固金方抑制裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的实验研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果固金方抑制裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的实验研究【关键词】固金方Lewis肺癌细胞微血管密度血管内皮生长因子恶性肿瘤的生长和转移有赖于瘤体内血管的形成，抗肿瘤血管生成治疗日益成为人们研究的重点。固金方是我们临床上多年来治疗呼吸道肿瘤的有效方剂，配合化疗具有增强免疫力，减毒增效的作用［1］。我们在前期工作的基础上，对其作用机理进行探讨，本实验重点观测固金方对Lewis肺癌细胞生长及其血管生成的影响。　　1材料动物昆明种雌性裸小鼠，体重1

2、8～22g，由河北医科大学实验动物中心提供。用药固金方，购自河北省中医院，并经医大中药系鉴定。环磷酰胺/支，上海华联公司产品，批号：01014。瘤细胞株Lewis肺癌细胞株购自中国科学院上海细胞生物研究所。试剂及仪器CD34单抗及免疫试剂盒，购自北京中山生物技术公司；德国LEica切片机；CS-B型摊片烤片机；ACS-EAS电子天平。　　2方法课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士

3、生必须有创新性的成果.1移植瘤动物模型制备瘤种细胞株从冻存的液氮内取出，复苏后分别接种于小鼠左后肢皮下，接种后7～10d，选择肿瘤生长旺盛且无破溃的动物，颈椎脱臼致死，固定于板上，消毒操作部位皮肤后切开，用无菌玻璃匀浆器研磨，磨匀后放入无菌容器内，加生理盐水适量稀释成1∶3～1∶4的瘤细胞混悬液，每只鼠种接种于右前肢腋窝下，整个接种时间在30min内完成。.2动物分组及给药接种后随机分成4组，每组10只。①模型组：每只灌胃生理盐水，1次/d；②对照组：环磷酰胺按20mg/kg腹腔注射，1次/d；③固金方组：按/kg灌胃，1次/d；④固金方加环磷酰胺组：每日分别灌胃固

4、金方及腹腔注射环磷酰胺。灌胃开始于接种后第2天，各组用药时间均为6周。.3观察项目及检查方法接种给药6周后处死动物。观察下列项目：.瘤体积、瘤重用游标卡尺测量瘤体长径和短径，计算瘤体积，瘤体积=Ⅱab2/d绘制增殖曲线。肿瘤抑制率=/模型组平均瘤重×100%。.MVD检测实验终末小鼠死亡时将肿瘤组织剥离，甲醛固定，石蜡埋切片,课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成

5、果SP法进行CD34免疫组化染色。结果判定：任何胞浆内染成棕色的内皮细胞或内皮细胞团，均按独立的微血管计数。计数时先于低倍镜下选择癌灶浸润最明显处，然后在200倍镜下计数5个视野内微血管数目，取其平均值做为MVD。.肿瘤组织血管内皮生长因子mRNA半定量分析采用逆转录聚合酶链反应技术。①组织总RNA摄取；②RNA鉴定和定量；③CDNA合成、PCR扩增。VEGF引物序列为：上游5′-TGTGCTGGCCTTGGTGAGGT-3′，下游5′-TGTGCTGGCCTTGGTGAGGT-3′；β-actin引物序列为：上游5′-TTCCAGCCTTCCTTCCTGG-3′，

6、下游5′-TTGCGCTCAGGAAGGAGCAAT-3′。取PCR产物电泳，对电泳条带进行吸度峰值下面积积分，将VEGF作为VEGFmRNA表达水平的相对参数。.4统计学分析应用SPSS统计分析软件进行统计学分析。　　3结果.1不同治疗课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果对肿瘤的抑制作用在实验过程中发现，联合组、固金方组、对照组接种后移植瘤出现较模型组晚约1

7、周，且固金方组有一动物直到接种后2d，即中药治疗2d才出现肉眼可见的肿瘤生长，联合组则有一动物直到实验结束尚未见肿瘤生长，而模型组无此现象。为了排除接种失败，我们所有的实验结果均剔除此2例。按固金方组、联合组分别为9个动物，进行统计分析。从表1可以看出：对照组、固金方组、联合组的移植瘤体积、瘤重均明显小于模型组。固金方组抑瘤率虽略低于对照组，但经统计学分析无显著性差异。联合组抑瘤率明显提高，这些结果表明固金方有与环磷酰胺相似的抑瘤效果，两者联合抑瘤效果明显提高。表1不同治疗对肿瘤的抑制作用.2各组小鼠肿瘤组织MVD表达比较各组荷瘤鼠肿瘤组织中均检测到MVD的表达