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《风信子的组织培养和植株再生》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、西北大学学报(自然科学版)JournalofNorthwestUniversity(NaturalScienceEdition)2001年6月第31卷第3期Jun.2001Vol.31No.3风信子的组织培养和植株再生刘勇刚,徐子勤(西北大学陕西省生物技术重点实验室,陕西西安710069)摘要:以风信子鳞茎为外植体经灭菌后切成小块接入到风信子愈伤组织诱导培养基MS1上得到了愈伤组织,这些愈伤组织在含6BA,KT的MS分化培养基(MS2)上分化得到了芽,并在同样的培养基上有少量的根分化出来。当芽移至生根培养基上时可生成大量健
2、壮的根,从而得到完整植株。建立了风信子离体诱导再生植株的体系。使用的方法不需要进行低温处理,摆脱了因设备不足在组织培养生产中的限制。同时还对风信子的灭菌方法进行了研究,发现对风信子地下器官的表面灭菌应以75%乙醇浸泡5min后再以15%新洁尔灭浸泡10min,剥叶后用0.1%升汞浸泡15min,无菌水清洗5次效果最好。关键词:风信子;组织培养;鳞茎;植株再生中图分类号:Q94321文章编号:10002274X(2001)0320255204文献标识码:A风信子(HyacinthorientalisL.)是百合科风信子属的多
3、年生球根花卉植物。叶带状肥厚,花茎中空,花色繁多,是一种名贵的荷兰花卉。风信子性喜温暖、湿润、阳光充足的环境条件123,适宜我国大部分地区栽培。风信子的商品化生产也有报道,但多采用水培的技术4,5,生产效率较低,不能满足市场的需求。所以,利用组织培养技术对风信子进行生产有着较为广阔的前景,国内外已对风信子的组织培养进行了研究,并获得了再生植株。但是,这些研究所使用的外植体均为风信子的子房等生殖器官6,7。使用风信子的鳞茎作为外植体的组织培养也有报1.2无菌培养物的建立风信子的鳞茎带菌严重,通常的灭菌方法往往难以取得满意的效
4、果。给组织培养带来困难,我们采用了5种不同的灭菌方法对风信子鳞茎进行了表面灭菌,通过比较得到了适用于风信子鳞茎的灭菌方法。1.3愈伤组织的诱导风信子鳞茎灭菌后在无菌条件下切掉鳞片边缘,将中间部分切成5mm2的小块,以近轴面向上的方式接种于含不同激素配比的愈伤组织诱导培养基上,在温度为(25±2)℃,光强1200lx,每天12h光照的条件下进行培养。基本培养基为MS基本培养基,附加3%蔗糖,0.7%琼脂,pH5.7。培养基中考虑含2,42D,62BA,NAA3种激素。根据正交表L9(3)4设计9种培养基用于建立无菌培养系。3
5、周后统计愈伤组织生成情况。1.4愈伤组织分化的诱导将诱导的风信子愈伤组织切成2mm3的小块,接种于含不同激素配比的愈伤组织分化培养基上,比较不同分化培养基对风信子愈伤组织分化的作用。在(25±2)℃,光强1200lx,每天12h光照的条件下进行培养。基本培养基为MS培养基,附加3%道8,但需要10℃低温培养20～30d,由于对设备的要求给实际应用及快速繁殖带来了一定的限制。本实验成功地利用风信子的鳞茎作为外植体进行组织培养获得大量再生植株,摆脱了对设备的依赖,对风信子的商品化生产有着重要的意义。1材料与方法1.1植物名称、
6、来源风信子属百合科风信子属。球茎购于西安市植物园。收稿日期:2000207205基金项目:西北大学校内基金资助项目(98NW25H)作者简介:刘勇刚(19762),男,陕西安康人,西北大学硕士生,主要从事植物转基因方向的研究。蔗糖,0.7%琼脂,pH5.7。培养基中考虑含62BA,质土中,定时浇灌1ƒ2MS大量元素的营养液,在温室中成活后可移入大田。KT,NAA,3种激素。根据正交表L9(3)4设计9种培养基用于建立无菌培养系。3周后统计愈伤组织分化情况。1.5再生芽根的分化、壮苗培养和移栽待再生芽长至3cm左右时可将芽切
7、下转入生根培养基中生根,生根培养基为MS培养基含622结果与讨论2.1不同灭菌方法对风信子鳞茎灭菌的效果风信子鳞茎带霉菌较为严重,通常的灭菌方法往往难以取得满意的效果。因此,我们采用了5种不同的灭菌方法(见表1)对风信子鳞茎进行了灭菌,3周后通过比较染菌率及存活状态得到了适用于地下器官的灭菌方法。BA(0.5mgƒL)+KT(1.0mgƒL)+NAA1.0(mgƒL),附加3%蔗糖,0.7%琼脂,pH5.7。培养3周后统计生根率。生根后可移入壮苗培养基中壮苗。经过2周壮苗培养的再生苗经过3d的练苗,将植株根部的培养基洗净后
8、移栽于疏松、排水良好的砂表1不同灭菌方法对风信子鳞茎灭菌效果的影响Theeffectofdifferentsterilizemethodofsurfaceinhyacinthculture染菌率3编号灭菌方法存活状态123475%乙醇擦拭,0.1%升汞浸泡15min,无菌水清洗5次75%乙醇浸泡2min
