固金方抑制裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的实验研究论文

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1、固金方抑制裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的实验研究论文【关键词】固金方Lel接种于右前肢腋窝下，整个接种时间在30min内完成。2.2动物分组及给药接种后随机分成4组，每组10只。①模型组：每只灌胃0.2ml生理盐水，1次/d；②对照组：环磷酰胺按20mg/kg腹腔注射，1次/d；③固金方组：按12.5g/kg（稀释为每毫升含药1.25g，相当于成人剂量10倍）灌胃，1次/d；④固金方加环磷酰胺组（简称“联合组”）：每日分别灌胃固金方（剂量同固金方组）及腹腔注射环磷酰胺（剂量同对照组）。灌胃开始于接种后第2天，各组用药时间均为6周。2.3

2、观察项目及检查方法接种给药6周后处死动物。观察下列项目：2.3.1瘤体积、瘤重用游标卡尺测量瘤体长径和短径，计算瘤体积，瘤体积=Ⅱab2/d（a长径，b短径）绘制增殖曲线。肿瘤抑制率=（模型组平均瘤重-给药组平均瘤重）/模型组平均瘤重×100%。2.3.2MVD检测实验终末小鼠死亡时将肿瘤组织剥离，甲醛固定，石蜡埋切片,SP法进行CD34免疫组化染色。结果判定：任何胞浆内染成棕色的内皮细胞或内皮细胞团，均按独立的微血管计数。计数时先于低倍镜下选择癌灶浸润最明显处，然后在200倍镜下计数5个视野内微血管数目，取其平均值做为MVD。2.3.

3、3肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）mRNA半定量分析采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术。①组织总RNA摄取；②RNA鉴定和定量；③CDNA合成、PCR扩增。VEGF引物序列为：上游5′-TGTGCTGGCCTTGGTGAGGT-3′，下游5′-TGTGCTGGCCTTGGTGAGGT-3′；β-actin引物序列为：上游5′-TTCCAGCCTTCCTTCCTGG-3′，下游5′-TTGCGCTCAGGAAGGAGCAAT-3′。取PCR产物电泳，对电泳条带进行吸度峰值下面积积分，将VEGF（β-actin×100）作为VE

4、GFmRNA表达水平的相对参数。2.4统计学分析应用SPSS11.0统计分析软件进行统计学分析。3结果3.1不同治疗对肿瘤的抑制作用在实验过程中发现，联合组、固金方组、对照组接种后移植瘤出现较模型组晚约1周，且固金方组有一动物直到接种后25d，即中药治疗24d才出现肉眼可见的肿瘤生长，联合组则有一动物直到实验结束尚未见肿瘤生长，而模型组无此现象。为了排除接种失败，我们所有的实验结果均剔除此2例。按固金方组、联合组分别为9个动物，进行统计分析。从表1可以看出：对照组、固金方组、联合组的移植瘤体积、瘤重均明显小于模型组。固金方组抑瘤率虽略低

5、于对照组，但经统计学分析无显著性差异（P＞0.05）。联合组抑瘤率明显提高（P＜0.05），这些结果表明固金方有与环磷酰胺相似的抑瘤效果，两者联合抑瘤效果明显提高。表1不同治疗对肿瘤的抑制作用（略）3.2各组小鼠肿瘤组织MVD表达比较各组荷瘤鼠肿瘤组织中均检测到MVD的表达，其表达水平分别为：模型组（31.96±4.24）；对照组（15.11±3.55）；固金方组（14.98±3.01）；联合组（7.13±1.65）。与模型组相比，对照组、固金方组、联合组肿瘤组织MVD表达均明显下降（P＜0.05）；与对照组比较，固金方组MVD表达；差

6、异无显著性（P＞0.05）；与对照组、固金方组比较，联合组MVD表达下降更多（P＜0.05）。3.3各组小鼠肿瘤组织中VEGFmRNA表达量的测定提取的总RNA经2%琼脂糖凝胶电泳后（每一样品均出现清晰的28S和18S带条）。各组肿瘤组织β-actinmRNAPCR产物电泳各带明暗、宽窄均匀一致，而各组肿瘤组织的VEGFmRNAPCR产物电泳则显色不均一。与模型组比，对照组、固金方组、联合组肿瘤组织VEGFmRNA表达量均明显下降（P＜0.05）；与对照组比较，固金方组VEGFmRNA表达量虽有下降的趋势，但未明显差异（P＞0.05）；

7、与对照组、固金方组比较，联合组VEGFmRNA表达量表达下降更多（P＜0.05）。各组小鼠肿瘤组织VEGFmRNA的表达见表2。表2RT-PCR-方法各组小鼠肿瘤组织VEGFmRNA的表达比较(略)4讨论转移是恶性肿瘤的基本生物学行为，也是临床肿瘤治疗失败的主要原因，目前认为，在肿瘤侵袭转移过程中，最关键的是肿瘤微血管和淋巴管的生成，相关研究正成为肿瘤研究的一个热点。血管内皮生长因子（VEGF）是促进肿瘤微血管生成的重要因子，同时也是一种血管通透性诱导因子，可增加微血管特别是毛细血管后静脉和小静脉的通透性，是已知最强的血管通透剂，其与肿

8、瘤新生血管的形成和血行转移的关系已得到了广泛证实，是肿瘤微血管生成和侵袭转移的关键因素。近期国内外文献报道［2］，多种细胞毒化疗药物在体内外实验中显示出抗血管生成活性，这些药物如环磷酰胺，紫杉醇、长春花碱等