survivin反义核酸影响a肺癌细胞增殖和凋亡的研究

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1、Survivin反义核酸影响A549肺癌细胞增殖和凋亡的研究编辑。作者：郑人源蒲铃玲刘桦潘克俭王玉明 【摘要】 目的研究Survivin反义寡核苷酸对A549细胞增殖和凋亡的影响。方法针对SurvivinmRNA序列设计了反义寡核甘酸，转染A549细胞，PT-PCR检测细胞中survivin基因的mRNA含量；Western印迹显示Survivin蛋白水平；以MTT法检测细胞增殖，TUNEL法检测细胞凋亡。结果Survivin反义寡核苷酸可明显降低A549１细胞中survivin的mRNA和蛋■白

2、水平。MTT比色法结果说明人Sur癜vivin反义寡核苷酸抑制A549细沤胞增殖，抑制率远高于无义寡核苷酸组和燥空白对照组。TUNEL法检测结果显示，反义寡核苷酸还显著增强A549细胞尜对抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性，在较榭低高三尖杉酯碱浓度下，反义寡核苷酸转适染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。结论survivin反义寡核苷酸有望应蝾用于肿瘤的辅助治疗之中。【关键词】● Survivin；反义寡核苷酸；A驯549细胞；增殖；凋亡Abstra船ct：ObjectiveToinvestigate

3、theeffectof擞survivinantisenseo恧ligonucleotidetoth诮eproliferationanda瓷poptosisofA549Desi於11/11gnedahumansurvivin榧antisenseoligonucl俩eotidesandtransfec占teditintoA549cells哺.Theexpressionofsu衩rvivinmRNAandthelevelofprotEinwerede腹tectedbyRT-PCRandW戋estern

4、blotmethodsMTTassaywasusedtode移tectthecellproliferationandtheapopto轫ticratesweremeasur苤edbyTUNELThequanti丫tyofsurvivinmRNAan鄢dthelevelofprotEIn摘weredecreasedbythi爿santisenseantisens际eoligonucleotidesh桨adainhibitoryrateofproliferationwhic滁hwasmuchhi

5、gherthan螬therateoftheapopto昀ticrateobtainedbytransfectingcellswi兢thantisenseoligonucleotidewashighert鹌hantherateofcontro橥lwhichallexposedto克thelowconcentratio渌nofTheexperimentre漯sultsindicatethata缍ntisenseoligonucle黻otidecandeserveasa吉napproachtosub

6、serv≡ienttumortherapyinfuture.Keywords：S赳urvivin;antisenseo抢ligonucleotide;A54咀9cell;proliferatioヂn;apoptosisSurviv且in属于凋亡蛋白抑制因子(inhib瓴itorofapoptosispro盂tein,IAP)家族，具有强大的抗题11/11细胞凋亡功能，通常以二聚体形式存在，⒈与Caspase二聚体以均称对等方式瓢结合，从而抑制后者活性，进而抑制了细铅胞凋亡［1］；也可活化CDK4

7、，使细募胞进入增殖周期，导致大量细胞无限制生语长［2］。在正常生理状态下，Surv氧ivin不在终末分化的成人组织表达。款但在绝大多数癌组织中表达，而且随着癌扭前细胞向癌细胞的转化，其表达逐渐升高奋［3，4］。肿瘤是否发生转移与预后密吕切相关。正常细胞脱离原来的组织时会启栾动凋亡过程，导致细胞死亡。研究认为，在恶性肿瘤中，脱落的癌细胞因为Sur轻vivin对凋亡的抑制而受到了保护，凳得以继续存活并分裂增殖，进而进行远离芎部位的转移，形成肿瘤。从而使病人预后ω不良［5］。因此认为Survivin舀

8、的存在代表着正常细胞恶性转化的细胞生物学行为特征。本研究针对SurvivinmRNA序列设计了反义寡核苷酸，往抑制Survivin蛋白的合成，验证潲了Survivin反义寡核苷酸能抑制镭A549细胞增殖，提高细胞对抗肿瘤药躁物高三尖杉酯碱的敏感性。1材料与方仔法试剂和细胞株A549肺癌细胞株锩由四川大学生命科学院细胞生物学教研室鞲赠送。脂质体Lipofectamin钕eTM2000购自Invitroge怨n公司；MTT(噻唑蓝)购自Sant錾aCruz公司；兔抗Survivin