恶性血液病自体造血干细胞移植后dccik细胞预防复发探讨

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1、恶性血液病自体造血干细胞移植后DCCIK细胞预防复发探讨：王玲史春雷李颖袁成录【摘要】目的探讨恶性血液病自体造血干细胞移植后应用树突状细胞细胞因子诱导的杀伤细胞（DCCIK）预防复发的效果。方法12例恶性血液病病人自体造血干细胞移植后静脉输注及腹股沟注射DCCIK细胞2～3次，观察疾病的复发情况以及DCCIK细胞输注后的副作用。结果7例持续完全缓解（CR），中位CR期44（32～56）月。4例死亡，其中3例复发。结论DCCIK细胞治疗可能有助于清除微小残留病，预防疾病复发，延长病人生存期，

2、且副作用小，临床可以选用DCCIK细胞预防自体造血干细胞移植后恶性血液病的复发。【关键词】DCCIK细胞；造血干细胞移植；移植，自体；复发　　［ABSTRACT］ObjectiveToobservetheclinicalefficacyofdendriticcellsinbinationalignanthematopathyafterautohematopoieticstemcelltransplantation(AutoHSCT).MethodsAfterautoHSCT,12patien

3、tsalignanthematopathyallyfor2-3timesaission(CR)edianCRperiodonths,fourdied,inentaybehelpfulinclearingminimalresidualdisease,preventingrelapseandprolongingthepatients’lifealignanthematopathyafterautoHSCT.［KEYCSF150μg皮下注射，每天1次，连续注射1～3d，然后再进行细胞采集。　　1.2.2

4、细胞采集　　使用细胞分离单采机（SPECTRA6.0，COBE公司，美国）采集病人外周静脉血6～8L，每120～150mL血浆约采集(3～6)×109单个核细胞。　　1.2.3抗原制备方法　　根据肿瘤类型选择相同病理类型的人肿瘤细胞株制备抗原，细胞株均购自中国科学院上海生物科学院细胞资源中心。将肿瘤细胞株培养至(1～2)×108个，收集细胞，生理盐水洗涤。将细胞置于RPMI1640培养液中反复冻融，离心去残渣，上清液过滤备用。　　1.2.4DC和CIK细胞制备　　采集的细胞按照常规方法分离并洗涤单个核

5、细胞，调整细胞的密度至1×1010/L，平均加到16只细胞培养瓶（美国BD公司）中，于37℃体积分数0.05的CO2培养箱中孵育2h，使贴壁细胞和悬浮细胞分离。取出悬浮细胞置另外细胞培养瓶中备用。在含有大量贴壁细胞的培养瓶中加入含有20μg/LIL4、50μg/LGMCSF的DC无血清培养基（德国CellGenix公司），在37℃体积分数0.05的CO2培养箱中孵育，6d后加入DC培养液和相应的肿瘤抗原继续培养2d，即为成熟DC，部分回输，其余冻存。悬浮细胞的培养瓶中加入适量RPMI1640培养液

6、、灭活胎牛血清和IL2、IFNα、CD3单抗（美国RD公司）细胞因子等，在37℃体积分数0.05的CO2条件下培养。第8天细胞部分静脉回输，余细胞继续培养至15d。　　1.2.5细胞表型检测和细胞计数　　培养结束后，采用流式细胞仪检测DC标志DR和CD83，以CD3为标志来鉴定检测CIK细胞；回输前分别计数DC和CIK细胞。　　1.3治疗方法自体造血干细胞移植造血恢复后1个月开始回输DC。回输前将DC均分，1份与CIK混合制成250mL细胞悬液（内含1500U/mL的IL2，体积分数0.01的清

7、蛋白），经静脉回输；1份制成1.5mL细胞生理盐水悬液，皮下注射到肿瘤邻近的淋巴结区。上述治疗每周进行1次，共3次。疗程结束后1个月随访观察疗效。观察治疗前后血清干扰素γ（INFγ）、白介素10（IL10）和白介素12（IL12）含量变化等。　　1.4统计学方法采用SPSS10.0及PPMS1.5[1]统计软件进行统计处理。　　2结果　　2.1细胞表型检测和细胞计数DC标志DR和CD83的表达率分别为75%～84%和76%～85%，CIKCD3的表达率为88%～95%。每个疗程细胞总量：D

8、C为(188.3±79.8)×106个，CIK为(58.8±22.3)×108个。　　2.2病人免疫指标观察治疗前病人血清INFγ、IL10、IL12含量分别为（42.5±31.5）、（28.5±11.5）、（85.5±60.5）μg/L，治疗结束后1个月复查，病人上述指标分别为（65.0±45.0）、（30.1±18.1）、（89.1±71.1）μg/L，即治疗后血清中INFγ含量明显升高（t=3.679，P＜0.05），但IL10和IL1