金银花超微饮片的hplc指纹图谱研究

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1、金银花超微饮片的HPLC指纹图谱研究　　　　　　　　　　作者：蔡光先李顺祥蒋炜【关键词】金银花超微饮片　　【摘要】目的研究金银花超微饮片的HPLC指纹图谱，考察其有效成分及含量，为金银花的质控提供可靠方法。方法色谱柱为大连依利特公司HypersilBDSC18（4.6mm×200mm，5μm）柱。流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液（9.8∶90.2），柱温为25℃，流速为1.0ml/min，检测波长为246nm。结果建立了金银花超微饮片的HPLC指纹图谱，标定了12个共有峰。结论利用HPLC指纹图谱可以较全面地控制金银花超微饮片的内在质量。　　关键词金银花超

2、微饮片HPLC指纹图谱高效液相色谱法　　StudiesonHPLCfingerprintofultramicroFlosLonicerae.　　【Abstract】ObjectiveTodeterminetheHPLCfingerprintoftheultramicroFlosLoniceraeandtotestitspo-tentconstituentsandcontent.MethodsChromatographiccolumn:HypersilBDSC18（4.6mm×200mm，5μm）.Mo-bilephase:MeOH-0.05%H3PO4（9.

3、8∶90.2）.Columntemperature:25℃.Flol/min.ip）、山银花（L.confusaDC）或毛花柱忍冬（L.dasystylaRehd）的干燥花蕾或带初开的花［1］，湖南产灰毡毛忍冬（L.macranthoidesHand.-Mazz）［2］将列入新版药典。本品为传统中药，具有清热解毒、凉风散热的作用。本实验对13批不同地区的商品金银花药材制成的超微饮片进行测定，并进行方法学考察，初步建立了指纹图谱，标定了12个共有指纹峰，其中绿原酸为对照品。　　1仪器与试剂　　岛津（Shimadzu）LC-10A高效液相色谱仪（配有LC-10A

4、vp输液泵，SPD-10Avp紫外检测器，柱温箱）。绿原酸对照品（chlorogenicacid，批号0753-200111，供含量测定用中国药品生物制品检定所提供），甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其余试剂为分析纯。13批商品金银花药材购自四川、杭州、甘肃、北京、湖南等地，经湖南中医药研究院中药研究所生药室谢昭明研究员鉴定分别为忍冬（LoniceraejaponicaThunb）、灰毡毛忍冬（L.macranthoidesHand.-Mazz），分别加工成超微饮片。　　2方法与结果　　2.1供试品溶液的制备精密称取超微饮片粉末0.2g（共13种），置50ml量瓶

5、中，加50%甲醇约50ml，超声处理30min，放冷，用50%的甲醇精密加至刻度，0.45μm微孔滤膜滤过，即得。　　2.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品4mg于50ml的棕色容量瓶中，加50%的甲醇定容至刻度，摇匀，即得（10℃以下保存）。　　2.3色谱条件色谱柱为大连依利特公司HypersilBDSC18柱（4.6mm×200mm，5μm）。色谱条件:流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液（9.8∶90.2），柱温为25℃，流速为1.0ml/min，检测波长为246nm。该条件下金银花超微饮片获得好的分离，见图1。　　2.4方法学考察　　2.4.1精密

6、度实验取同一份金银花（忍冬）超微饮片的供试品连续进样5次，比较共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致。符合指纹图谱的检测要求。见表1、表2。　　表1精密度实验结果（相对保留时间）（略）　　表2精密度实验结果（相对峰面积）（略）　　2.4.2稳定性试验取同一份金银花超微饮片的供试品溶液，分别在制备后1、4、8、16、24、48h进样，比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD<2%，表明样品在48h内稳定，符合指纹图谱的检测要求。　　2.

7、4.3重现性试验取同一批金银花（忍冬）超微饮片样品5份，按供试品溶液制备方法分别制备供试品溶液，比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致。符合指纹图谱的检测要求。　　2.5指纹图谱的建立　　2.5.1共有指纹峰的标定采用相对保留时间标定共有指纹峰:以图谱中绿原酸为参照物（S），将各色谱峰保留时间与同一图谱中参照物的保留时间比较，其比值为各色谱峰的相对保留时间，见表3。　　表310批金银花（忍冬）超微饮片的相对保留时间（略）　　2.5.2共有指纹峰的相对峰面积以图谱中绿原酸为参照物（S），将各共有指纹峰

8、峰面积与同一图谱中参照物的峰面积比较，其比值为各共有