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时间:2018-04-16
《茶树亚硝酸还原酶基因csnir的克隆及表达分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、园艺学报,2016,43(7):1348–1356.ActaHorticulturaeSinica1348doi:10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0324;http://www.ahs.ac.cn茶树亚硝酸还原酶基因CsNiR的克隆及表达分析*张芬,王丽鸳,成浩,韦康,胡娟,张成才,刘圆,吴立赟,李海琳(中国农业科学院茶叶研究所,国家茶树改良中心,杭州310008)摘要:以‘龙井43’茶树叶片的cDNA为模板,利用RTPCR技术克隆了茶树亚硝酸还原酶基因(CsNiR),得到完整的ORF全长为1764bp,编码
2、587个氨基酸;所推导的氨基酸序列与垂枝桦(Betulapendula)、拟南芥(Arabidopsisthaliana)、菠菜(Spinaciaoleracea)和水稻(Oryzasativa)的同源性均大于76%。生物信息学分析表明,CsNiR分子量为68.648kD,等电点为6.12,为亲水性的非分泌蛋白;二级结构的预测显示,CsNiR具有完整的NiR蛋白结构,含血红素蛋白β–化合物区域和4Fe-4S区域。实时荧光定量结果表明,该基因在成熟叶片中表达量高于一芽二叶和根。采用营养液水培3个茶树品种,-1在氮饥饿两周后分别供应正常氮素和低
3、氮素(1和0.1mmol·LNH4NO3),qRT-PCR测定发现,正常氮素处理的2h和6h,诱导根CsNiR表达量显著增加,叶片中的表达量变化延迟到24h之后,且变化幅度存在基因型之间的差异;低氮处理对CsNiR表达量的影响相对较小。因此,研究CsNiR基因的表达特性及其在茶树氮素利用中所发挥的作用,需结合茶树基因型、组织部位、供氮水平等进行综合评价。关键词:茶树;亚硝酸还原酶;克隆;基因表达;氮素中图分类号:S571.1文献标志码:A文章编号:0513-353X(2016)07-1348-09MolecularCloningandExp
4、ressionAnalysisofNitriteReductaseGeneCsNiRinTeaPlant*ZHANGFen,WANGLi-yuan,CHENGHao,WEIKang,HUJuan,ZHANGCheng-cai,LIUYuan,WULi-yun,andLIHai-lin(TeaResearchInstitute,theChineseAcademyofAgriculturalSciences,NationalCenterforTeaImprovement,Hangzhou310008,China)Abstract:Teanitr
5、itereductase(CsNiR)wasclonedbyRT-PCRfromcDNAisolatedfromleavesofcultivar‘Longjing43’.ThecompleteORFoftheCsNiRwas1764bpencoding587aminoacids.AlignmentofaminoacidsequencesshowedthatCsNiRsharingmorethan76%similaritiestoNiRinBetulapendula,Arabidopsisthaliana,Spinaciaoleraceaan
6、dOryzasativa.BioinformaticsanalysisindicatedthattheCsNiRwasahydrophilicnon-secretoryproteinwithmolecularweight68.648kDandtheoreticalpI6.12.PredictionresultsbyInterProScanshowedthesecondarystructureofCsNiRproteincomprisedofahemoproteinbetacomponentanda4Fe-4Sregion,andits3Ds
7、tructurewasalsopredicted收稿日期:2016–05–26;修回日期:2016–07–05基金项目:国家自然科学基金项目(31570695);国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目(CARS-23);浙江省农业新品种选育重点专项(2012C2905-4)*通信作者Authorforcorrespondence(E-mail:chenghao@tricaas.com)张芬,王丽鸳,成浩,韦康,胡娟,张成才,刘圆,吴立赟,李海琳.茶树亚硝酸还原酶基因CsNiR的克隆及表达分析.园艺学报,2016,43(7):1348–13
8、56.1349bySwissModel.qRT-PCRanalysisrevealedthattheexpressionabundanceofCsNiRinmatureleave
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