茶树亚硝酸还原酶基因csnir的克隆及表达分析

《茶树亚硝酸还原酶基因csnir的克隆及表达分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、园艺学报，2016，43(7)：1348–1356.ActaHorticulturaeSinica1348doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0324；http：//www.ahs.ac.cn茶树亚硝酸还原酶基因CsNiR的克隆及表达分析*张芬，王丽鸳，成浩，韦康，胡娟，张成才，刘圆，吴立赟，李海琳（中国农业科学院茶叶研究所，国家茶树改良中心，杭州310008）摘要：以‘龙井43’茶树叶片的cDNA为模板，利用RTPCR技术克隆了茶树亚硝酸还原酶基因（CsNiR），得到完整的ORF全长为1764bp，编码

2、587个氨基酸；所推导的氨基酸序列与垂枝桦（Betulapendula）、拟南芥（Arabidopsisthaliana）、菠菜（Spinaciaoleracea）和水稻（Oryzasativa）的同源性均大于76%。生物信息学分析表明，CsNiR分子量为68.648kD，等电点为6.12，为亲水性的非分泌蛋白；二级结构的预测显示，CsNiR具有完整的NiR蛋白结构，含血红素蛋白β–化合物区域和4Fe-4S区域。实时荧光定量结果表明，该基因在成熟叶片中表达量高于一芽二叶和根。采用营养液水培3个茶树品种，-1在氮饥饿两周后分别供应正常氮素和低

3、氮素（1和0.1mmol·LNH4NO3），qRT-PCR测定发现，正常氮素处理的2h和6h，诱导根CsNiR表达量显著增加，叶片中的表达量变化延迟到24h之后，且变化幅度存在基因型之间的差异；低氮处理对CsNiR表达量的影响相对较小。因此，研究CsNiR基因的表达特性及其在茶树氮素利用中所发挥的作用，需结合茶树基因型、组织部位、供氮水平等进行综合评价。关键词：茶树；亚硝酸还原酶；克隆；基因表达；氮素中图分类号：S571.1文献标志码：A文章编号：0513-353X（2016）07-1348-09MolecularCloningandExp

4、ressionAnalysisofNitriteReductaseGeneCsNiRinTeaPlant*ZHANGFen，WANGLi-yuan，CHENGHao，WEIKang，HUJuan，ZHANGCheng-cai，LIUYuan，WULi-yun，andLIHai-lin（TeaResearchInstitute，theChineseAcademyofAgriculturalSciences，NationalCenterforTeaImprovement，Hangzhou310008，China）Abstract：Teanitr

5、itereductase（CsNiR）wasclonedbyRT-PCRfromcDNAisolatedfromleavesofcultivar‘Longjing43’.ThecompleteORFoftheCsNiRwas1764bpencoding587aminoacids.AlignmentofaminoacidsequencesshowedthatCsNiRsharingmorethan76%similaritiestoNiRinBetulapendula，Arabidopsisthaliana，Spinaciaoleraceaan

6、dOryzasativa.BioinformaticsanalysisindicatedthattheCsNiRwasahydrophilicnon-secretoryproteinwithmolecularweight68.648kDandtheoreticalpI6.12.PredictionresultsbyInterProScanshowedthesecondarystructureofCsNiRproteincomprisedofahemoproteinbetacomponentanda4Fe-4Sregion，andits3Ds

7、tructurewasalsopredicted收稿日期：2016–05–26；修回日期：2016–07–05基金项目：国家自然科学基金项目（31570695）；国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-23）；浙江省农业新品种选育重点专项（2012C2905-4）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：chenghao@tricaas.com）张芬，王丽鸳，成浩，韦康，胡娟，张成才，刘圆，吴立赟，李海琳.茶树亚硝酸还原酶基因CsNiR的克隆及表达分析.园艺学报，2016，43(7)：1348–13

8、56.1349bySwissModel.qRT-PCRanalysisrevealedthattheexpressionabundanceofCsNiRinmatureleave