血管紧张素Ⅱ促进树突状细胞成熟和功能

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1、http://www.paper.edu.cn1血管紧张素Ⅱ促进树突状细胞成熟和功能杨红振，刘含智，米粟，花芳，胡卓伟*中国医学科学院&北京协和医学院，北京（100050）E-mail：huzhuowei@imm.ac.cn摘要：血管紧张素ⅡⅡ(Ang)在许多以炎症和纤维化为主要病理改变的心血管疾病，如高血压、动脉为粥样硬化和心力衰竭等，发生和发展过程中发挥了关键作用。树突状细胞（DC）是连接固有免疫和获得性免疫的桥梁，决定获得性免疫的极化方向。因此，我们通过流式细胞术探讨了AngII对DC成熟、功能的调节作用和相应信号

2、通路。AngII可通过上调DC表面CD11c、MHCII、CD40、CD86和OX40L等表面标志表达诱导DC成熟，刺激T细胞产生IL-4，诱导TH1/TH2平衡向TH2方向漂移。AngII对DC的刺激作用与AngII刺激的ERK磷酸化有关。以上结果有助于我们深入理解AngII所致心血管疾病发生和发展的免疫学机制，为治疗AngII异常相关疾病提供有效的理论支持。关键词：血管紧张素Ⅱ，免疫调节作用，树突状细胞1.引言血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是肾素-血管紧张素－醛固酮系统的主要效应因子，在维持机体血容量、血流动力学及内环境稳

3、态中发挥主导作用。研究证明，AngⅡ在许多心血管疾病，[1]包括高血压、心力衰竭和缺血性心脏病的发生、发展过程中发挥了关键作用。AngⅡ的生物学作用经两个膜受体AT1和AT2介导。两个受体亚型都是G蛋白偶合受体家族成员。研究发现，AT1受体亚型介导大多数AngⅡ的作用。在AT1受体信号传导过程中，许多蛋白[2]质分子以链式反应的方式组成信号传导通道并介导不同的细胞生物学反应。同一信号通道之间的蛋白质分子通过蛋白质磷酸化或其它蛋白质－蛋白质相互作用的方式完成信号传导功能。同时，这些信号传导通道之间又存在复杂的相互作用。免疫

4、系统主要进化为保护机体免受病原菌侵染的第一道防线。TLR配基激活TLR，启动固有免疫。最新的研究表明TLR不但介导病原体模式分子（PAMP），而且介导非感染性内源TLR配基的作用。细胞损伤过程中形成的损伤细胞或组织碎片均可诱导非感染性内源TLR配[3]基产生。实际上，越来越多的证据表明TLR在损伤相关肾脏疾病病理过程中可能发挥作用。RAS系统在炎症和纤维化过程中均发挥重要作用。用血管转化酶（ACE）抑制剂或AngII受体I阻断剂可保护环孢霉素所致肾脏毒性。除了我们熟知的调节血液动力学功能外，AngII[4]还具有抗炎、抗

5、纤维化和免疫调节功能。但是，AngII的免疫调节作用机制还不清楚。DC是高度特异的抗原呈递细胞，可特异性激活静息状态T细胞。产生于骨髓中的DC前体细胞进入血管循环，然后迁移到组织，作为未成熟DC细胞生长，在接触到局部感染或炎[5]症信号后发挥岗哨功能。在成熟诱导相关刺激，如细胞产生或炎症因子作用下，未成熟DC具有较强的捕获和加工抗原能力，进入末端分化/满打激活状态。在此过程中，DC离开周围组织，迁移至二级淋巴器官的T细胞信赖区，增加其刺激幼稚T细胞能力，因而启动免疫反应。因此，我们想知道AngII对DC成熟和功能的调节作

6、用和机制。1本课题得到高等学校博士学科点专向科研基金（20040023053）的资助。-1-http://www.paper.edu.cn2.材料和方法2.1试剂FITC-、PE-或PE-cy5标记的抗CD11c、MHCII、CD40、CD54、CD80、CD86、OX40L抗体以及相应同型对照抗体购自BioLegend公司。PE-cy5标记CD4抗体、PE标记IFN-γ抗体、FITC标记IL-4抗体和相应同型对照抗体购自e-Bioscience公司。AngII和LPS购自Sigma公司。抗ERK抗体购自SantaCru

7、z公司。磷酸化ERK抗体购自CellSignal公司。其它所有试剂均来源于标准商业途径。通过Limulusamebocytelysateassay试剂盒(BioWhittaker;Walkersville,MD)检测，结果表明AngII溶液中同位素素水平<0.01ng/ml。2.2细胞培养小鼠DC前体细胞购自美国ATCC公司(CRL-11904)，培养于补加20%胎牛血清(FBS,BIoWhittaker,MD)、1mM丙酮酸钠、0.1mM非必需氨基酸、100U/ml青霉素和链霉素、[6]5ng/ml重组小鼠粒细胞-巨噬

8、细胞集落刺激因子（GM-CSF）的α-MEM培养基中。为评价5AngII对DC前体细胞表型的调节作用，以5×10细胞/ml密度氢把DC前体细胞接于6孔板中，然后加入不同剂量的AngII（如图所示）刺激；于37°C、5%CO2条件下培养，24小时后收集细胞，进行检测。2.3流式细胞术参考文献[7,8]，收集细胞，PBS