淋巴管标记方法及标志物的探讨

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1、淋巴管标记方法及标志物的探讨【摘要】目的探讨不同标记方法及标志物在淋巴管检测中的价值，为研究肿瘤淋巴管的生成提供理想实验方法。方法用5′核苷酸酶（5′Nase）酶组织化学法对30例正常胃肠新鲜标本（胃及肠组织标本各15例）进行染色观察；用免疫组织化学PV9000法对30例相应胃肠标本石蜡包埋组织行血管内皮生长因子受体3（VEGFR3）和肾小球足突细胞膜黏蛋白（Podoplanin）染色观察。结果淋巴管密度（LVD）:5′Nase组LVD为6.78±1.16，Podoplanin组为6.85±0.84，VEGFR3组为14

2、.33±2.24。VEGFR3组LVD明显高于5′Nase组及Podoplanin组，差异均有显著性（t＝7.55、7.49，P<0.01），Podoplanin组与5′Nase组比较差异无显著性（t＝0.07，P>0.05）。形态学观察：5′Nase及Podoplanin标记的阳性淋巴管位于黏膜固有层及黏膜下层，管壁较薄，管腔内无红细胞；VEGFR3染色阳性的淋巴管较多，位于黏膜固有层及黏膜下层，部分管壁较厚，管腔内见红细胞，且黏膜肌也呈阳性。染色背景：Podoplanin和VEGFR3免疫组织化学染色背景

3、清晰，能清楚显示阳性淋巴管与周围组织结构的关系；5′Nase染色背景呈淡黄色，无法观察淋巴管周围的组织结构。结论免疫组织化学技术下Podoplanin染色可以作为标记淋巴管的理想实验方法。Podoplanin是一种比较特异性的淋巴管标志物。【关键词】淋巴5核苷酸酶血管内皮生长因子受体3肾小球足突细胞膜黏蛋白酶组织化学免疫组织化学［ABSTRACT］ObjectiveToparedifferentlymphaticvesselmarkersandlabellingmethodsinordertofindanidealphangio

4、genesisintumors.MethodsThirtynormalgastrointestinaltissuesbeddedsamplesinedusingimmunohistochemistrytechnique.ResultsLymphaticvesseldensity(LVD)ethods:TheLVDofVEGFR3group(14.33±2.24)phaticspositivelystainedby5′Naseandpodoplanininapropriaandsubmucosa.Thelymphaticphati

5、cs.VEGFR3positivelystainedlymphaticsinapropriaandsubmucosa.Partofthelymphaticphticduct.Therephaticsandthesurroundingtissue,phatics.ConclusionImmunohistochemistrystainingethodforlabelingtissuelymphatics.［KEYphatics;5′Nase;VEGFR3;podoplanin;enzymehistochemistry;immuno

6、histochemistry标记组织中淋巴管常用的方法有免疫组织化学染色检测血管内皮生长因子受体3（VEGFR3）、肾小球足突细胞黏蛋白（Podoplanin）和淋巴管内皮透明质酸受体1（LYVE1）等的表达，以及酶组织化学标记5′核苷酸酶（5′Nase)。但文献中采用不同检测方法和不同标记物检测同类组织中的淋巴管数量有明显差别，其研究结论也不一致［1,2］。因此，本研究分别应用酶组织化学及免疫组织化学方法检测30例正常胃肠黏膜及黏膜下层的淋巴管中5′Nase、VEGFR3和Podoplanin的表达，旨在寻找一种标

7、记淋巴管的理想方法和比较特异性的标志物。1材料与方法1．1材料收集青岛大学医学院附属医院2005年9～12月手术切除的新鲜胃癌及结直肠癌标本中癌周正常的胃肠组织共30例（胃及肠组织标本各15例），所有标本均放入－70℃液氮中保存。1．2试剂兔抗人VEGFR3抗体（工作液）、PV9000通用型试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。鼠抗人Podoplanin单克隆抗体（稀释度为1∶150）购自美国Angiobio公司。酶组织化学试剂：多聚甲醛（上海化学试剂公司），三羟甲基氨基甲烷（Ttis，上海试剂三厂），顺丁烯

8、二酸（上海试剂三厂），腺苷5′磷酸钠（Sigma公司），硫酸镁（汕头光华化学试剂公司），硝酸铅（中国金山化工厂），硫化胺（汕头光华化学试剂公司）。1．3实验方法1．3．1酶组织化学法5μm厚正常胃肠组织冷冻切片，用50g/L多聚甲醛