植物甾醇酯高效液相色谱研究

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1、植物甾醇酯高效液相色谱研究　　【摘要】本文研究了植物甾醇酯、植物甾醇和脂肪酸酯的定性、定量分析方法。采用正相高效液相色谱法，紫外检测器，结果表明：三种物质10min内出峰，分离效果好，此方法快速、准确、简便。【关键词】植物甾醇植物甾醇酯高效液相色谱【中图分类号】G642【文献标识码】A【文章编号】1674-4810（2013）34-0048-02游离植物甾醇在油脂中溶解性较差，在体内很难被吸收利用，造成使用上的困难。与植物甾醇相比，植物甾醇酯具有更优的亲脂性和更佳的降胆固醇效果，是一种新型功能性食品添加剂。目前，国内外的少数厂家已能使用植物甾醇等原料合成

2、植物甾醇酯，对于合成过程中跟踪检测的分析方法却未见报道。一仪器与试药Agilent1100型液相色谱仪，Agilent1100型紫外检测器；电子天平；梅特勒托利多。植物甾醇酯对照品购于cognis生物制品有限公司，经HPLC测定纯度为95.31%，所用试剂均为色谱纯。二实验方法1.对照品溶液的制备4称取Cognis甾醇酯（95%）对照品50mg溶于50mL流动相，配制成质量浓度为1mg/mL的对照品溶液，摇匀，经0.45?m微孔滤膜过滤，即得对照品储备液，备用。2.样品溶液的制备向装有温度计的250mL四口烧瓶中加入一定量的植物甾醇和脂肪酸甲酯，油浴加热

3、，机械搅拌，温度达到90℃后继续反应1h，再加入一定量的甲醇钠，而后恒温反应4h，最后将热的反应液转入漏斗中，经水洗、乙醇洗涤，脱溶剂后得到样品。称取合成样品50mg溶于50mL流动相，配制成质量浓度为1mg/mL的样品溶液，摇匀，经0.45?m微孔滤膜过滤，即得样品储备液，备用。3.色谱条件色谱柱：硅胶正相柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：正己烷∶异丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%；流速：1mL/min；检测波长：210nm；进样量：20μL。4.线性关系考察吸取对照品储备液1、2、4、6、8mL，分别置于10mL容量瓶中，使用流动相定容，摇

4、匀，得到5个不同浓度的对照品溶液。分别吸取20?L，按上述色谱条件进样分析。以浓度X（?g/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并计算回归方程。回归方4程为：Y=187269X+29637，r=0.9987。结果表明：甾醇酯在0.1～0.8mg/mL的浓度范围内与峰面积有良好的线性关系。5.精密度试验吸取上述标准对照品溶液中的0.6mg/mL20?L，按上述色谱条件，重复进样5次，测得甾醇酯峰面积的RSD为1.29%。6.稳定性试验取0.4mg/mL对照品溶液，分别于0、2、6、12、24h，吸取20?L进样，测得甾醇酯峰面积的RSD为1.76

5、%。结果表明，供试品溶液在24h内稳定性较好。7.重现性试验取同一批原料5份，按供试品溶液制备方法分别制备5份，测定，计算甾醇酯的百分含量的RSD为1.94%。8.回收率试验称取已知甾醇酯含量样品5份，各取5mg分别加入甾醇酯对照品适量，按供试品溶液的制备方法进行处理，按上述色谱条件测定，结果甾醇酯的平均回收率为98.72%，RSD为1.87%。9.样品测定吸取经微孔滤膜（0.45?m）滤过后的样品溶液20?L，在上述色谱条件下进样分析。三讨论4经实验最后确定流动相为：正己烷∶异丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%。加入少量异丙醇能使甾醇快速出峰，峰型较理想，

6、加入量过多也会使甾醇与其他峰无法分开。正己烷∶异丙醇=98∶2时峰型较理想；加入甲醇能使甾醇酯与甲酯很好分离。实验还考查了反相液相色谱法对样品测定，发现甾醇组份能分别出峰，但甾醇酯不能得到理想峰型。四结论本实验对高效液相色谱法进行了系统性分析，考查了不同色谱柱和流动相，最后确定了分析三种物质较理想的分析条件：紫外检测器；硅胶正相柱HypersilCN（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：正己烷∶异丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%；流速：1mL/min；检测波长：210nm；进样量：20μL。本方法简便、易行，而且稳定、重现性好。参考文献[1]盛漪、华

7、伟、谷文英.植物甾醇降胆固醇生理功能及其研究进展[J].粮食与油脂，2002（12）：25～26[2]唐传核、彭志英.一种新型功能性食品——植物甾醇酯[J].中国油脂，200l（3）：60～63〔责任编辑：范可〕4