地塞米松对大鼠肺缺血再灌注损伤保护的研究

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1、地塞米松对大鼠肺缺血再灌注损伤保护的研究【摘要】目的:通过观察地塞米松对大鼠肺缺血再灌注后病理形态变化的影响，探讨其对肺缺血再灌注损伤的保护机制。方法:健康的SD大鼠40只，雌雄不拘，随机分为5组：假手术组（S）、单纯缺血组（I）、缺血再灌注组（IR）、小剂量地塞米松干预组（D1）及大剂量地塞米松干预组（D2），每组8只。根据Eppinger模型制作SD大鼠单侧肺缺血再灌注动物模型，用ethods:40healthySprague-Dalyintofivegroups:shamgroup（S）,ischemi

2、a-onlygroup（I）,ischemia-reperfusiongroup（IR）,small-doseDexamethasoneinterferedgroup（D1）,andlarge-dosedexamethasoneinterferedgroup（D2）,odelofischemiaandreperfusioninsituinsinglelungonarypathologicalchangesuchhigher(P＜0.01),ethasone，especiallyinlargedose.Thep

3、athologicalsectionshoonarystructurallesionoreseriousinGroupIR,andafterintervention,thestructurallesionallungislittle,butifthelungisischemia-reperfusioned,theiNOSproteinincreasesobviouslyethasone，especiallyinlargedose,theiNOSproteindeclinesandthelunginjuryle

4、ssens.[Keyia-reperfusion;Lung;Dexamethasone;Induciblenitricoxidesynthase;Rat近年来肺栓塞溶栓治疗、肺动脉血栓内膜剥除术、肺移植、体外循环手术等心胸外科手术得到广泛开展。随之而来的肺外组织器官缺血再灌注所致的肺组织损伤情况也增多，肺缺血－再灌注损伤的问题逐渐受到重视。Shang等[1]研究表明无论是内源性或是外源性NO对缺血再灌注肺皆有损伤作用。Zhou等[2]研究表明肺外组织缺血再灌注时可使肺内经由诱导型一氧化氮合酶（iNOS）所调控

5、的一氧化氮（NO）过度表达，从而导致炎性介质过氧化亚硝酸盐在肺内积聚引起肺损伤，以上研究提示抗炎治疗在抗肺缺血再灌注损伤方面有着良好的应用前景。地塞米松具有强大的抗炎作用,通过阻断炎症因子级联反应及抑制趋化因子从而减少中性粒细胞向组织聚集,减轻局部炎症反应；本研究选用地塞米松对大鼠肺缺血再灌注过程进行干预并探讨其保护机制，从而为临床治疗提供佐证。1　材料和方法1.1　动物分组健康SD大鼠40只，雌雄不分，体重250~350g，由南通大学医学院实验动物中心提供。随机分成5组：假手术组（S组）、单纯缺血组（I组）

6、、缺血再灌注组（IR组）、小剂量地塞米松干预组（D1组）、大剂量地塞米松干预组（D2组），每组8只。1.2实验方法根据Eppinger方法建立动物模型，假手术组仅开胸不阻断左肺门，单纯缺血组仅阻断左肺门2h，不予再灌注。缺血再灌注组、小剂量地塞米松干预组（D1组）、大剂量地塞米松干预组（D2组）均阻断左肺门1h后，给予再灌注2h。D1和D2组在再灌注前5分钟经尾静脉或阴茎背静脉分别注入地塞米松1mg/kg、5mg/kg。各实验组模型制备完成后放血处死大鼠，左肺上部用4%多聚甲醛固定作病理检查，下部放入液氮保存

7、作western-blot检测。1.3检测观察方法（1）Westernblot：　取肺组织提取液蛋白50μg，用12%SDS-PAGE凝胶电泳分离,将电泳条带转移至醋酸纤维膜上，1∶500稀释一抗iNOS（购自武汉博士德公司，产品批号：BA-0362）。二抗为辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体（购自武汉博士德公司，产品批号：BA1054）。用ECL显色曝光，将胶片曝光结果扫描到计算机，用QuantityOne软件进行条带灰度值分析。每次结果以对照组灰度值为参考，其他组条带灰度与对照组之比为其相对值；（2）HE染

8、色：固定、取材、梯度脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、复水、HE染色，观察肺组织学结构改变。1.4　统计学方法所有数据采用Stata8.0统计软件分析处理，计量资料以x±s表示，采用方差分析，两两比较用q检验。等级资料采用参照单位分析（Radit分析），P<0.05为差异有统计学意义。2结果2．1病理学改变采用Egan肺组织学评分标准进行判断。Egan肺组织学评分标准:正常,无损害;轻度:点