环丙基乙炔的含量测定方法及主要杂质鉴定

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1、环丙基乙炔的含量测定方法及主要杂质鉴定【关键词】环丙基乙炔;异丙烯基乙炔;结构鉴定;气相色谱;质谱;含量测定环丙基乙炔(cyclopropylacetylene，CPA)一般作为有机合成中环丙基结构的重要[12]，它的一个重要用途是参与合成依法韦仑(efavirenz,商品名sustiva和stocrin)[34]。依法韦仑是非核苷类逆转录酶抑制剂(nonnucleosidereversetranscriptaseinhibitors,NNRTI)，与恩曲他滨(emtricitabine，商品名emtriva)和tenofovirdisoproxilfumarate(商品名vir

2、ead)以固定剂量组成atripla片剂。Atripla片剂治疗成人HIV1病毒感染者，80%患者体内HIV1病毒数量明显减少，而具有抗感染作用的健康CD4细胞计数却显著升高[5]，且与之前的同类药物相比具有更好的耐受性。　　目前关于环丙基乙炔的分析方法及其杂质的研究还未有文献报道。本研究首先建立环丙基乙炔甲苯溶液中CPA的含量测定方法，该方法专属性强，精密度高，稳定性好，可用于CPA的质量控制。然后利用气相色谱质谱联用法(GCMS)并结合核磁共振(NMR)对其主要杂质进行定性研究并确定其结构，旨在为环丙基乙炔的分析测定制定标准方法，以便更好地控制该类产品的质量，同时为CPA的生

3、产制备提供理论指导，以便减少副产物的产生，提高产品的质量和产率。　　1试验部分　　1.1主要仪器　　SHIMADZUGC17气相色谱仪(FID检测器，GCsolution化学工作站)。　　1.2试剂　　环丙基乙炔甲苯溶液(上海中科合臣股份有限公司)，环丙基乙炔对照品(自制)，二氯甲烷(分析纯，南京化学试剂有限公司)，乙苯(分析纯，南京化学试剂有限公司)。　　1.3溶液制备　　内标溶液的制备：吸取乙苯2.5ml至25ml容量瓶中，加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀即得。对照品溶液的制备：精密称取CPA对照品0.7g至25ml容量瓶中，加二氯甲烷溶解稀释至刻度，摇匀。供试品溶液的制备：精密称取CPA

4、甲苯溶液1g至25ml容量瓶中，加二氯甲烷溶解稀释至刻度，摇匀。　　1.4气相色谱(GC)试验条件　　色谱柱：DB17Ms(30m×0.25mm×0.25μm，Agilent)毛细管柱;汽化室温度280℃;检测器温度300℃;载气(He99.999%)流速1ml·min-1,分流比为1∶50;进样体积0.6μl;初始温度为50℃，维持5min后以10℃·min-1升温至225℃，保持10min;分流进样，1min后开阀。　　1.5MS试验条件　　SHIMADZUQP5000，EI离子源，电离能70eV;离子源温度230℃，质量扫描范围为m/z(质荷比)是40～440的离子。　　2GC分

5、析方法学验证　　2.1验证内容　　2.1.1方法专属性取溶剂、对照品、供试品及内标物等进行气相分析，结果在上述气相条件下CPA保留时间为7.30min，与相邻杂质峰分离度大于1.5，无其他组分干扰。　　2.1.2最低检测限采用逐级稀释的方法，按“1.4气相色谱(GC)试验条件”进样分析，当用0.0029mg·ml-1的对照品溶液进样0.6μl时，得到信噪比(S/N)为3的色谱图，即CPA在该色谱条件下的最低检测限为1.74mg。　　2.1.3线性关系考察精密移取对照品储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,分别置于10ml容量瓶中，再分别加入内标溶液1ml,用二氯甲烷稀释至刻度

6、，摇匀制成系列对照品溶液(1～5号)。分别进样0.6μl，按“1.4气相色谱(GC)试验条件”分析。以CPA质量浓度为横坐标，CPA峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明：CPA质量浓度在2.88～14.1mg·ml-1范围内线性关系良好。回归方程为A=0.1298c-0.0099,r2=0.9999。　　2.1.4精密度试验精密移取CPA对照品溶液3ml至10ml容量瓶中，再精密加入内标溶液1ml，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀。按“1.4气相色谱(GC)试验条件”下重复测定该溶液5次，计算CPA峰面积和内标峰面积的比值，平均值为1.0997,RSD=1.89%。　　2.

7、1.5稳定性试验精密移取CPA对照品溶液3ml至10ml容量瓶中，再精密加入内标溶液1ml，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀。该溶液作为供试品溶液分别在0、1、2、4、8、24h测定,计算CPA峰面积和内标峰面积的比值，平均值为1.0894，RSD=1.66%，表明在24h内溶液较稳定。　　2.1.6加样回收率实验分别精密移取供试品溶液1、2、3ml至10ml容量瓶中,分别加入CPA对照品溶液2ml及1ml内标液,摇匀，制备为供试液并按“