灵芝孢子粉对裸鼠移植性人肝肿瘤血管生成的抑制作用论文

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1、灵芝孢子粉对裸鼠移植性人肝肿瘤血管生成的抑制作用论文.freelageproPlus5.0彩色图像定量分析法检测裸鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）和微血管密度（MVD）。结果灵芝孢子粉为2.1g.kg时，对裸鼠移植瘤的抑制率为57.0%，与空白对照组比较有显著差异（P0.01）。镜下观察.freelaspore（LGS）onthegroanhepatocarcinomaHepG2xenograftinathymicnudemice.MethodsThenudemicemodelsofhumanhepa-tocarcinoma

2、HepG2lydividedintoaNSblankcontrolgroup，a5-FUpositivetreatmentcontrolgroupandaLGStreatmentgroup.H-Estaining，SPimmunohistochemistryandquantitativepathologicimageanalysissystemicrovesseldensity（MVD）andexpressionofvascularendothelialgroorti-ssue.ResultsTheinvivostudyreveal

3、edthatLGSproducedquitecertaintherapeuticeffectonthegroacellstrain（dose:2g.kg，inhibitoryrate:57.0%，P0.01）.Morphologicstudyshoorenecrosisandlessdegreeofatypia，decreasedMVDandVEGFexpressionintheLGSgroup，asparedortissueofhumanhepatocarcinomaHepG2innudemice.Itsmechanismsmay

4、berelatedtothereductionofVEGFexpression.Keyaspore;hepatocarcinomacellstrainHepG2;nudemouse;angiogenesis大量的实验研究表明，肿瘤新生血管的形成与肿瘤的生长和转移扩散密切相关［1］，肿瘤的血管密度与实体瘤的预后有关。抑制新生血管的形成，则能抑制肿瘤的生长和转移，使肿瘤处于休眠状态［2］。灵芝是担子菌纲多孔科灵芝属真菌，其生长成熟后所散发出来的孢子体即灵芝孢子粉。灵芝孢子粉富含三萜、多糖及微量元素等有效成分。临床报道孢子粉可改善机体的免

5、疫功能，防治癌症，减轻患者对放疗、化疗的不良反应［3～5］。近来有报道显示，灵芝提取物对前列腺癌细胞的血管内皮生长因子（VEGF）和肿瘤生长因子β1（TGF-β1）有抑制作用［6］。为了进一步证实其客观疗效并研究其作用机制，本实验选用裸小鼠人肝癌HepG2移植瘤模型，观察该药对肿瘤的抑制作用，进一步检测肿瘤组织中VEGF及微血管密度（MVD），研究灵芝孢子粉对肿瘤血管生成的影响。1材料和方法1.1材料1.1.1肿瘤细胞株HepG2为人肝癌细胞株，由南方医院肿瘤科生物治疗室提供，用DMEM培养基（含10%小牛血清，青霉素105U.L，

6、链霉素100mg.L），37℃，5%CO2培养。1.1.2实验动物6～9周龄BALB.C裸鼠30只，体重22～30g，雌雄不拘，无特定病原体（SPF）条件下饲养。由南方医科大学实验动物中心提供，动物质量合格证号No.00736。1.1.3药品及试剂灵芝孢子粉，广州盈康科技有限公司提供。5-氟尿嘧啶（5-FU），江苏南通精华制药有限公司产品，批号050307。DMEM培养基，GIBCO公司产品。新生小牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司产品，批号040622，使用前热灭活（55℃，30min）。胰酶，GIBICO公司产品，购于广州晶

7、美生物工程有限公司。青霉素，广州天心药业股份有限公司产品，批号050311。链霉素，华北制药股份有限公司产品，批号041211。兔抗VEGF多克隆抗体，LabVision公司产品，目录号RB-9301-P0。羊抗CD31多克隆抗体，SANTACRUZ公司产品，目录号sc-1506。抗羊及抗兔SP试剂盒（Kit-9706，Kit-9709）、阳性对照片、DAB显色剂（DAB-0031）均购自福州迈新生物技术开发有限公司。其他试剂均为国产分析纯。1.1.4主要仪器CO2培养箱，超净工作台，倒置相差电子显微镜（COICXDS-1B），Im

8、ageproPlus5.0病理图像分析系统。1.2方法1.2.1体内抑瘤实验［7］取对数生长期的人肝癌HepG2细胞，0.25%胰酶消化后，用无血清DMEM配成1010cell.L的单细胞悬液。在无菌条件下接种于裸鼠腋窝皮下，0.2m