都匀白及的组织培养与植株再生研究

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1、都匀白及的组织培养与植株再生研究摘要:近年来由于都匀本地野生白及被大量采挖,数量越来越少。因此,建立白及人工繁殖的方法,通过组织培养建立白及植株再生体系,实现都匀本地中药产业现代化大量种苗的需求。本次实验通过植物组织培养技术,对白及进行培养获得再生苗,然后进行增殖培养,在不同的培养基上人工快速繁殖,以寻找都匀G及无性快繁体系的培养条件。结果表明:最佳丛芽增殖培养基为:1/2MS+6-BA3ml/L+KTlml/L+2,4-Dlml/L;最佳丛芽的生根培养基为:1/2MS+6-BA2ml/L+KT1.5ml/L+NAAlml/L。本文采集自网络,本站发布的论文均是

2、优质论文,供学习和研宄使用,文中立场与本网站无关,版权和著作权归原作者所有,如有不愿意被转载的情况,请通知我们删除己转载的信息,如果需耍分享,请保留本段说明。关键词:白及;中药材;组织培养;无性快繁;都匀白及(BletillastriataRchb.f.)?倮伎疲?Orchidaceae)白及属(BletillaRchb.f.)多年生草本植物。花的颜色主要有紫色、白色、黄色、红色和蓝色等,形奇特,可作盆景观赏[1]。白及别名白及、干根、连及草[2]。药用部分在中药里又称良姜、紫兰。李时珍在《本草纲目》中解释其名为:其根白色,连及而生,故曰白及。白及一般生长在灌木

3、丛下、草坡或路旁湿润处。主要分布于云南、陕西、四川、湖北、甘肃等省份,全国各地有少量栽培[3]。扁球形的假鱗茎,表面有环形纹带,富有粘性。白及常以其块茎根入药,具有补肺,收敛止血,消肿生肌等功效[4-5]。近年来,随着对白及的研究开发利用的不断深入,白及不仅具有广泛的药用价值和园林价值外,也广泛用于生产日用百货,例如化妆品、高级陶瓷制造、纺织、橡胶等都需要白及的参与[6]。因为白及的利用价值,市场对白及的需求量也渐渐增大,野生资源急剧减少[7]。白及种子十分微小,在自然条件下繁殖效率低,成本高。所以采用组织培养繁殖十分有必要[8-10]。白及的常规组织培养繁殖多

4、为利用无菌播种,然后直接长大成苗的技术路线。从优良单株为起点,保证基因一致性。通过此方法可实现全年均衡生产,更灵活地满足市场需求,缩短生产周期,降低成本,从而加快推进白及中药产业现代化进程[11]。本实验采用植物组织培养技术,对分布于贵州省都匀市地区的野生白及进行培养,建立无性快繁体系,为产业化生产大量种苗奠定基础。1材料与方法1.1材料白及(BletillastriataRchb.f.)于2015年9月采自都匀市绿茵湖社区高坡,凭证标本存黔南民族师范学院植物标本馆。1.2方法1.2.1消毒灭菌假鳞茎先用75%洒精浸泡5-10s,立即用无菌水冲洗10次左右。后用

5、0.1%HgC12消毒5min,立刻用无菌水漂洗3_8次,将消毒好的外殖体接种在已灭菌好的培养基上,移到培养室进行培养。1.2.2培养基与培养条件苗培养基:以MS培养基或1/2MS培养基为基本培养基,添加相关激素.•6-苄氨基嘌呤(6BA)、激动素(KT)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)。应用正交表L16(4)4设计不同因素水平配比的培养基配方;pH值5.8-6.4为宜。在超净台工作台中将进行灭菌处理好的G及外植体接入相应的培养基中,置于温度(20±3)°C,光照强度15001x,光照时间为10h/d的条件下进行培养。1.2.3诱导和继代培

6、养将灭菌处理好的外殖体接种到设计好的培养基上,每7d观察1次,并做好相关各项记录。1.2.4白及的生根培养将培养后的丛生芽分成单株,接种在生根培养基上,每7d观察1次,并作相应记录。2结果与分析本次实验通过正交设计,可得16个处理梯度。每个梯度做1L的培养基,平均分装在35个培养瓶中,每个培养瓶接种10个丛芽数,1周后观察并统计结果。2.1丛芽的增殖培养由于此次实验是在利用都匀G及的种子培养后的种苗为基础进行增殖和生根培养,所以利用正交设计后,进行个梯度的培养,在实验过程中,各个梯度都有增殖芽发生,但是统计下来,l/2IS+6-BA3ml/L+KTlml/L+

7、2,4-Dlml/L培养基培养出来的增殖芽数最多,而且芽长势优良,粗壮茂盛,叶嫩绿发亮。其余的培养基的苗多少出现不同程度的问题。因此决定采用l/2MS+6-BA3ml/L+KTlml/L+2,4-Dlml/L为增殖培养基进行后续的增殖培养,并且得到了大量的优质组培苗。2.2丛芽的生根培养在正交设计实验过程中,同时也得到Y苗的生根培养基。在本次试验过程中,由于出现了有苗在5d后长根的现象,而且有根长势正常,粗壮,长,不定根多的情况,因此在芽的生根培养时,直接采用这里面生根最多最好的培养基进行生根培养,即l/2MS+6-BA2ml/L+KTl.5ml/L+NAAlm

8、l/L。3讨论都匀白及在

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