【同济医科大学】优质课《医学微生物学》第29章-致病衣原体的微生物学检查

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【同济医科大学】优质课全国特级教师江新欢博士教授《医学微生物学》第29章衣原体

1重点与难点重点：生物学性状原体、始体、包涵体的概念、原体与始体的比较主要病原性衣原体(1)沙眼衣原体分型及其所致疾病(2)肺炎嗜衣原体与鹦鹉热嗜衣原体所致疾病难点：人类致病衣原体的致病性与致病机制致病衣原体的微生物学检查

2定义：衣原体一类严格真核细胞内寄生，具有独特发育周期，并能通过细菌滤器的原核细胞型微生物，归属于细菌学范畴。第一节概述

3共同特性：有细胞壁，革兰阴性，呈圆形或椭圆形，具有独特的发育周期，类似细菌的二分裂方式繁殖。有DNA和RNA，含核糖体；具有严格的细胞内寄生性，对多种抗生素敏感。

4衣原体科衣原体属(3个种)沙眼衣原体鼠衣原体猪衣原体嗜衣原体属(6个种)肺炎嗜衣原体鹦鹉热嗜衣原体兽类嗜衣原体流产嗜衣原体猫嗜性衣原体豚鼠嗜性衣原体分类：

5四种衣原体的性状比较性　状沙眼衣原体肺炎嗜衣原体鹦鹉热嗜衣原体兽类嗜衣原体自然宿主人、小鼠人鸟类、低等哺乳动物牛、羊原体形态圆形、椭圆形梨形圆形、椭圆形圆形基因组(bp)1,044,4591,230,2301,169,3741,106,197G+C(%)41～44.24041.339.3DNA同源性（同种不同菌株间）＞90%＞90%14%～95%88%～100%血清型19183质粒+－（N16株除外）++噬菌体－+++Pmp基因92110？注：Pmp：Polymorphicmembraneproteins（多形态膜蛋白）

6（一）发育周期与形态染色一、生物学性状原体（Elementarybody,EB）：呈球形、椭圆形或梨形，直径0.2～0.4µm，是发育成熟的衣原体。具有强感染性，在宿主细胞外较稳定，无繁殖能力。Giemsa染色呈紫色，Macchiavello染色呈红色。

7网状体（Reticulatebody，RB)，亦称始体（initialbody）：圆形或椭圆形，直径0.5～1.0µm，无细胞壁，代谢活跃。网状体是衣原体发育周期中的繁殖型，不具感染性，Macchivello染色呈蓝色。

8性状原体始体大小（µm）0.2～0.40.5～1.0细胞壁＋-代谢活性-＋胞外稳定性＋-感染性＋-繁殖能力-＋RNA:DNA1:13:1细胞毒性＋-原体和始体的比较

9衣原体的发育周期

10（二）培养特性鸡胚接种：6～8日龄鸡胚卵黄囊中繁殖，感染后3～6天致鸡胚死亡，并可在卵黄囊膜中找到包涵体、原体和始体颗粒。组织细胞培养：可在HeLa、McCoy或HL等细胞中生长良好，可将接种有标本的细胞离心以促使衣原体穿入细胞。

11属特异性抗原：位于细胞壁的共同抗原，为脂多糖，类似于G-菌的脂蛋白-脂多糖复合物，可用补体结合试验检测。（三）抗原结构

12种特异性抗原：大多数衣原体种特异性抗原位于主要外膜蛋白（majoroutermembraneprotein,MOMP）上，可用补体结合试验和中和试验鉴别不同种衣原体。型特异性抗原：根据MOMP可变区氨基酸序列的不同，可将每种衣原体分为不同的血清型或生物型（biovar）。

13衣原体耐冷不耐热，60℃仅能存活5～10min；在-60℃感染性可保持5年，液氮内可保存10年以上，冷冻干燥保存30年以上仍可复苏。对常用消毒剂敏感，紫外线照射可迅速灭活。四环素、氯霉素、强力霉素和红霉素等抗生素有抑制衣原体繁殖的作用。（四）抵抗力

14能产生类似G-菌内毒素的毒性物质，能抑制宿主细胞代谢，直接破坏宿主细胞。MOMP能阻止吞噬体与溶酶体融合，表位易变异，在体内可逃避特异性抗体的中和作用而继续感染细胞。热休克蛋白（HSP）能刺激机体巨噬细胞产生TNF-α、IL-1、IL-6等炎症性细胞因子。二、致病性与免疫性（一）致病性

15产生特异性细胞免疫和体液免疫，以细胞免疫为主。但免疫力不强，且为时短暂，因而易造成反复感染、持续性感染或隐性感染。（二）免疫性

16第二节主要病原性衣原体

17沙眼衣原体的发现1956年，汤飞凡等首次分离培养出沙眼衣原体，结束了半个多世纪关于沙眼病原的争论。他是世界上发现重要病原体的第一个中国人。生物分型沙眼生物型（Biovartrachoma）性病淋巴肉芽肿生物型（biovarlymphogramulomavenereum,LGV）一、沙眼衣原体

18(一)生物学性状形态染色原体为圆形或椭圆形，Giemsa染色呈紫红色。原体能合成糖原，故被碘溶液染成棕褐色。网状体核质分散，Giemsa染色为深蓝或暗紫色。

19血清学分型根据MOMP表位氨基酸序列的差异，将沙眼衣原体分为19个血清型。沙眼生物型：4个血清型（A、B、Ba和C）生殖生物型：11个血清型（D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、Ja和K）LGV生物型：4个血清型（L1、L2、L2a和L3）。

20(二)致病性与免疫性所致疾病（1）沙眼通过眼-手-眼途径直接或间接接触传播。由A、B、Ba和C血清型引起。早期流泪，后期结膜瘢痕、睑内翻、倒睫及角膜血管翳引起角膜损害，影响视力或致盲。

21（2）包涵体结膜炎由B、Ba、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、Ja及K血清型引起。婴儿结膜炎：引起急性化脓性结膜炎（包涵体脓漏眼），不侵犯角膜，能自愈；成人结膜炎：可经两性接触、经手至眼或污染的游泳池水感染，引起滤泡性结膜炎，又称游泳池结膜炎，一般经数周或数月痊愈，无后遗症。

22（3）泌尿生殖道感染沙眼生物型D～K血清型引起，男性多表现为非淋菌性尿道炎，并可合并附睾炎、前列腺炎、直肠炎等；女性表现为尿道炎、宫颈炎、输卵管炎与盆腔炎等。（4）婴幼儿肺炎生殖生物型D～K血清型均可引起婴幼儿肺炎。

23侵犯男性腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿，常形成瘘管；亦可侵犯女性会阴、肛门、直肠，引起会阴-肛门-直肠组织狭窄。（5）性病淋巴肉芽肿

24免疫性以细胞免疫为主。沙眼衣原体型别多，且MOMP易发生变异，病后建立的免疫力不持久。

25直接涂片镜检取结膜或宫颈刮片，Giemsa或碘液及荧光抗体染色镜检，观察上皮细胞浆内有无包涵体。沙眼衣原体感染宫颈刮片图片（荧光染色）沙眼衣原体包涵体的镜下形态（碘染色）(三)微生物学检查法

26分离培养取感染组织的渗出液或刮取物，接种于鸡胚卵黄囊或传代细胞，再用IFA或ELISA检测培养物中的沙眼衣原体。衣原体抗原与核酸组分检测ELISA：检测沙眼衣原体LPS和MOMP的PCR和LCR（连接酶链反应）等扩增技术检测沙眼衣原体DNA。

27预防重点是注意个人卫生，避免直接或间接的接触传染。治疗药物选用强力霉素、罗红霉素、阿奇霉素、加替沙星等。目前尚无有效的沙眼衣原体疫苗，MOMP是其主要候选抗原。由于MOMP的多型性，其疫苗不易对所有型别沙眼衣原体都产生保护性，故增加了MOMP作为疫苗的难度。(四)防治原则

28二、肺炎嗜衣原体肺炎嗜衣原体是衣原体属的一个新种。命名：最初分离的两株病原体1965年自一名台湾小学生眼结膜中分离得到的一株TW-183（Taiwan-183）。1983年自美国西雅图一位急性呼吸道感染病人的咽部分离出另一株AR-39（acuterespiratory-39)，后发现这两株衣原体为同一菌株，乃命名为TWAR。

29(一)生物学性状形态染色原体直径为0.38µm，电镜下呈典型的梨形，并有清晰的周浆间隙，Giemsa染色呈紫红色，该方法对细胞内包涵体的定位比碘染法敏感。

30细胞培养McCoy和HeLa细胞，但都很难用于连续传代。目前常用HEp-2和HL细胞系，其在培养肺炎嗜衣原体的敏感性方面要高于前两者。

31所致疾病引起肺炎、支气管炎、咽炎和鼻窦炎等。起病缓慢，临床症状与肺炎支原体相似，表现为咽痛、咳嗽、咳痰、发热等，一般症状较轻。肺炎嗜衣原体与冠心病、动脉粥样硬化等慢性病的发生密切相关，但其具体机制尚待深入研究。(二)致病性与免疫性

32免疫性机体感染肺炎嗜衣原体后以细胞免疫为主，体液免疫为辅，但免疫力不持久，可重复感染。

33病原学检查先直接涂片，观察包涵体；以荧光或酶标记的种特异性单克隆抗体检测标本中肺炎嗜衣原体抗原。(三)微生物学检查法

34血清学方法微量免疫荧光试验（microimmuno-fluorescencetest,MIF）是目前检测肺炎嗜衣原体感染最常用且较敏感的血清学方法，被称为“金标准”。凡双份血清抗体滴度增高4倍或以上，或单份血清IgM抗体滴度≥1:16，或IgG抗体滴度≥1:512，可确定为急性感染，IgG≥1:16表示为既往感染。

35PCR检测特异性核酸根据肺炎嗜衣原体的16SrRNA基因或MOMP基因保守序列计特异性引物，采用PCR技术检测特异性核酸片段，可用于临床标本的快速诊断。

36生物学性状原体呈球形或卵圆形。网状体呈球形或不规则形态。原体在细胞空泡中增殖，形成结构疏松、不含糖原、碘染色呈阴性的包涵体。至少可以分为6个血清型致病性经呼吸道、破损皮肤、粘膜或结膜感染临床表现多为非典型性肺炎三、鹦鹉热嗜衣原体

37微生物检查取患者血、痰标本或咽拭子直接涂片染色观察包涵体。IFA或ELISA检测特异IgM抗体作为早期、特异诊断。PCR：可根据16SrRNA或MOMP基因设计特异引物，进行快速诊断。

38防治原则严格控制传染源，对饲养的鸟类与禽类加强管理，避免鹦鹉热嗜衣原体的传播和流行。从事禽类加工和运输的人员应注意加强防护，对进口的鸟类和禽类应加强检疫。鹦鹉热确诊后，宜及早使用四环素类、大环内脂类或喹诺酮类抗生素彻底治疗。

39复习思考题衣原体与细菌和病毒有何异同点？简述人类致病性衣原体的种类及其所致疾病？试比较原体和始体的性状？名词解释：衣原体（chlamydiae）、原体（elementarybody，EB）、网状体（reticulatebody，RB）

40中英文关键词衣原体（Chlamydiae）沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis）肺炎嗜衣原体（Chlamydophilapneumoniae）鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydophilapsittaci）原体（Elementarybody,EB)网状体（Reticulatebody,RB）始体（Initialbody）发育周期（Developmentcycle）

41课外阅读资料[1]吴移谋．衣原体．北京：人民卫生出版社，2012年．[2]吴移谋．人类衣原体螺旋体立克次体．北京：人民卫生出版社，2009年．[3]HammerschlagMR,KohlhoffSA.Treatmentofchlamydialinfections.ExpertOpinPharmacother,2012,13(4):545-552.[4]ClarkeIN.EvolutionofChlamydiatrachomatis.AnnNYAcadSci,2011,1230:E11-18.[5]DeschuyffeleerTP, TyberghienLF, DickxVL,etal.RiskAssessmentandManagementofChlamydiapsittaciinPoultryProcessingPlants.AnnOccupHyg,2012,56(3):340-349.[6]MagninoS, Haag-WackernagelD, GeigenfeindI, ChlamydialinfectionsinferalpigeonsinEurope:Reviewofdataandfocusonpublichealthimplications.VeterinaryMicrobiology,2009,135(1-2):54-67.[7]LuqueA,TuruMM,RoviraN,etal.EarlyatheroscleroticplaquesshowevidenceofinfectionbyChlamydiapneumoniae.FrontBiosci(EliteEd).2012,4:2423-32.