原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤抗炎机制研究

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1、原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤抗炎机制研究【摘要】目的研究原花青素（GSP）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤抗炎作用机制。方法大鼠脑缺血再灌注模型完成后，缺血2h再灌注24h，其中原花青素大剂量组(40mg/kg)、小剂量组(10mg/kg)术前7d分别腹腔注射2ml/kgGSP，模型组腹腔注射2ml/kg生理盐水，1次/d，再灌注前15min加注1次。观察不同剂量的原花青素对脑组织一氧化氮（NO）含量、髓过氧化物酶（MPO）活性和脑组织神经细胞的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）蛋白的表达的影响。结果原花青素可显著减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的行为评分；显著降低脑组织中NO含量和MPO的活性，

2、差异有统计学意义（P<0．05）；ICAM-1蛋白的阳性表达率降低，差异有统计学意义（P<0．05）。结论原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用，作用机制之一可能与其抑制炎性反应有关。　　【关键词】原花青素；脑缺血再灌注损伤；细胞间粘附分子-1；髓过氧化物酶；一氧化氮　　　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheAnti-Inflammatorymechanismsofgrapeseedprocyanidin(GSP)oncerebralischemiareperfusioninjury(CIRI)ofrats.MethodsThemod

3、elofMCAOinalsuturetechnique.After2hofocclusionand24hofreperfusion，ThehighdoseGSP(40mg/kg)groupandlog/kg)group.oretimein15minutesbeforeoperation.ThecontentsofNOandactivitiesofMPOinbraintissueofischemichemisphereeasured;theexpressionofICAM-1inthecortexeasuredbyimmunohistochemicalmethod.ResultsThene

4、urologicalscoresofratstreatedodelgrouprats(P<0．05);therearkeddecreaseofMPOinGSPgroupparedodelgroup(P<0．05);paredodelgroup，theexpressionofICAM-1iareperfusioninjury，oneofthemechanismscouldbetheAnti-Inflammatoryeffectofprocyanidin　　【Keyi法制作大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。术前禁食12h，自由饮水，手术过程中用加热垫和灯泡保持大鼠体温。手术在30

5、min内完成，缺血2h后，将栓线抽出再灌注24h，恢复MCA供血。　　1．3神经功能评分参考ZeaLonga的5分制评分标准。　　1．4标本制备及指标测定断头取缺血侧的半暗带皮质备用。电子天平称取脑组织块约0．1g，冰冷生理盐水冲洗残余血液，滤纸拭干，加入Tris缓冲液用玻璃匀浆器制成10%的脑组织匀浆4℃离心3500转/min，15min，取上清液进行NO、MPO的测定。取缺血侧半暗带区皮质于固定液中固定，用于免疫组化样本的制作。　　1．5统计学方法所有数据均用均值±标准差(x±s)表示，应用SPSS11．5软件进行统计，采用多个样本比较方差分析，P<0．05为显著性检验标

6、准。　　2结果　　2．1GSP对大鼠CIRI后神经功能的影响GSP大、小剂量组都能改善大鼠神经功能障碍症状，肌力表现增强，其行为评分与模型组相比差异均有统计学意义（P<0．05）。　　2．2GSP对大鼠CIRI后脑组织NO、MPO含量的影响与假手术组比较，模型组大鼠脑组织NO含量MPO活性显著增高，GSP大、小剂量组可显著降低脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织血清中NO、MPO含量，与模型组比较，差异具有统计学意义(P<0．05)，结果见表1。　　　　2．3GSP对大鼠CIRI后缺血半暗带脑组织ICAM-1表达的影响与模型组比较，GSP大剂量组ICAM-1表达表达明显降低，可

7、见少量细胞浆内有棕黄色颗粒，阳性表达阳性率显著低于模型组，且大剂量组较小剂量组阳性细胞数降低明显，差异均有统计学意义（P<0．05）。结果见表2、图1、2。　　3讨论　　NO通过超氧自由基(O-2)发挥细胞毒性作用，生成强氧化剂硝基阴离子(ONOO-)，后者可导致级联式神经损伤；髓过氧化物酶(MPO)主要存在于中性粒细胞中，中性粒细胞被激活后，可通过脱颗粒作用释放一种重要的髓过氧化物酶即MPO到胞外或吞噬小体内，催化H2O2