矿土毒素吸附剂吸附黄曲霉毒素的能力分析

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1、矿土毒素吸附剂吸附黄曲霉毒素的能力分析　　黄曲霉毒素（AF）,是由黄曲霉和寄生曲霉等多种真菌产生的次级代谢产物。这2种霉菌仅需一点碳源和氮源就能生长、繁殖及产毒，低温潮湿情况下极易在玉米、花生、棉籽及饼粕等饲料原料中生长产生AF（刘媛婷，2011;张自强等，2009）.AF为特剧毒性物质，常见的有AFB1、AFB2、AFG1及AFG2等，其中AFB1的毒性最强（李淑花等，2009）,为砒霜的68倍之多，是公认的毒性较强的一类生物毒素，试验用的AF标品均为AFB1.全世界每年有大量的粮食和谷物被黄曲霉

2、污染（韩秀山等，2008）,饲喂AF污染的谷物或饲料，会引起动物中毒，造成肝、肾、脾、口腔、胃肠道、大脑和神经系统损伤，导致日增质量下降、饲料转化率降低、对疾病的易感性增高及病死率增加等（李娟娟，2009）.国家标准规定饲料中AFB1的含量不得超过50μg/L,原料污染或饲料运输和保存过程中方法的不当极易使AF含量超标，所以AF的去毒工作日益得到关注。目前主要的脱毒方式有物理脱毒、化学脱毒、酶解和吸附剂法（张建梅等，2009）;其中吸附剂法是目前饲料工业中最为普遍的一种霉菌毒素脱毒方式，具有性

3、质稳定、不易变质、价格较低且可以大规模操作的优点（刘国栋，2013）.影响吸附剂吸附能力的条件主要有pH、温度和体系毒素质量浓度等，试验以2种比较常见的矿土毒素吸附剂为材料，研究在不同pH（模拟胃液和肠液的pH,分别为3和7）、不同吸附剂添加量、毒素质量浓度和营养物质添加与否这3种条件下，吸附剂吸附AF能力的大小，为毒素吸附剂在饲料中的应用提供数据支撑。　　1材料与方法　　1.1试验材料与仪器　　1.1.1试验材料　　蒙脱石，浙江产的一种硅铝酸盐型矿土，吸附型产品；凹凸棒土，江苏淮安产的一种含水富镁

4、硅酸盐粘土矿土，吸附型产品；AF标品（AFB1,北京华安麦特）;一级蒸馏水；色谱级甲醇。　　1.1.2仪器　　高效液相色谱仪（安捷伦1206）,离心机，水浴恒温振荡器，超声波清洗机。　　1.2试验方法　　1.2.1pH对2种矿土吸附AF的影响　　配制所需的标准溶液：配制10mg/LAFB1的标准溶液，pH=3的KH2（PO4）缓冲液，pH=7的K2H（PO4）缓冲液。配制吸附剂悬浮液：称取待评估的吸附剂样品0.02000g于50mL的离心管中，分别加入不同量的缓冲液和AFB1标准溶液，分别制得pH=

5、3和pH=7质量浓度为100μg/L和4mg/L的AFB1混合溶液。　　孵育：将对照组、pH=3质量浓度为100μg/L和4mg/L及pH=7质量浓度为100μg/L和4mg/L的AFB1混合溶液充分混匀后放入37℃恒温振荡器，120r/min孵育60min.　　吸附率测定：摇匀离心管内的吸附液，吸取1mL溶液至1.5mL的离心管中，5000r/min离心10min.吸取0.5mL上清液于新的离心管中，再加入0.5mL的甲醇，盖上盖子，混匀液体，用有机滤膜过滤至进样瓶中，上机检测。

6、色谱条件为C18色谱柱，2504.65!m;流动相为甲醇∶水（80∶20）;柱温25℃；流速0.6mL/min;波长365nm;Vu;L.所有样品均做2个重复。　　吸附率计算方法：吸附率/%=1-C0/C1.C0为吸附后上清液AFHPLC测试峰面积；C1为对照组AF标准溶液HPLC测试峰面积。　　1.2.2吸附剂添加量和毒素质量浓度对吸附剂吸附AF的影响　　配制所需的标准溶液：配制10mg/LAFB1的标准溶液。配制吸附剂悬浮液：分别称取待评估的吸附剂样品0.02000、0.05000和0.1000

7、0g于50mL的离心管中，分别加入一定量的蒸馏水和AFB1毒素标准溶液制得0.02000、0.05000和0.10000g这3种添加量的100μg/L,4、8和10mg/L的毒素混合溶液。孵育及检测方法同1.2.1.　　1.2.3营养物质的添加对2种吸附剂吸附AF的影响　　配制所需的标准溶液：配制10mg/LAFB1的标准溶液，260mg/L维生素B1的标准溶液，60mg/L维生素B2的标准溶液。配制吸附剂悬浮液：称取待评估的吸附剂样品0.02000g左右于50mL的离心管中，试验组添加0.1

8、35g的赖氨酸，再分别加入不同量的AFB1标准溶液及蒸馏水、维生素B1和维生素B2溶液，维生素B1、维生素B2、赖氨酸及AFB1的最终含量：10mg/L、20mg/L、1.35%和100μg/L,对照组以蒸馏水作对照。加入营养物质的试验组和对照组按照1.2.1孵育及检测的方法进行。　　　　1.3数据处理　　用Excel2010进行数据处理与分析。　　2结果与分析　　2.1不同pH条件下2种矿土对AF的吸附　　从表1可见：在反应体系为50μg/L毒素质量浓度