奶牛、病牛等，其余的均可作为调查对象。对调查对象实施抽样调查。每个养牛户均为流调点，按照存栏牛中符合调查要求的牛只密度进行抽样。2.1.2调查实验材料牛结核菌PPD、生物显微镜、高速离心机、记录表、毛剪、工作服、注射器、卡尺、4%～6%硫酸、8%盐酸、饱和氯化钠溶液、载玻片、盖玻片等。2.1.3提纯结核菌素皮内变态反应方法[32]根据GB／T18645-2002方法检测，具体操作如下：2.1.3.1注射部位及术前处理把参与调查牛进行编号，在牛的颈侧中部上三分之一处按照常规进行剪毛处理，操作范围约直径10cm，用左手大拇指、食指轻微摄紧术部中央皮皱，然后右手用卡尺对牛术部中央皮皱的厚度进行测量，做好记录。进行操作时要特别注意，术部有没有明显的病变表现。2.1.3.2注射方法12 新疆农业大学硕士学位论文将牛结核菌PPD稀释成每毫升含2万IU之后，皮内注射0.1mL。冻干牛结核菌PPD稀释液应当天用完，剩余部分收集后作无害化处理。不论参与调查的牛的大小，一律统一注射0.1mL（含2000IU）。检疫人员接近奶牛时，先用手多次抚摸奶牛敏感部位，与牛互动，消除牛的紧张应激心理。人员跟进后将自己的右膀紧靠奶牛的左侧前腿根部（在左侧注射），右肘部搭在奶牛背弓后凹部左侧牛背上，右脚朝前，左脚在右脚左后方站定。先用75%的酒精消毒术部，然后进行皮内注射，注射后，皮内应当出现小疱，如果在操作过程中对注射以及相关现象产生疑问，应当重新则15cm以外的部位或者对侧重新进行注射。牛结核菌PPD皮内变态反应操作要点:一是部位；牛颈部同一侧，中上部1/3处区域。二是注射器；针尖不能太宽太长，直径0.45mm、长度3~4mm为宜。三是剂量；牛结核菌PPD剂量不低于2000IU/0.1mL，一般为2000~3250IU，如采取TB根除计划则提高为5000IU,接种量基本为0.1mL，不高于0.2mL。四是间隔距离。牛结核菌PPD注射部位间距15~20cm。五是结果判定。72h后判定,如皮厚差4mm以上，有红肿热痛等炎性反应则判定为阳性；2.1~3.9mm的判为可疑；2mm以下的为阴性。凡判定为疑似反应的牛只，于第1次检疫60d后进行复检，其结果仍为疑似反应时，经60d再复检，如仍为疑似反应，应判为阳性。2.1.3.3结果判定阳性反应：注射局部有明显的炎性反应发生，颈侧皮厚差等于或大于4.0mm；可疑反应：局部炎性反应较轻，颈侧皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm；阴性反应：没有炎性反应的表现，颈侧皮厚差在2.0mm以下。注意：如果术部存在一定的炎性反应，及时是颈侧皮厚差在2.0mm以下，也应当视为可疑。凡是判定为可疑反应的牛，于第一次检疫实施30d以后，进行复检，如果复检结果仍旧为可疑反应，则经过30d之后再次进行复检，如果仍旧是可疑反应，则可以判定为阴性。13 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究2.1.4细菌学检查2.1.4.1样品采集及处理痰液的采集及处理，时间选择在清晨，用硬橡胶管自口腔伸人至气管内，外端连接注射器吸取痰液。痰样品稀薄时，可加入等量的4%~6%硫酸处理，如痰样品粘稠时，则加入5倍量的4%硫酸处理。乳液的采集及处理：采用无菌采集的手法采集牛的乳汁进行检验。检验时将采集的乳汁分置在4~6支离心管中，每管10mL，以3000~4000r/min离心20min之后，提取上层乳脂和管底的沉淀物进行涂片。阴道分泌物的采集及处理：使用消毒棉签蘸取母畜的子宫分泌物进行染色后镜检[12]。2.1.4.2使用萋—尼氏抗酸染色先在玻片上涂布一层薄甘油蛋白（鸡蛋白20mL，甘油20mL，水杨酸钠0.4g，混匀），然后吸取标本滴加其上，涂布均匀。检验标本为乳汁等含脂肪较多的材料，在涂片制成后，可先用二甲苯或乙醚滴加覆盖于涂片之上，经摇动1min~2min脱脂后倾去，再滴加95%酒精以除去二甲苯，待酒精挥发后即可染色。涂片后，经火焰固定，加苯酚复红染色液覆盖，将玻片上在火焰上加热至出现蒸汽（不能产生气泡），如此热染5min（如染色液干涸，须加适量补充）。水洗后滴加3%盐酸酒精脱色30s~60s（至无色素脱下为止）。水洗后，以骆氏美蓝染色液复染1min。水洗，吸干，镜检。抗酸菌应不被盐酸酒精脱色而染成红色，其他细菌与动物细胞可被盐酸酒精脱色而均被染成蓝色。2.1.4.3镜检染色后的结果观察和判定：在显微镜下应看到结核分枝杆菌呈细长平直或微弯曲的杆菌，长1.5~5µm，宽0.2~0.5µm，但在抽样中并未看到结核分枝杆菌。14 新疆农业大学硕士学位论文2.2结果2.2.1各乡镇的牛结核病调查统计结果PPD调查统计结果本次调查从表1得出，2013年阿勒泰市各乡镇检测试验阳性牛有10头，实验阴性的有10977头。对于首次检验结果为可疑反应的59头牛，在间隔30d之后作第一次复检，结果有56头为可疑反应，有3头为阳性反应；再次间隔30d后作再次复检，结果仍旧有55头可疑，1头为阳性。对于两次复检结果均为可疑的，根据相关判定标准可以暂时认定结果为阴性。所以，最终的统计结果为：可疑牛的复检结果是阴性牛55头，阳性牛4头，可疑牛的复检阳性率为6.78%。表12013年阿勒泰市各乡镇的牛结核病调查结果统计表Tab1.BovinetuberculosissurveyresultsinAltayCity2013乡镇调查的农牧民（户）检测数（头）阳性检出数（头）阳性检出率（%）33357140.11131530021167910.1539198004598720.2057516006473980071679400821181110.0691297310.1010876810.13112139001210987100.09合计17415 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究表22013年阿勒泰市各乡镇的牛结核病调查各月份结果统计表Tab2.BovinetuberculosissurveyresultsforeachmonthinAltayCity2013月份调查的农牧民（户）检测数（头）阳性检出数（头）阳性检出率（%）20.2711075320.2121397110.1431369810.14159790051698700618816007189110081612940091569800101477320.191112106830.291214103910987100.09合计174从表2看出，阿勒泰市各乡镇2013年12个月中，12月和1月份阳性检出率高，12月份达0.29%，1月份达0.27%，属于冬季，据调查显示，阿勒泰市冬季多发牛结核病，人型[33]结核病也在此季节多发，表明阿勒泰市个别乡镇牛结核病为人畜共患疾病，人畜共患呈正比趋势。16 新疆农业大学硕士学位论文表32009至2013年阿勒泰市各乡镇的牛结核病调查结果统计表Tab3.BovinetuberculosissurveyresultsinAltayCity2009~2013单位%年份123456789101112合计20090.1800.1500.230.150.1300.110.130.150.130.19620100.200.0600.150.250.0.0600.110.15000.20320110.1300.1500.180.0600.13000.1300.18920120.110.0600.130.06000.0600.1300.080.18820130.1100.1500.200000.060.100.1300.09从表1、3可以看出，阿勒泰市12个乡镇2009年阳性率0.196%到2013年的0.09%，基本呈现逐年降低趋势。在12个乡镇中1和5乡镇的牛结核感染情况最为严重，2009年至2013年都有阳性牛只；2乡镇、4乡镇、5乡镇、6乡镇、7乡镇和11乡镇的情况良好，都是偶有发病，检出阳性率极低。通过对各乡镇的特点进行分析认为，距离市中心距离比较近、养殖规模大、存栏牛只多的镇，牛结核病感染较为严重；距离市中心远、养殖规模较小、密度较小的镇，牛结核病感染比较轻。2.2.2新疆阿勒泰市2009至2013年的牛结核菌PPD皮试阳性检出率比较表42009至2013年阿勒泰市的牛结核菌PPD皮试检出阳性率统计表Tab4.tuberculosisPPDbyintradermalinjectionpositiverateinAltayCity2009~201320092010201120122013存栏数（万头）12.4812.5112.4812.3412.52检测数（头）1168212768148001800010987阳性检出数（头）2326283410阳性率（%）0.1960.2030.1890.1880.09从表4可以看出，新疆阿勒泰市2009年以来抽样调查得出的牛结核病的检出阳性率稳中有降，总体呈下降趋势。2013年的抽样调查结果显示，牛结核病检出阳性率降幅较大。17 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究2.3分析2.3.1新疆阿勒泰市各乡镇阳性检出率的分析阿勒泰市各乡镇的阳性检出率出现地域分布，1乡镇和5乡镇检出率较高，1乡镇为由于人口密集、交通频繁、养殖规模大、结核病传播途径多等情况使得距离市中心距离比较近、养殖规模较大的乡镇，牛结核病感染较为严重。5乡镇为交通要道，是进出阿勒泰地区的必经之路，旁边有阿勒泰飞机场，养殖户多，牛只基本散放在公路两旁吃草，比较频繁所以出现阳性牛只。3镇处于阿勒泰地区西三县的必经之地，容易促进该病的传播。9乡镇、10乡镇养殖规模大，有大型的养殖基地，11乡镇紧邻阿勒泰市，多为散放牛只，这三个乡镇仅出现一例阳性牛，检出率较低。其他乡镇养殖数量上均少于上述三个镇，其中个别乡镇属于农业乡镇，以及个别乡的防疫工作较好，使得检出率为0。2.3.2新疆阿勒泰市2009年至2013年阳性检出率的比较分析通过对2009年至2013年均对上述地区的牛群进行了牛结核病筛查，该病阳性检出率呈逐年下降趋势。在PPD实验的基础上，对结核病牛进行筛选，2013年对10头牛结核菌PPD试验阳性的牛采取了细菌学检查，由于没有开放性结核病牛，加之通过PPD检测出结果的阳性牛只都直接淘汰，结果是没有得到分离出结核分枝杆菌。2.3.3数据结果分析据统计，自从阿勒泰地区2008年全面实施动物疫病防控措施以来，牛结核病检出率都呈下降趋势，一是政府部门通过长期对农牧民开展畜牧兽医专业知识培训，使农牧民对家畜传染病有了一定的认识。二是鼓励和大力扶持农牧民养殖，通过畜牧补助资金使得农牧民积极参与防疫工作。三是对检测阳性牛的淘汰给予一定的补偿，增加了农牧民防疫的积极性，对于1乡镇和5乡镇的牛结核感染情况最为严重牛只存栏量大的乡镇，18 新疆农业大学硕士学位论文防治有了非常明显的效果。阿勒泰市通过不断加强动物疫病防控的措施，加强结核病淘汰、预防接种等防控能力，其中对于淘汰牛只给予农牧民高额的补偿，根据市场价格的走势补偿，且资金及时到位，也促进了农牧民也积极配合检测，随着农牧民的积极性提高，政府防疫部门也加强了春冬季防疫员管理制度，强化牛只定期的预防接种，使得阳性牛只能够及时的发现淘汰。个别乡镇的检出率持续较高还有一个很重要原因是有人型和牛型结核菌交叉感染的情况，在调查过程中发现，有两户农牧民出现人畜共患的情况，据阿勒泰市疾病控制中心调查显示，牛型结核病人畜共患呈正比关系，是阿勒泰市重点防控疾病之一，近年来此病也有抬头趋势。19 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究第3章调查评价与措施探讨3.1阿勒泰市牛结核病的流行情况及特点实验结果表明：2013年阿勒泰市的牛结核检出率为0.09%，与阿勒泰地区散养牛的牛结核近几年的发病率基本吻合。从近5年的检测数据来看，本次的调查结果比较可信，通过比较认为，阿勒泰市2013年的牛结核病检出阳性率有所下降。2009年以来，阿勒泰市的存栏牛阳性检出率在0.19%左右，2010年略高，为0.203%，2011年和2012年又有所下降，分别为0.189%和0.188%。从区域分布特点上对调查样本进行抽样分析表明：1、3、5这三个镇与市区距离较近，农牧民养殖牛的的规模比较大，其场内的牛结核病感染率较高。从时间上来分析，一年中，11月至4月均有检疫出，12月、1月检出率较高，是因为阿勒泰市处于较为寒冷的地区，冬季最低气温可达零下40°C，加上饲料缺乏，圈舍饲养环境多为湿冷，导致牛只的抵抗力较低，易感结核病。从饲养环境方面进行分析表明：饲养密度较大的饲养场的牛结核病感染率较高，说明牛结核病的感染于饲养场的环境卫生、饲养密度、通风采光等条件有着密切的关系，饲养人员也会出现交叉感染机率。从结核病病变部位、类型方面进行分析表明：参与调查的牛中牛结核病主要表现为肺型结核和乳房结核，这可能与参与调查的牛多数为奶牛（占87.3%）有关。由此说明，牛与牛之间的结核病传播主要是通过直接接触的途径传播，人可能会通过与牛直接接触或通过饮用感染了的牛奶而感染结核病。3.2流行原因分析3.2.1从饲养现状方面分析20 新疆农业大学硕士学位论文3.2.1.1动物防疫部门监管不到位阿勒泰市的牛养殖大多数是个体散养，分散的饲养方式现状使得业务技术部门的结核病防治技术监督难度加大，疫病防控治疗观念性差，有些防护措施无法有效地到位，部分牧民对病死畜掩埋处理时，缺乏对无害化处理的常识，在处理过程中，会出现选址不当、掩埋不深、消毒不严、处理不够彻底等问题。容易出现对环境和地下水源造成一定的污染，给防疫造成了一定的隐患。3.2.1.2牧民对防疫检疫意识淡薄牧民由于法律意识比较淡薄，缺乏病死家畜无害化处理常识以及养殖知识，不重视疫病的综合防治，甚至躲避牛群的检疫，对于购买的牛只，也不做运输检疫程序，对于牛舍也没有进行定期的消毒，变卖患病家畜，无法变卖的，随意抛弃造成对环境、水源等的污染，严重的危害人民群众健康，致使此病出现，容易引发公共卫生事件。3.2.2从行政措施方面分析3.2.2.1检疫人员工作素质较低在阿勒泰市各乡镇的调查中发现，有些乡镇的检疫和执法监督行为不规范。检疫工作只是走过场，不是每一家都进行，执法人员多为村级防疫员，他们的的思想素质、业务素质不高，有些也不重视自身的思想素质的提高，在检疫工作中，只看重收费，不看重检疫。3.2.2.2无害化处理成本较高按照国家的结核病防治办法和要求，对于检测结果为阳性的奶牛应当作淘汰处理，如果采取强制性的淘汰措施，政府补偿范围小标准低，近年来只有个别牧民得到相应补助，但是有的牧民却存在申请了补偿，却是得到了一部分，这将对农牧民造成极大的经[34]济损失。容易引发或激化社会矛盾，如果政府给予一定的补偿，又会加重当地政府的[35]财政负担，严重影响了牛结核病的防疫工作的正常开展。21 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究所以导致在兽医检疫部门进行临场检疫的时候，个别的牧民或牛场担心自己家的牛检出阳性，怕损失，就会逃避检查，但是这些没有检查的牛只有潜在的威胁，造成了结[36]核病的广泛传播。这些情况给牛结核病的控制带来了一定的难度。为此，技术检疫措施和检测工作都失去了应有的意义，业务技术部门和农牧民积极性受挫。按国家对奶牛的检疫和收购生鲜奶质量的明确规定,是可以及时的控制结核病传播，但往往在实际工作中由于人力、物力和管理体制等方面的问题,监督措施很难落实到位:一是动物卫生监督管理与动物疫病检疫检测是分离的,负责检疫检测的单位没有执法权限,对于农牧民拒绝检疫不能实施有效地执法监督。二是因人力、物力不足,缺少对流通的有结核病的生鲜牛奶违法行为长期的监管,结核病牛所产牛奶不愁销路,无形中支持了结核病牛的饲养和拒绝检疫的行为。三是缺少奶牛交易流通环节的有效监督,随意买卖,不按规定进行化验室检验检疫,造成了结核病牛能够跨乡镇甚至地区[37]进行传播。3.2.3从技术措施方面分析按照我国的有关规定，只要PPD实验为阳性，就应当实施扑杀和无害化处理。但是，阿勒泰市的兽医人员的技术水平差距较大，年龄也参差不齐，责任意识淡薄，而且由于基层动物检疫缺少专业设备，进行实验时的条件不同，比如温度、湿度、试剂质量以及实验者技术操作的熟练度等的影响，检疫时要跟随农牧民到牧场，有些农牧民往往出现漏检。加之结核菌素试验难免会有一定的误差，特别是有的养殖场采用了一定的措[38]施，来妨碍检测结果，容易出现假阳性和假阴性的现象，在检测上有效检疫较低。另一方面，在调查中发现，乡镇的兽医站没有独立使用资金的权利，需要上级部门拨款，使得检疫专项经费不能够及时到位，影响检疫工作的开展。在对患病牛进行无害化处理时，有些药物运输成本较高，检疫出牛只多为草场戈壁3.3综合防治措施的探讨3.3.1加强动物防疫检疫体系制度22 新疆农业大学硕士学位论文3.3.1.1深化兽医管理的体系建设增强基层组织的自我意识，统一思想，加深对体制改革的理解，将不同类型的兽医机构职能进行细分，整合资源，协同配合，处理好各机构的关系，才能够将相应的管理[39]制度加以完善和健全。政府部门应加强结核病牛扑杀补偿机制，制定出更为有力的监督、保障机制。要重视动物检疫工作，加强对动物检疫工作的领导和监督，尽量减少出[40]现由于职责不清导致责任与权力两方面的脱节，发生推脱、拖延等不良现象。3.3.1.2加强兽医防疫的项目建设利用市级地区级科技项目或其他畜牧项目来作为载体建设和推动兽医防疫工作的发展，需要政府加强对立项过程的重视与支持，把动物检疫的各项开支纳入政府财政预[41]算，加大资金的投入。在基层兽医站所的硬件建设方面，切实的规划好基层兽医站防疫的基础设施配备，装备动物检疫中快速检测设备，建立健全动物检疫的实验室设施设[42]备，使其完全具备动物防疫的各项职能。能够将奶牛结核病扑杀补偿经费列入市地方财政预算,对于检疫、结核病牛的无害化处理应当给予必要的经费保障,对农牧民的结核病牛扑杀能够给予合理补偿,从而真正建立起奶牛结核病净化的长效机制。3.3.1.3落实好基层兽医岗位制度建设阿勒泰市近几年来进一步加强了乡镇上畜牧兽医站岗位制度，而且积极推进乡村两级动物防疫的建设，基本上村村有防疫员，并对他们进行工作实绩业务年终考核，而且在有条件的情况下对工作人员进行定编、定员、定岗，充分调动每个畜牧技术干部的工作积极性，知识和技术上的更新性。据调查反应，阿勒泰市在建立村级防疫员制度及责任到岗等制度，加强了阿勒泰市在动物防疫疾病上的防控，等一系列措施，促使牛结核病从2009年度到2013年度的阳性检出率呈逐年下降趋势，但是要使得结核病的阳性检出能够保持目前效果，还要继续加强基层兽医人员的岗位制度建设。3.3.2要加强防疫检疫工作23 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究3.3.2.1加强牲畜流通管理制度传染病重在预防，控制和扑灭疫情，而监管需要用具体措施进行，首先要严格按动物运输检疫制度执行，强制性对来往运输牛只车辆进行运输检疫，对异地销售的牛只要严格进行产地检疫、隔离，防止交叉传染。实行严格的市场准入制度，凡是无检疫证、运输证、工具消毒证、动物检疫标识的动物及动物性产品不得进入流通环节，一旦经营者违规经营，要立即严肃处理，严重违法者要取缔经营资格，监管部门要实行严格的产[43]地检疫制度，严格执法，决不徇私。比如，种畜的调运环节，需要通过免疫调运的审批从而加大防控。而在检疫过程中，要做好预防消毒工作，尤其是对检疫需要的器械要做到消毒到位，防止交叉感染。加强部门在各类检疫中执法职能，发挥政府在检疫工作中的领导作用。3.3.2.2建立健全科学的补偿机制在具体实施上，要做到检出的阳性家畜立即进行无害化处理，加大阿勒泰市政府对[40]动物检疫部门的资金投入，建立病死畜无害化处理的专项经费，专项专用，比例配比，可以对病死畜进行收购，建立补偿奖励制度等，保证资金连续性，最大补偿处理牛的畜主，使此项工作长期有效的开展。3.3.2.3要加强检疫监督根据调查，有的农牧民在发现阳性牛之后，就偷偷地把阳性牛卖掉以减少经济损失。致使传染源长期存在，难以掌控，造成了牛结核病的扩散。为此，据调查，阿勒泰市政府部门积极改进补偿机制，对积极配合检出阳性牛的农牧民给予市场价格近85%的补偿，使得农牧民较为满意，得到补偿的农牧民也为阿勒泰市相关部门建立了好的口碑。所以政府部门应当做好检疫监督工作，强化疫病追踪、动物标识等防疫体系的建设，对于检出的阳性牛，应当采取有利的行政措施进行及时的扑杀，并彻底的消毒污染场地，消灭传染源，给予农牧民一定的补偿，管理农牧民积极配合。24 新疆农业大学硕士学位论文3.3.3要加强技术培训和宣传力度3.3.3.1对广大牧民进行宣传教育通过电视、宣传栏等政府部门可以运用各种媒体多种形式对农牧民开展全面的防疫知识宣传教育工作，根据阿勒泰市的风俗习惯和文化特点进行统一的宣传教育活动，在全社会广泛的宣传结核菌病对动物、民众危害的严重性，加强预防知识的普及，特别是要加强在农牧区及阿勒泰市夏牧场的宣传教育,加大对牛羊等动物疫病防治的强制性和重要性政策宣传和科普宣传，提高农牧民的科学文化水平和对牛结核病防治的重视程度，以及动物防疫检疫的强制性、重要性的政策意义，使得广大牧民从强制接受防疫检疫到自觉自愿的接受防疫检疫的意识转变。同时，要采取措施，加强对牛群的管理，鼓[35]励其进行集约化饲养，以利于集中进行检疫和疾病防治。提高农牧民对结核病危害的认识，增强的他们社会责任感和接受；提高他们对牛检疫的自觉性及对新入圈舍的奶牛[37]检疫监督意识，禁止未检疫牛入圈饲养，净化饲养环境。3.3.3.2对基层兽医人员进行定期培训在面对复杂多变的动物疫病，检疫要求也日益严格，需要重视提高动物防疫监督人员的素质，阿勒泰市兽医防疫人员除了市级兽医站所的人员属于科班出身，乡镇基本属于中专毕业及再深造，所以要注意加强对基层兽医人员的培训，邀请专家到基层进行指导，加强同行业之间的交流，增强兽医体系的软实力。提高防疫员和检疫员的知识水平和防疫技术水平，规范其操作，使其熟练掌握相关的知识和操作技能，提高基层兽医人[39]员技术熟练程度，积极做好牛结核病的检疫和净化工作。对相关兽医人员进行系统全方位的培训和有目的的进行动物检疫法律法规培训，从而加强检疫执法人员的政治素质，提高法律知识，专业技术和语言技巧，加强专业执法对伍的素质，要统一着装，佩戴统一标志，以此提高检疫员的工作水平。3.3.4积极预防，提高牛群的免疫力3.3.4.1防止结核病传人25 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究在此次调查过程中，发现个别乡镇有人畜共患的情况出现，要在清净地区或无结核病健康畜群，每年春秋各进行一次变态反应检疫，补充牛只时，先就地检疫，确认阴性方可引进，运回隔离观察1个月以上，再进行检疫阴性，才能合群。结核病人不能饲养牛群，要确保牛舍环境卫生。若检出阳性牛只的农牧民或饲养员，应积极到疫病疾控中心去做进一步的体检，以防人畜共患，交叉感染。积极配合疾控中心的医护人员对牛结核病的防控工作，必要时可以“联合防控”牛结核病，比如共同参与调研，共同对牛结核PPD阳性人群和牛群进行流行病学分析，共同诊断病情，共同防控，一是可以更好的控制牛的结核病情，二是可以提高农牧民对牛结核病的防控意识。3.3.4.2净化污染牛群不断检出有阳性病牛的牛群，每年要进行四次以上的检疫，检出的阳性牛立即分群隔离。剔除结核菌素反应阳性牛后的牛群，应间隔1~1.5个月检疫一次，连检3次均为阴性者，认为是健牛可放入假定健康牛群。开放性患病牛立即淘汰，在本市一旦发现阳性牛，应立即淘汰和做无害化处理。3.3.4.3培养健康犊牛群在阿勒泰市有条件的养殖场，要加强培养健康的犊牛群，要设置分娩室，分娩前消毒乳房及后躯，产犊后与母牛分开，用2~5%来苏尔溶液消毒犊牛全身，擦干后立即送入预防室，饲喂初乳3d，以后喂健康乳或消毒乳。若条件不够的牧民也应将犊牛在6个月的隔离饲养中检疫3次，若为阳性牛就淘汰，阴性牛且无任何可疑临床症状，则放入假定健康牛群。3.3.4.4加强消毒根据调查显示，阿勒泰市农牧民牛圈的饲养环境较差，需要对圈舍加强消毒。每年对牛舍进行预防性消毒2~5次，每当畜群检出阳性牛时，都要进行一次牛舍的大消毒，26 新疆农业大学硕士学位论文消毒剂可以选用5%来苏尔溶液、10%漂白粉溶液或20%石灰乳。及时对牛群活动场地进行彻底消毒，保持每天清扫1次，并连续消毒3~5d，对于牛群活动区要进行灭鼠工作，除杂草、堵塞鼠洞、及时清除垃圾粪堆，切断传播途径，做到消毒要到位；定时的[39]给牛喂食丙苯咪唑的驱虫药，做到驱虫到位，提高牛的免疫力。3.3.4.5加强饲养管理由于阿勒泰市冬季时间较长，气候干冷，要加强饲养管理，根据调查，阿勒泰市牛群的饲养管理多为由农牧民散放，少数为大型养殖场，一般在饲养场内的饲养员是不可以随意的更换，必须做到各执各行，做到系统的定位管理，同时对于农牧民来说要注意其自我的防护意识，定时进行相关项目体检，有必要时去市疾控中心可以选择疫苗注射来提高自身的免疫力。3.3.5积极引进优良牛种阿勒泰市动物防疫部门近几年积极引进优良牛种，在引进前的进行了充分的检疫工作，促进了检出率下降的趋势，所以在引进优良牛种时，要注意隔离观察，逐步的淘汰牛群中体质弱、易感染、发病的牛种。对于患病牛，要尽快采取有效措施进行处理。提倡自繁自养，避免盲目的引进，有计划地运用优良牛种来取代易感牛种。3.3.6做好相对应急处治工作动物疫情应急反应机制的建设，需要从疫情报告、应急启动预案，积极组织重大动物疫情应急演练，阿勒泰市动物防疫部门应完善疫情后续检测评估及生产恢复和调查总结，从而建立快速、灵敏、特异、简便的病原微生物检测方法。出现牛结核病要从人畜共防的高度上来考虑构建“突发疫情”的保障体系，及时对疾病情况进行采集、处理、[44]确诊和分析。对于病畜要做到坚决扑杀，应尽快淘汰，防止疫情扩散，在扑杀无害化处理前须在隔离牛舍内饲养，做到“五不”即：不宰杀、不食用、不销售、不转运、不[41]丢弃。使得这类疾病得到全方位地扼杀，共同维护和促进阿勒泰市畜牧业的健康发展。27 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究第4章结论2009至2013年对新疆阿勒泰市乡镇牛结核病的流行情况调查研究，结果为PPD试验阳性的有10头，牛结核病阳性率为0.09%。2013年的12个月中，12月和1月份阳性检出率高，12月份达0.29%，1月份达0.27%，其中1镇和5镇的牛结核PPD阳性检出率，分别为0.11%和0.20%。2009~2013年对阿勒泰市乡镇的牛群进行了牛结核PPD的筛查，由2009年的0.196%到2013年的0.09%，呈现牛的阳性率检测下降趋势。建议采取的防控措施：一要利用好项目资金加强兽医防疫体系的建设；二要加强兽医工作的奖励机制，建立健全科学的补偿机制；三要利用项目资金加强培训和宣传，对基层兽医人员进行定期技术培训；四要预防人畜共患，定期对牛群检疫，积极配合市疾控中心对农牧民的诊断和治疗，必要时可以采取“联合防控”措施。28 新疆农业大学硕士学位论文参考文献[1]王素坤.牛结核病的诊断及防制措施[J].养殖技术顾问,2013,05(11):21-23.[2]王楠,王作友,江希玲,等.四种不同检测方法在奶牛结核病诊断中应用的比较研究[J].吉林畜牧兽医,2012,11(22):26-28.[3]陈江.牛结核病γ-干扰素诊断方法的优化与应用[D].湖南农业大学,2009年.[4]蒋柏茂.奶牛结核病实验室诊断技术研究进展[J].中国奶牛,2010,07(29):41-42.[5]肖开提,阿曼古丽·加孜,图尔荪·艾合麦提,等.新疆边境地区奶牛结核病流行病学调查研究[J].中国动物检疫,2012,05(10):38-39.[6]李树春.牛结核病流行病学调查和诊断[D].乌鲁木齐市:新疆农业大学,2010年.[7]胡来根.牛结核病的诊断与防制[J].畜牧与饲料科学,2009(4):110-111.[8]杨光旭,邹志艳,袁理,等.结核病流行病学调查方法的研究[J].中华中西医杂志,2004,5(23):34-35.[9]鲁俊鹏,邹潍力.牛结核病诊断方法研究进展[J].动物医学进展,2006,06(11):15-16.[10]SanjayBasu,AlisonP,Galvani.TheEvolutionofTuberculosisVirulence[J].BulletinofMathematicalBiology,2009(71):1073-1088.[11]马秀玲.奶牛结核病的发病特点及防控对策[J].现代农业科技,2007(24):172.[12]王伟忠,杨莉萍,杨晓芳,等.奶牛布鲁氏菌病与结核病的防制[J].畜牧与饲料科学,2008,29(3):88-90.[13]段旭基.陕西关中地区奶牛结核病调查与PCR检测方法研究[D].西北农林科技大学,2009年.[14]哈尔滨兽医研究所,中国农业科学院编著.动物传染病学[M].北京,农业出版社.[15]姜秀兰,王春风,王春芳,等.分枝杆菌Ag85A基因的克隆及序列分析[J].中国兽医科技,2004,34(09):21-24.[16]ThoenCO,Garcia-MarinJE.Mycobacterjum[A].In:Compendiumofanimalproduction[M/CD].Wallingford,Oxon,UK:CABInternationalpublishingInc,2002.[17]张秀华,刘思国,沈国顺,路伟.牛结核病[J].畜牧与兽医,2005,37(02):57-60.[18]RenwickAR,WhitePC,BengisRG.BovinetuberculosisinsouthernAfricanwildlife:amulti-specieshost-pathogensystem[J].EpidemiologyandInfection,2007(05):529-540.[19]蔡宏.牛结核病流行病学和分子生物学研究进展.中国兽医杂志,1996,22(10):45-47.[20]IsabelN,RitaccoV.AnupdateonbovinetuberculosisprogrammesinLatinAmericanandCaribbeancountries[J],VeterinaryMicrobiology,2006(112):02-04.[21]QuesniauxVC,FremondM,JacobsS,etal.Toll-likereceptorpathwaysintheimmuneresponsestomycobacteria[J].MicrobesandInfection,2004(06):946-959.[22]何萍,李旭东.结核杆菌的检验方法进展[J].中华现代临床医药杂志,2004,05(04):79-80.[23]ParraA,GarciaN,GarciaA,etal.DevelopmentofAmoleculardiagnostictestappliedto29 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新疆农业大学硕士学位论文致谢在论文即将完成之际，首先向我的导师雷程红副教授、吕春华农业推广员致以诚挚的谢意。在三年研究生学习期间，导师在科研和学习方面给予我大量的有益指导，导师渊博的学识，严谨的治学态度，勤奋的工作作风，科学的研究方法使我受益匪浅，从课题的设计、实验操作、结论推断、论文撰写及发表等方面，都给予悉心指导，此论文是在导师的耐心点拨和诚恳建议下，一次又一次的修改，最终完成的。从选题到论文的最终完成，导师都给予我细心的指导和不懈的支持。她对待工作严谨、认真和拼搏的作风使我终生受益，是我今后在工作和生活中的榜样。谨向导师致以最崇高的敬意和衷心的感谢!感谢新疆阿勒泰地区动物疾控中心吕春华农业推广员对我实验提供的所有的支持和帮助。感谢新疆阿勒泰地区动物疾控中心其他同志对我实验提供的的支持和帮助。感谢我的父母对我多年辛苦的的培养和教育，感谢我的爱人和亲人们对我工作和学习的支持。31 新疆阿勒泰市牛结核病的流行病学调查及防控措施的研究个人简历◆个人概况：姓名：盖守睿政治面貌：中共党员性别：女族别：汉族出生日期：1984年11月02日职称：助理讲师◆教育背景：2003年9月至2007年7月就读于石河子大学获得农学学士学位。2010年9月至今就读于新疆农业大学攻读兽医硕士学位。◆工作经历2008年2月至今就职于新疆阿勒泰畜牧兽医职业学校。◆在读期间完成的项目1、参与自治区精品专业—畜牧兽医专业建设2、参与自治区精品课程—《动物防疫与检疫》课程建设3、主编校本教材《兽医临床诊疗技术实训指导书》、《牛羊常见病防治技术》、《牛羊病防治实训指导书》、《家畜疾病防治》教材。4、2011年参加自治区动物外科手术技能大赛获得三等奖。32
