西尼罗河病毒检测试剂盒说明书

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1、西尼罗河病毒检测试剂盒广州健仑生物科技有限公司西尼罗河病毒检测试剂盒【用途】美国FOCUS西尼罗河（WestNile）病毒IGMELISA，利用了西尼罗重组抗原检测人体血清或血浆中的西尼罗抗体。本实验仅用于辅助诊断人感染了西尼罗病毒，不用于筛查血液或血液成分。仅供专业人员体外诊断使用。【代理商】广州健仑生物科技有限公司【概述】感染了西尼罗病毒会导致包括脑炎等一系列症状的疾病，西尼罗病毒在世界广泛传播，已在50多个国家检测出该病毒。本试验经CDC提供的试剂检验与验证。本试验使用了一种称为WNRA的重组抗原，它可以作为西尼罗病毒感染的快速血清学指标，WNRA蛋白是一种重组抗原，它是由含

2、有西尼罗病毒两个抗原的序列多肽构成。【实验原理】检测西尼罗病毒IgG/IgMELISA是基于两步夹心法原理制造的。【提供材料】1.微孔板（96孔12x8）：即用每孔均包被结合西尼罗重组抗原的单抗。2－8℃下保存至保质期。注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。2.IGM样品稀释液：1支25ml即用2-8℃下保存至使用。3.IGM阴性质控：1支30ul2-8℃下保存至使用。要长时间储存，将其分装于小瓶里，在-70℃下储存。4.IGM阳性质控：1支30ul2-8℃下保存至使用。要长时间储存，将其分装于小瓶里，在-70℃下储存。5.洗涤液（10X）：1瓶120ml2－8℃下保存至使用。6.

3、EnWash：1瓶20ml2－8℃下保存至使用。7.酶联物：一瓶6ml即用2－8℃下保存至使用。8.TMB底物液：1支9ml即用2－8℃下保存至使用。9.终止液；1支6ml即用2－8℃下保存至使用。试剂应避免反复冻融。【操作步骤】在使用前将所有试剂和样品平衡至室温，并轻轻倒转使其充分混匀。实验准备：将10X的浓缩洗涤液稀释,将120ml的浓缩洗涤液加上1080ml的蒸馏水，摇匀，至无任何沉淀，稀释好的洗涤液最多可在室温下放置两个星期。准备实验所需的板条，剩余的板条应尽快放入袋子里重新密封，在2－8℃下储存至保质期。【操作步骤】1.标记将要使用的板条，注意微孔板已经按照统一排列，如下

4、所述包被西尼罗抗原和质控抗原。西尼罗抗原板条＃1板条＃2AWNRAWNRABWNRAWNRACWNRAWNRADWNRAWNRAENCANCA该说明书由广州健仑生物科技有限公司技术人员有编译，如有出入请以英文原版为准！谢谢！西尼罗河病毒检测试剂盒广州健仑生物科技有限公司FNCANCAMNCANCAHNCANCA2.将血清样品﹑阴性质控和阳性质控同样地用样品稀释液按1：300稀释。3.每孔加入50ul稀释后的样品，以下为一个血清样品使用一个板条的典范。板条1板条2血清样品AIGMN样品1BIGMN样品1CIGMP样品2DIGMP样品2EIGMP样品2FIGMP样品2MIGMN样品1H

5、IGMN样品14.封板，在湿润的温育器里37℃下温育1小时。5.温育后，用自动洗板机，使用洗涤液洗板6次。6.在每孔中加入50ul的酶联物。7.封板，在湿润的温育器里37℃下温育1小时。8.温育后，用自动洗板机，使用洗涤液洗板6次。9.每孔加入150ul的EnWash，在室温下温育5分钟10.温育后，用自动洗板机，使用洗涤液洗板6次。11.每孔加入75ul的TMB底物液。12.封板，在室温下，避光处温育10分钟。13.每孔加入50ul的终止液终止反应。14.在450nm处读取吸光率。【结果计算】结果的变化将会非常大，以下结果仅供指引。计算ISR值：计算在同一实验里WNR抗原的两个阴

6、性质控的平均值，计算同一实验里NC抗原的两个阴性质控的平均值，用WNRA/NCA，得出阴性质控的ISR值。同样地计算阳性质控和样品得ISR值，阳性质控的ISR值应高于3.0，阴性质控的ISR值应低于1.5。结果的判断：ISR结果解释≤2.0阴性没有检测到IGM抗体2.0－3.0可疑需确证实验在某些特殊的例子中，曾报≥3.0阳性存在IGM抗体，建议做确定性实验道有假阳性，但对梅毒病人无限制。假如样品的ISR值大于2.0，但是WNRA和NCA的OD值均偏低，可视为潜在假阳性。以下该说明书由广州健仑生物科技有限公司技术人员有编译，如有出入请以英文原版为准！谢谢！西尼罗河病毒检测试剂盒广州

7、健仑生物科技有限公司为样品1排除标准的范例。排除标准：计算阴性质控的WNRA和NCA值：WNRANCANO.10.1530.126NO.20.1250.110总计0.2600.236平均WNRA=0.260/2=0.130NCA=0.236/2=0.118ISR=0.130/0.118=1.10任何阴性质控的ISR值高于1.5，则实验需要重做。计算阳性质控的WNRA和NCA值：WNRANCANO.10.6350.190NO.20.6550.178总计1.2900.36