反义hTERT体外诱导肺癌细胞凋亡的研究

《反义hTERT体外诱导肺癌细胞凋亡的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、反义hTERT体外诱导肺癌细胞凋亡的研究作者：尹为华，马雅，李若馨，孙来保【摘要】目的研究反义hTERT基因体外诱导肺癌细胞凋亡。方法体外通过SuperFect转染正、反义hTERT真核表达载体至人肺腺癌细胞株GLC-82，再经过G418及PCR筛选鉴定获得分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞GLC-82-s和GLC-82-as。然后采用MTT法、双层软琼脂克隆形成实验、流式细胞术观察和分析了反义hTERT对肺癌细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡；同时我们还运用实时荧光定量RT-PCR技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERTmRNA的表达情况及端粒酶的活

2、性进行了检测。结果当各组细胞传至第25代后，与GLC-82、GLC-82-s比较，GLC-82-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低，同时伴有凋亡率的显著增加；与空白对照、正义hTERT组相比，反义hTERT能显著地降低GLC-82细胞内源性hTERTmRNA的表达和下调端粒酶活性。结论反义hTERT体外确实能明显地诱导肺癌细胞的凋亡及抑制瘤细胞的生长增殖能力。【关键词】反义hTERT；肺癌；凋亡；细胞增殖；实时荧光定量RT-PCR【Abstract】ObjectiveTostudythecellapoptosisoflungcancerinducedbyantisenseh

3、TERTinvitro.MethodsThesenseandantisensehTERTeukaryoticexpressionvectorsweretransfectedintolungcancercelllineGLC-8usingtheSuperFecttransfectionreagent(Qiagen)accordingtothemanufacturer’sinstructions，thentheGLC-82-sandGLC-82-asofG418-resistantcolonieswereobtainedwithG41andidentifiedforthepresenceof

4、hTERTinsertbyPCRwithTand/BGHreverseprimers.Afterthat，MTTcellularproliferationassay，softagarcolonyformationassayandflowcytometrywereadoptedtoanalyzeiftheproliferationcapacityoflungcancercellwereeffectedinvitroandthetumorcellscanbeinducedtoapoptosisbyantisensehTERT.Meanwhile，wehavealsodetectedtheen

5、dogenoushTERTmRNAexpressionandtelomeraseactivitybyquantitativereal-timeRT-PCRandTRAP-silverstainingassayineachgroupcells.ResultsAfterpassagesofthreegroupcells，a-daycellgrowthcurveandthenumbers(size)ofsoftagarcolonyformationshowedtheproliferationratesandtheanchorage-independentgrowthabilityinGLC-8

6、2-asweresignificantlydecreasedandreduced，comparedwithGLC-8andGLC-82-s.ButtherewasasignificantincreaseinapoptosispercentageofGLC-82-asbyflowcytometry，comparedwithcontrolgroups.AntisensehTERTcanremarkablyreducetheendogenoushTERTmRNAexpression(PConclusionAntisensehTERTcanobviouslyinducecellapoptosis

7、andinhibitgrowth/proliferationoflungcancercellinvitro.【Keywords】antisensehTERT；lungcancer；apoptosis；cellproliferation；quantitativereal-timeRT-PCR端粒酶是一种RNA依赖的DNA多聚酶，其主要功能是补充合成端粒DNA；目前已证实端粒酶至少由两种主要成分构成：一种为从头合成端粒DNA提供模板的人