基因工程复习

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1、基因工程复习一、获取目的基因从基因文库中获取反转录法方法人工合成化学合成法PCR技术扩增目的基因问题1：人工合成的目的基因和从基因文库中获取的基因有何区别？问题2：在获取目的基因过程中，使用到哪个工具酶？人工合成的目的基因没有非编码区和内含子限制性内切酶几种限制性内切酶作用部位：黏性末端特点：作用部位：平末端特点：磷酸二酯键旋转对称、碱基互补配对磷酸二酯键旋转对称二、构建基因表达载体（核心）1、基因表达载体（重组DNA分子）组成：启动子、目的基因、终止子、标记基因。2、如何构建基因表达载体:酶切——同一种限制酶

2、连接——DNA连接酶3、运载体种类：质粒、动植物病毒、λ噬菌体衍生物。4、运载体具备的条件：①在宿主细胞保留并大量复制②有多个限制酶切点③有标记基因，便于筛选。5、一般质粒都是被人工改造。三、导入受体细胞生物种类方法受体细胞简单过程植物细胞动物细胞微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法显微注射法Ca2+处理法体细胞体细胞体细胞受精卵感受态细胞目的基因插入Ti质粒的T-DNA转入农杆菌导入植物细胞稳定和表达目的基因表达载体提纯取卵显微注射受精卵新性状动物Ca2+处理受体细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合吸

3、收DNA四、目的基因的检测和鉴定转录翻译复制复制逆转录DNARNA蛋白质中心法则思考一：受体细胞的DNA中是否已结合目的基因？1、目的基因的检测——分子水平目的方法结果受体细胞的DNA中是否已结合目的基因？DNA分子杂交技术出现杂交带思考二：目的基因是否转录出mRNA?目的方法结果分子杂交技术出现杂交带目的基因是否转录出mRNA？思考三：目的基因是否翻译成蛋白质？目的方法结果目的基因是否翻译成蛋白质？抗原—抗体杂交出现杂交带2、鉴定——个体水平基因工程概念基因工程：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和

4、“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出所需要的基因产物。基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平基本过程获取→连接→导入→检测鉴定结果人类需要的基因产物（11天津理综卷）39、某致病基因h位于X染色体上，该基因和正常基因H中的某一特定序列BclI酶切后，可产生大小不同的片段（如图1，bp表示碱基对），据此可进行基因诊断。图2为某家庭病的遗传系谱。下列叙述错误的是Ah基因特定序列中Bcl1酶切位

5、点的消失是碱基序列改变的结果BII-1的基因诊断中只出现142bp片段，其致病基因来自母亲CII-2的基因诊断中出现142bp，99bp和43bp三个片段，其基因型为XHXhDII-3的丈夫表现型正常，其儿子的基因诊断中出现142bp片段的概率为1/225、现有一长度为1000碱基对(by）的DNA分子，用限制性核酸内切酶EcoR1酶切后得到的DNA分子仍是1000by，用Kpn1单独酶切得到400by和600by两种长度的DNA分子，用EcoRI、Kpnl同时酶切后得到200by和600by两种长度的DNA分

6、子。该DNA分子的酶切图谱正确的是（）26、（8分）聚合酶链式反应(PCR技术)是在实验室中以少量样品DNA制备大量DNA的生化技术，反应系统中包括微量样品DNA、DNA聚合酶、引物、足量的4种脱氧核苷酸及ATP等。反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板，故DNA数以指数方式扩增，其简要过程如右图所示。微量DNA样品DNA互补链分离开为单链以单链为模板合成子代DNA循环重复（1）某个DNA样品有1000个脱氧核苷酸，已知它的一条单链上碱基A:G:T:C=1:2:3:4，则经过PCR仪五次循环后，将产生个

7、DNA分子，其中需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数量至少是个。（2）分别以不同生物的DNA样品为模板合成的各个新DNA之间存在差异，这些差异是。（3）请指出PCR技术与转录过程的三个不同之处：①。②。③。27、（14分）在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答：（1）A过程需要的酶有______________________________。（2）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两

8、个条件是________________________________。侵染抗虫基因含kan质粒重组质粒土壤农杆菌含重组质粒土壤农杆菌A构建导入B培养选择转基因抗虫植株再生植株愈伤组织离体棉花叶片组织C诱导选择分化D检测（3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入________________。（4）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用__