icam1在实验性自身免疫性脑脊髓炎发病机制中的作用

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1、ICAM1在实验性自身免疫性脑脊髓炎发病机制中的作用：赵亚朴王红刘慧敏王秀卿黄庆军【摘要】目的检测实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠血脑屏障中血管内皮细胞细胞间粘附分子1(ICAM1)的表达，并分析其表达与EAE发病的关系。方法取EAE组和对照组大鼠的脑组织，石蜡切片，免疫组化染色，图像扫描系统观测，图像分析软件进行灰度分析。结果EAE组大鼠脑血管内皮细胞上ICAM1的表达明显深于对照组。实验组的灰度值为141.47±6.88，而对照组为166.24±7.24，两组差异非常显著(P<0.01)。结论大鼠EAE时脑血管内皮细胞ICAM

2、1的表达上调，提示ICAM1是与EAE发生相关的重要粘附分子。【关键词】免疫组织化学法；ICAM1；血脑屏障；实验性自身免疫性脑脊髓炎【Abstract】ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetentalautoimmuneencephalomyelitis(EAE).MethodsBrainofEAEasalsbeddedinparaffin.Andthesectionsmunohistochemicalmethod.Thenthesectionsagescanningsystemandmeasuredth

3、egrayvaluebyIPPimageanalysissoftofEAErat'sbrainofEAErat'sbrainindicatedthatICAM1oleculeinthedevelopmentalprocessofEAE.【Keymunohistochemicalmethod；Intercellularadhesionmolecular1；Bloodbrainbarrier；Experimentalautoimmuneencephalomyelitis多发性硬化症(multiplesclerosis，MS)可能是一种与遗传、病毒感染

4、、地理环境等诸多因素有关的自身免疫性疾病［1］。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)与MS在临床、生化、免疫及病理等诸多方面具有相同的特征，因此成为深入研究MS的理想动物模型。在免疫学的研究中，粘附分子在EAE发病中的作用越来越受到关注。那么，血管内皮细胞细胞间粘附分子1(intercellularadhesionmolecular1，ICAM1)在血脑屏障中的表达是否与EAE的发生有关？本研究采用免疫组化法检测了ICAM1在血脑屏障中的表达，以探讨其与EAE发病的关

5、系。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物及分组雌性BP)+完全弗氏佐剂(Freund’sadjuvantplete，CFA)+百日咳杆菌；对照组注射生理盐水+CFA+百日咳杆菌，每组各25只。1.1.2试剂ICAM1羊抗鼠IgG多抗(SantaCruz)、SP通用型试剂盒(ZYMED)。1.2方法1.2.1制备动物模型MBP提取方法与动物模型制备方法沿用我们以往建立的方法［2］。EAE的严重程度依据Kono等［3］的标准评定。1.2.2免疫组化法检测血脑屏障ICAM1的表达取发病高峰期的EAE大鼠和对照组大鼠各7只，剥取大鼠的小脑，福尔马林固定

6、，石蜡包埋，连续切片，每隔5张取2张，每份标本选出6张切片。使用ZYMED公司SP试剂盒，采用三步法进行免疫组化染色。用Nikon图像扫描系统进行观测。采用美国IPP图像分析软件进行灰度分析。每只大鼠取12张片子，沿矩形路线观测。1.2.3统计学方法数据资料用SPSS11.0统计软件包进行处理，采用两组间均数比较的独立样本t检验(双侧)进行统计学分析。2结果2.1发病情况与体重变化实验组25只大鼠全部发病，起病时间为(10.74±1.19)d，评分在1分以上者达100%，评分在4分以上者达45%，病死率12%。依照Kono等的评分标准，平均得分为(3.

7、54±0.75)分。从注射抗原后0天到第15天，平均体重减轻(28.6±16.6)g；而对照组25只大鼠无一发病，体重随鼠龄的增大而持续增长，至注射后第15天，平均体重增长(14.2±5.1)g。2.2脑、脊髓组织的病理改变取发病高峰期EAE大鼠和对照组大鼠的脑和脊髓，石蜡切片，常规HE染色，光镜下可见EAE大鼠的脑和脊髓组织中有大量炎性细胞浸润(主要是淋巴细胞和单核细胞)，炎性细胞主要聚集在血管周围，形成典型的“袖套”样改变［46］，而对照组大鼠脑和脊髓组织未见炎性细胞浸润和神经细胞的变性、坏死。2.3免疫组化法检测血脑屏障血管内皮细胞ICAM1

8、的表达镜下观察发现EAE组大鼠脑血管内皮细胞上ICAM1的染色明显深于对照组，血管内皮细胞阳