浅谈人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素ⅱ浅谈人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素ⅱ诱导心肌.

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1、浅谈人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素II浅谈人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素II诱导心肌细胞肥大的影响分析湖南省宜章县屮医院湖南宜章424200摘要：目的：对人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素n诱导心肌细胞肥人的影响进行分析。方法：对2口龄的Wistar大鼠的乳鼠心肌细胞进行原代培养，且利用AngII进行诱导后建立相应的心机细胞肥人模型，将其随机分为三组，PDS低剂量组，PDS高剂量组、肥人模型组，另外设立一个正常的对照组，通过LeicaQWin病理图像分析系统对心肌细胞的表面积进行测定，采用BCA法对心肌细胞屮蛋白质的总含量进行测定，采用荧光分光光度计对细胞屮

2、游离钙离子的浓度进行测定。结果：PDS可以使肥人心肌细胞的表面积显著减少，使心肌细胞屮总蛋白质的含量、钙离子的浓度降低。结论：PDS对Angll诱导心肌细胞肥大有相应的抑制作用，其有可能与隔绝钙调神经磷酸酶的信号传导通路相关。关键词：人参二醇组皂苻；血管紧张素II;心肌细胞肥大人参二醇组皂苷(PDS)主要是从五加科植物屮的人参茎叶提取纯化而得，其包括人参Rbl，Rd,Rb2,Rc等一些皂苷单体。PDS具有抗心机梗死、抗休克、降低血糖、使血脂代谢紊乱得以改善的作用，在本研究屮显示，PDS可以使缩血管物质的含量降低，增强抗氧化的能力，说明PSD在大鼠心梗之后

3、还可以对心室重构起到相应的保护作用。本文主要就人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素II诱导心肌细胞肥大的影响进行分析，现作报道如卜：1.资料与方法1.1动物选用实验动物屮心的2口龄Wistar人鼠乳鼠，其主要是用来培养体外的心肌细胞。1.2乳鼠心肌细胞分组、原代培养、处理对乳鼠的心肌细胞进行原代培养时，应选取2口龄Wistar人鼠乳鼠的心脏，采用PBS对其腔室中的血液进行冲洗，并将结缔组织、心房剪掉，并把心室全部剪碎，剪为lmm3左右的组织块，采用0.125%的胰酶在温度为37°C的水中进行多次消化，II每次约保持5min。以10%的小牛血清来终止消化，并对其

4、进行5min的离心，待细胞沉淀之后利用DMEM进行培养，重悬之后接种在培养瓶中，在CO₂孵箱中进行90min的培养，并利用差速贴壁将非心肌细胞全部去除。对细胞的浓度进行调整，将0.1mmol/L5'溴脱氧尿苷加入其中，并接种到相应的培养板上，在CO₂孵箱中进行培养，培养48h之后对培养液进行更换，72h后将其倒置在显微镜下进行观察。另外，在心机细胞中加入浓度相同的PDS、体积相等的心肌细胞培养液，II加入剂量为10-7mol/L的Angll让其作用48h。分组和处理：肥大模型组：10-7mol/L的AngII,对照组：等体积的培养

5、液，PDS高剂量组:10-7mol/L的AngII和800μg/mlPDS,PDS低剂量组:PDS400μg/ml、10-7mol/L的Angll。1.3测定心肌细胞的表面积将lml的l×105个/ml心肌细胞悬液接种在24孔的培养板中，且通过上述的分组处理之后，利用胰酶对心肌细胞进行消化并使其脱壁，且反复进行轻柔、将细胞吹散，然后静置、照相。通过LeicaQWin病理图像分析系统对心肌细胞的表面积进行详细的测定，每一个组中检测五个视野，取平均值来进行对比分析。1.4测定心肌细胞中的总蛋白含量将2.5ml的3×105个

6、/ml心肌细胞悬液接种在6孔的培养板中，通过上述的分组处理之后，将上层的培养液弃除，对PBS进行预冷、冲洗、轻柔，再把Western及IP细胞裂解液依次加到每个孔中，采用移液器对Jt•进行吹打，让裂解液充分接触到细胞，进行裂解之后，进行5min的离心，并将上清收集好，即为细胞中的总蛋白。然后通过标准曲线将各组细胞中的蛋白浓度求出来，并将单个细胞的总蛋白量计算出来。1.5测定心肌细胞中细胞游离钙离子的浓度在6孔的培养板中接种2.5ml的3×105个/ml心肌细胞悬液，同样经过上述的分组处理之后，利用胰酶使心肌细胞得到消化，并让其脱壁，细胞的浓度

7、必须超过106个/ml,且取lml放到EP管内。在每一个实验组的管内加入Fura-2/AM的储备液5μl，待其最终的浓度为5μmol/L吋，进行摇床、震动(37°C，60rain),让Fura-2/AM充分和细胞进行反应。进行1200r/rain的离心5min,在利用D-Hank平衡盐溶液对细胞进行清洗两次，让细胞悬浮，然后加入玻璃比色杯内，再通过荧光分光光度计对其进行详细的测定。首先对340nm、380nm激发光中产生的荧光强度进行测定，将0.1%的TntonX-100加入艽中，再对其产生的荧光强度进行详细的测定，之后加入5mmol/L的E

8、GTA，同样再次进行测定；根据相关公式即可计算出相应的结果［1】。1.6统计学方