临床微生物实用手册

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1、临床微生物实用手册（内部资料）试剂配制1、革兰氏染液①甲液：结晶紫：1.25g95％酒精：50mlDH2O：450ml②乙液：Na2CO3：6.25gDH2O：500ml③碱性碘液：I2：6.0gKI：12.0gNaOH（1mol/L）：270ml待KI完全溶于DH2O，后，再加I2④丙酮酒精液：95％酒精：70ml丙酮：30ml⑤碱性复红水溶液：碱性复红：8g95%酒精：100LDH2O：900m2、抗酸染液（萋－尼）1．石炭酸复红染液：（1）储存液①碱性复红液：碱性复红8g，加95%乙醇至100ml，充分振荡使复红溶解。②5%石炭酸水溶液：40～

2、50℃水浴加热石炭酸使之融解，取液态石炭酸5g溶于90ml热蒸馏水中，待溶液冷却至室温时，补充蒸馏水至100ml。（2）石炭酸复红工作液：经定性滤纸过滤的碱性复红储存液10ml与5%石炭酸水溶液90ml充分振荡、混合均匀后，用定性滤纸过滤。2．5%盐酸乙醇脱色液：35%浓盐酸5ml与95%乙醇95ml混合。3．亚甲蓝复染液：（1）储存液：亚甲蓝0.3g溶于95%乙醇50ml中，完全溶解后加蒸馏水至终体积100ml。（2）亚甲蓝复染液：以蒸馏水5倍稀释0.3%亚甲蓝储存液，经充分振荡、混合均匀后，亚甲蓝的终浓度为0.06%，使用定性滤纸过滤，即得亚甲蓝

3、染液。3、甲基红试剂①甲基红：0.2g②95％酒精：300ml③DH2O：200ml配制：将甲基红称入乳钵内，加1mol/LNaOH10ml左右（提高甲基红溶解度），碾磨，加入酒精300mlDH2O180ml，混匀后，再加入1mol/LHCL10ml左右，中和其中的NaOH，最后试剂弱带酸性4、靛基质试剂①对二甲氨基苯甲醛:5.0g②纯戊醇或正丁醇:75ml③浓盐酸:25ml配制：浓盐酸要待对二甲氨基苯甲醛溶解于纯戊醇后，再一滴滴徐徐加入5、伏－波（VP）试剂甲液：a萘酚：6.0g无水乙醇：100ml乙液：KOH：40g肌酸：0..3gDH2O:10

4、0ml注：甲液应储存于棕色瓶中5、100g/L去氧胆酸钠溶液①去氧胆酸钠：5g②0.1mol/LNaOH：5ml③溶解后加DH2O45ml于冰箱可保存半月有效。6、氧化酶，细胞色素氧化酶①10g/L盐酸二甲基对苯二胺（或）四甲基对苯二胺）水溶液②10g/La－萘酚乙醇液7、硝酸盐还原试剂①甲液：对氨基苯磺酸：0.8g5mol/L醋酸：100ml②乙液：a－萘胺：0.5g5mol/L醋酸：100ml8、6g/L酚红指示剂酚红：3g1mol/LNaOH：10ml1mol/LHCL：10mlDH2O：480ml配制：将酚红放入乳钵内加NaOH研磨，加DH2

5、O280ml，无水乙醇200ml混匀后，加入HCL混匀。配好后液体应为透明橙红色。染色1、革兰氏染色法试剂：①结晶紫②碳酸钠溶液③碱性碘液④丙酮酸酒精⑤碱性复红水溶液方法：1.将标本均匀涂布于洁净玻片上，自然干燥，火焰微热固定2.滴加结晶紫（革兰甲液）和碳酸钠液（革兰乙液）各2滴，初染30秒钟，水洗。3.用碱性碘液2滴固定30秒钟，水洗4.用丙酮酸酒精脱色至无兰色脱落为止（约5－10秒），水洗。5.用碱性复红水溶液复染5秒钟，水洗待干镜检。结果：革兰氏染色阴性细菌在视野下呈淡红色。革兰氏阳性细菌呈深紫色注意事项：1.涂片应均匀，厚薄适宜，应自然干燥后

6、再加微热固定。以热而不烫手为易，过热易使细菌变形。2.脱色要至无兰色脱落为止。3.复染时间不可过长，以免细菌均染成G—菌。4.枯草杆菌，链球菌有时染成紫红色，是因为细菌繁殖代谢中有紫色嗜变性，不一定全是染色原因，所以要根据其菌体形态加以确定。2、抗酸杆菌染色试剂：①石碳酸复红溶液②盐酸酒精溶液③碱性美兰溶液方法：1.加满石碳酸复红溶液在已固定德标本玻片上，加温2－3分钟，使染液即有蒸汽上升又不致沸腾，不时添加染液，以免在受热情况下干凅。2.倾出染液，以DH2O冲洗后用盐酸酒精溶液脱色，直至玻片无红色为止。3.DH2O冲洗，用碱性美兰复染1分钟。4.D

7、H2O冲洗，待干镜检。结果：抗酸杆菌被染成红色，背景为兰色。结核、麻风杆菌为抗酸阳性（奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性）3、庞氏染色法试剂：庞氏染液方法：涂片经自然干燥后经火焰固定，滴加庞氏染液2滴，静染3－5分钟后，水洗，待干镜检。结果：双级体杆菌菌体呈淡兰色两端级体呈深紫兰色报告：查见双级体杆菌或未查见白喉杆菌4、墨汁染色查新型隐球菌试剂：优质印度墨汁方法：取一滴优质印度墨汁或国产优质墨汁于洁净载玻片上，加入待检标本（液体标本需离心后取沉淀）一滴，与之混合，加盖玻片于底倍镜下，将出光调暗，观察菌体及其周围荚膜。阴性结果：在高倍镜下可见黑色背景中透明宽厚

8、的荚膜，似晕轮，有较厚的细胞膜，有时可见生芽的。内有脂质颗粒析出。注意：要与白细胞区别。白细胞无芽出现象、无