用uv处理大蒜根尖并对其进行微核检验

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1、用UV处理大蒜根尖并对其进行微核检验摘要：用大蒜根尖细胞微核技术检测不同紫外线照射时间下微核的诱变效果。设置对照：自来水处理组，实验组：紫外线照射时间1min,2min,3min。发现紫外线在诱导微核产生方面影响明显。关键词：大蒜根尖，紫外线，微核千分率1引言19世纪末，Howell与Jolly分别在猫和大鼠外周血中发现一种小体，命名为Howell-Jolly小体，并且发现这种小体也存在于恶性贫血患者外周血中。这一小体便是今日被称之为微核的小体。微核（micronucleus,简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现

2、形式。微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。所以许多人认

3、为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出等都存在污染环境的可能性，欲了解这些因素对机体潜在的遗传危害，需要有一套高度灵敏，技术简单易行的测试系统来监测环境的变化。只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。目前国内外不少部门已把微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。近年来，国内学者用蚕豆根尖微核技术检测具有诱变活性的污水、化学药品、农药等。但均为

4、诱变剂单独作用时的诱变效应。本试验利用蚕豆根尖微核技术，研究农业生产中常用农药甲胺磷、甲基硫菌灵、盐酸吗啉胍在规定使用浓度范围内，单独和联合作用时对蚕豆根尖细胞的遗传毒性，以探讨其毒理作用及是否存在拮抗或协同效应，为农业生产上安全合理使用农药和污染治理提供科学依据。2材料和方法2.1材料：2.1.1实验材料：大蒜2.1.2实验器材：显微镜、载破片、盖玻片、刀片、滤纸、烧杯、离心管、培养皿、紫外诱变箱、冰箱、手动计数器、镊子、恒温培养箱2.1.3实验药品：清水、甲醇、冰醋酸、乙醇、5mol/L盐酸、改良苯酚品红液、卡诺（甲醇：冰醋酸=3:1）固定液2.2实验方法2.2.1

5、浸种催芽：将实验用大蒜按需要量放入盛有自来水的烧杯中，25℃下浸泡24h,此间至少换水两次，所换水应25℃预温，种子吸胀后，用纱布松散包裹置培养皿中，保持温度，在25℃温箱中催芽12-24h，待初生根长出1.0-1.5mm时，再取发芽良好的种子，放入铺满滤纸的培养皿中，25℃继续催芽，经36-48h，大部分初生根长至1-2cm左右，根毛发育良好，即可用来实验了。2.2.2用UV处理大蒜根尖：选12粒初生根生长良好，根长一致的种子，分为四组，每组3粒，用吸水纸吸干根尖表面的水，然后分别放于培养皿中。其中一组加入清水，作为阴性对照；其它三组分别用UV处理2min、3min、

6、4min等时间段。处理后分别加入适量清水浸没根尖即可，并作标记。2.2.3根尖细胞恢复：处理后的种子，放于25℃下恢复培养24h。2.2.4根尖细胞固定及保存：将恢复后的种子，从根尖顶端切下分别放入标记好的离心管中，每个离心管加5ml卡诺（甲醇：冰醋酸=3:1）固定液放于4℃冰箱固定24h。固定后，将卡诺倒了，每个离心管加5ml70%的乙醇溶液，置于4℃冰箱保存。2.2.5制片及观察①解离：取出离心管,倒掉乙醇。用清水冲洗根尖，向离心管中加入4ml5mol/L的盐酸，60℃下处理4min。②水洗：解离后取出根尖放入培养皿中充分用蒸馏水水洗三次。③染色：用镊子取出根尖放在

7、载玻片上，切取5mm，用改良苯酚品红液染色15min。④压片：染色结束后，盖上盖玻片，用大拇指轻轻往下摁使细胞分散开来形成一层细胞易于观察,注意盖玻片不可以移动。⑤镜检：先在低倍镜下找到分生区的细胞，再换成高倍镜仔细观察。2.2.6记录实验结果用计数器几下观察的细胞数目，同时记录下有微核的细胞数目。每个处理观察3个根尖，每个根尖数200个左右细胞。3.结果与分析3.1UV对大蒜根尖细胞微核率的影响将制片先置显微镜低倍镜下,找到分生组织区细胞分散均匀、膨大、分裂相较多的部位,再转到高倍镜(物镜40×)下进行观察,凡是在主核大小的1/3以下,