软骨脱细胞基质复合脂肪源性干细胞构建软骨组织的实验研究

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1、软骨脱细胞基质复合脂肪源性干细胞构建软骨组织的实验研究.L.编辑。作者：王兆杰，安荣泽，于立志，张强，齐新文，杨晋【摘要】[目的]探讨软骨脱细胞基质支架材料的制备,及其体外复合脂肪源性干细胞构建软骨组织的技术方法。[方法]成年新西兰大白兔脂肪源性干细胞获得，培养，扩增。成年新西兰大白兔新鲜软骨，低温冻干12h，后经曲拉通、DNA、RNA酶等处理制备成为软骨脱细胞基质支架材料，终浓度为2×107/L的脂肪干细胞种植于软骨脱细胞基质中于软骨细胞方向诱导培养基中培养2周，构建软骨组织。新鲜制备的软骨脱细胞基质及构建的软骨组织分别行组织学、免疫组织化学及透射电镜检测。[结果]实验制备的软骨脱

2、细胞基质支架材料内无细胞结构存在，仅残留空白软骨陷窝。具有合适的孔隙率和孔径大小;复合脂肪源性干细胞后细胞向材料内部迁移，粘附，生长良好。部分载体内细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。[结论]软骨脱细胞基质可作为支架材料应用于软骨组织工程，复合脂肪源性干细胞培养可成功构建软骨组织。【关键词】软骨组织;脱细胞基质;脂肪源性干细胞　　Abstract：[Objective]Toinvestigatethemethodsofpreparingacellularcartilaginousmatrix(ACM)andconstructingthetissueengineeredcartilagece

3、lls(ADSCs)seededacellularcartilaginousmatrixinvitro.[Method]TheADSCsadultNeplifiedinvitro.FreshcartilageisolatedfromadultNeatrixatafinaldensityof2×107/Landculturedinchondrogenicdifferentiationmediumfortmunohistochemistryandtransmissionelectronmicroscope(TEM)inethefreshACMandtissueengineeredcar

4、tilage.[Result]Thetestofhematoxylineosin(HE)stainingandTEMshoovedcells.TheACMhadsuitableintervalporosityandaperturesize.AfterintegratedigratedintotheACMandadheredtothesurfaceofmaterialandgreediumfortmunohistochemicalstainingoftypeⅡcollagenshoaterialhadenhancedexpressionoftypeⅡcollagen.[Conclus

5、ion]ACMcanbeusedasscaffoldmaterialincartilagetissueengineering.Ifitedium,ACMcanbeusedtoconstructcartilagetissuesuccessfully.　　Keyatrix;adiposedrivedstemcells　　关节软骨因损伤或退行性病变引起缺损后，自身修复能力十分有限。近年来，软骨组织工程的迅速发展，为解决这个难题提供了新的途径[1～3]。而寻找一种合适的软骨细胞载体则是当前软骨组织工程研究的焦点之一。脱细胞基质是近几年发展起来的天然支架材料，因其去除了组织中的抗原性成分，故

6、具有良好生物相容性，在组织工程中应用广泛[4]。　　2001年ZukPA等[5]从人和大鼠的脂肪组织中发现了具有自我更新能力，活力持久及多向分化潜能的细胞并命名为脂肪源性干细胞。2003年GimbleJ、GuilakF[6]又在不同诱导方案下诱导脂肪源性干细胞向脂肪细胞、成骨细胞、肌肉细胞、心肌细胞、神经细胞、软骨细胞等分化进一步证实其干细胞的特性。本实验采用软骨脱细胞基质复合脂肪干细胞的方法体外构建组织工程软骨，探讨软骨脱细胞基质作为软骨组织工程支架材料的可能性。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1实验动物成年新西兰大白兔，体重约为2.5～4kg，广东省医学实验动物中心提供

7、，SPF级。　　1.1.2主要试剂胎牛血清(中国医学科学院生物工程研究所);Ⅰ-型胶原酶(Gibco);免疫组化SP试剂盒(天津海洋生物);TritonX100(北京拜尔迪生物工程有限公司);Typsin(华美生物工程有限公司);EDTA(Invitrogen美国);TGFβ1(Sigma美国)。　　1.1.3主要仪器相差倒置显微镜(德国LEica);调温震荡培养箱(金坛富华);透射电镜(日本Hitachi);荧光显微镜系统(德国LEIca);液氮生