基因工程(复习)

《基因工程(复习)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、一、原核基因的结构二、真核基因的结构（二）基因操作的工具基因的剪刀—限制性内切酶基因的针线—DNA连接酶基因的运输工具—运载体限制性核酸内切酶1.特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，在特定的切点(磷酸二酯键)切割。2.分布：主要在微生物(细菌，酵母菌等）。3.结果：产生黏性末端或平末端4用途：用于提取目的基因和切割运载体被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端或平末端？要切两个切口，产生

2、四个末端。基因的针线——DNA连接酶（二）基因操作的工具连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键。DNA连接酶的分类：AATTGCCTTAAGDNA连接酶与DNA聚合酶的异同点：相同点：形成磷酸二酯键但是：1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键2）DNA聚合酶需要以一条DNA链为模板；而DNA连接酶不需要模板。运载体1.作用：2.条件：3.种类：质粒（常用的）、噬菌体的衍生物和动植物病毒。将外源基因送入受体细胞。(1)能够在宿主细胞中复制并稳定

3、地保存。(2)具多个限制酶切点(3)具有某些标记基因，便于进行筛选。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。1.以下说法正确的是（）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形成氢键C练习2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制（）B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNAD练习3.(多选）有关基因工程的叙述中，错误的是（）A、基因工程技术能定向地改造生

4、物的遗传性状，培育生物新品种B、重组DNA的形成在细胞内完成C、目的基因须由运载体导入受体细胞D、质粒都可作为运载体BD练习5）基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因B、目的基因与载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达C巩固练习基因操作的基本步骤目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测和鉴定获取目的基因的方法：1从基因文库中获取（基因组文库或CDNA文库）2利用PCR技术扩增目的基因3人工化

5、学方法合成基因组文库从基因文库中获取目的基因：基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(genelibrary)基因组文库:基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库.部分基因文库:基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库.1变性（90-95度）2退火（55-60度）3延伸（70-75度）2、利用PCR技术扩增目的基因①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物___

6、_复制___________的核酸合成技术③条件：_______________________、_______________、___________、___________.②原理：__________④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）⑤结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制已知基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对引物耐高温的DNA聚合酶指数2n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增⑥过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___

7、________b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录标记基因：是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来1.将目的基因导入植物细胞农杆菌

8、转化法3、将目的基因导入微生物细胞用Ca2+处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子四环素抗性基因氨苄青霉素抗性基因(四)目的基因的检测与鉴定检测—鉴定——①检测转基因生物染色体上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法：方法：方法：DNA分子