他克莫斯对树突状细胞分化、成熟和功能的影响

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1、他克莫斯对树突状细胞分化、成熟和功能的影响【摘要】目的：探讨他克莫斯（tacrolimus,FK506）对大鼠骨髓源性树突状细胞(DCs)分化、成熟和免疫学活性的影响.方法：收集大鼠骨髓源性DCs，加入不同浓度的FK506进行培养，采用流式细胞术行DCs表型分析，ELISA法检测培养上清中IL12的水平并行体外混合淋巴细胞反应（MLR），观察DCs对同种T细胞的刺激能力.构建大鼠肾移植模型，于移植前7d输注FK506处理的DCs，观察移植肾存活时间.采用ELISA法检测MLR培养上清和移植大鼠血清中TH1/TH2细胞因子IFNγ，IL2，IL4和IL10

2、的表达水平.结果：FK506对DCs表面分子(Iad，CD80和CD86)的表达无明显影响(P>0.05)，而IL12的分泌水平降低(P<0.05)，并显著抑制DCs对T细胞的激活能力(P<0.05).大鼠移植肾存活时间分别为对照组(6.3±0.7)d，DCs组(7.2±1.4)d与FK506DCs组(19.0±2.3)d，对照组与DCs组之间差异无统计学意义，而FK506DCs组与DCs组之间差异有统计学意义(P<0.05).在体外MLR和动物实验中，FK506DCs组与DCs组比较，IL2，IFNγ表达水平均显著降低(P&l

3、t;0.05)，IL4表达水平显著升高(P<0.05)，而IL10的表达水平在体外显著升高(P<0.05)，但在动物实验中与DCs组差异无统计学意义(P>0.05).结论：FK506不影响DCs的分化与成熟，对其免疫学功能起负性调节作用.可能机制为FK506通过抑制DCsIL12的分泌，来促使Th1/Th2亚群分化倾向于Th2方向.【关键词】他克莫斯;树突状细胞;免疫耐受;器官移植　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectoftacrolimus(FK506)onthedifferentiation,mat

4、urationandfunctionofratbonemarrousatconcentrationsof5-20μg/LtotheDCscultureandcheckedtheexpressionsofactivationmarkers(Iad,CD80andCD86)byfloetry,thereleaseofcytokinesIL12byELISAandthestimulatorycapacityoftheresultedDCsbymixedlymphocytereaction(MLR).ThirtyCSF)与外源性脂多糖(LPS)（Sigma公司）；RP

5、MI1640培养基及胎牛血清（Gibco公司）；PE标记的小鼠抗大鼠Iad，CD80，CD86mAb（eBioscience公司）；IL12，IL4，IL10，IL2，IFNγ的ELISA试剂盒（Bender公司）；3HTdR（AmershamLifeScience公司）.EpicXL型流式细胞仪(美国BeckmanCoulter公司).　　1.2方法　　1.2.1骨髓DCs的提取与鉴定参照文献［2］的方法，取SD大鼠（供者）股骨，冲洗出骨髓细胞，以1∶10的体积比加入37℃预温的TrisNH4Cl去除红细胞；加GNK缓冲液终止反应，离心洗涤2次

6、；用RPMI1640调细胞密度为1×109/L，37℃,50mL/LCO2条件下培养2h；轻轻洗去非粘附细胞；在贴壁细胞中加入含10μg/LrrIL4和10μg/LrrGMCSF的RPMI1640完全培养基，37℃,50mL/LCO2条件下培养6～7d，收集生长状态良好的DCs备用.　　1.2.2DCs表型与分泌IL12水平分析将DCs分成4组，每组设3复孔：①对照组(DCs组)；②FK506处理组(FK506DCs组)：培养液中加入不同浓度FK506（5,10,20μg/L）；③脂多糖刺激组(LPSDCs组)：在培养结束前18h加入100μg/LLPS

7、；④FK506处理+脂多糖刺激组(FK506LPSDCs组).在37℃,50mL/LCO2条件下培养7d，收集培养上清液，ELISA方法检测IL12水平（按试剂盒说明书进行）.收获细胞（2×109/L）；分别加入PE标记的抗Iad,抗CD80或抗CD86mAb(终浓度5mg/L)，4℃作用45min；流式细胞仪分析，以中位荧光强度（MFI）作为检测指标.　　1.2.3体外混合淋巴细胞反应(MLR)分析取I1640培养基培养72h；于培养结束前18h每孔加入3HTdR3.7×104Bq；β计数仪测量待测细胞的3HTdR掺入值(cpm).　　1.2.4大鼠

8、肾移植模型