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《新城疫病毒JS17株的分子特性及单克隆抗体的制备》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、新城疫病毒JS/17株的分子特性及单克隆抗体的制备新城疫是由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus,NDV）引起的一种高度传染性禽类疾病，每年对全球养禽业造成严重的经济损失。近十几年来基因叩型NDVft亚洲、非洲和欧洲等地区有大规模的爆发，是目前流行的主要基因型。了解NDVt要流行毒株的分子进化及病毒抗原变化情况,对NDV&控具有重要指导价值,为深入研究NDV勺流行病学提供基础依据。本研究首先通过对鸡群流行的NDS离株JS/17进行全基因组序列测定及遗传进化分析,其次以原核表达F、HN蛋白及全病毒
2、分别为免疫原，进行单克隆抗体制备，并对获得的单克隆抗体的特性及其识别抗原表位进行鉴定。具体研究内容及结果如下：1.基因叩型分离株遗传进化分析从江苏省某发病鸡场分离到1株新城疫病毒,命名为Chicken/Jiangsu/17/2006（简称JS/17）。毒力测定：MDT为68h,ICPI为1.812,SPF鸡经点眼滴鼻感染该病毒于第4d出现明显的神经症状,6d内全部死亡,表明该分离株为速发型强毒株。利用RT-PC时法扩增JS/17分离株相互重叠的6个病毒基因片段,测序后拼接全长为15192nt,F蛋白的裂解位点为<
3、sup>112RRQKRF117,符合NDV虽毒株的分子特征。利用软件Mega6.0对ND%:基因组序列构建遗传进化树，发现JS/17株与WF00G/2000ffiZJ1毒株的亲缘关系最近，位于同一分支，属于基因vnd亚型。与传统疫苗株LaSota、Clone30、Mukteswar相比,JS/17分离株的F和HN蛋白在功能性关键位点发生了多个氨基酸差异,表明流行毒株与疫苗株存在较大差异。2.JS/17毒株单克隆抗体的制备（1）原核表达F蛋白胞外区,纯化后免疫小鼠。细胞融合后，采
4、用ELISA、IFA和Westernblot筛选共获得10株阳性杂交瘤细胞1F4,2F1,3D4,4C5,4D6,7A5,7D8,7E2,7E4和8F7。（2）原核表达HN®白胞外区,制备和筛选方法同上,仅获得1株单抗2G8。（3）全病毒免疫小鼠,制备和筛选方法同上,共获得了4株阳性杂交瘤细胞,即1D44D93A3和4A7。其中，1D4和4D9特异性结合HN蛋白。3.单克隆抗体的特性及识别抗原表位的鉴定单抗1D4和4D9有IFA反应而无法用于Westernblot鉴定，判断其识别HN蛋白的空间构象表位。它们具有很
5、高的血凝抑制（HI）效价（214）,并对NDVt中和作用。另外，这两株单抗均特异识别ClassII毒株包括LaSota（基因II型）、SX10（基因VI型）和F48E9（基因IX型），而与ClassI毒株无反应。单抗2G8可识别HN蛋白的线性表位，经原核表达不同HN截短体蛋白，表明其识别的抗原表位为131DYIGGIGKE139亥表位在NDV^高度保守。所获得的全部单抗均不影响细胞膜融合活性和HN®白的NA舌性。综上所述，本研究对JS/17分离株进
6、行了毒力鉴定、全基因组测序及遗传进化分析,表明此毒株为基因即d型强毒株，符合当前主要流行毒株的特征。获得了抗JS/17毒株的单克隆抗体15株，其中2株抗HW问表位的单抗1D4和4D9具有中和活性和HI活性，并鉴定出单抗2G8识别一个高度保守的HN蛋白线性抗原表位。以上结果为进一步研究NDV勺流行及抗原特性提供了基础资料。
