gsk-3β介导地塞米松诱导胰岛β细胞凋亡的体外研究

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1、中图分类号：R363.21论文编号：HBLG2015-083UDC：密级：公开硕士学位论文GSK-3β介导地塞米松诱导胰岛β细胞凋亡的体外研究作者姓名：郭彬学科名称：基础医学研究方向：糖尿病的发病机制学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年4月23日申请学位类别：医学硕士导师姓名：门秀丽教授单位：华北理工大学基础医学院论文评阅人：匿名单位：匿名单位：论文答辩日期：2015年6月7日答辩委员会主席：崔慧先教授关键词：糖原合成酶激酶3β；氧化应激；地塞米松；氯化锂；β细胞凋亡唐山华北理工大学2015年6月TheSt

2、udyoftheRoleofGSK-3βinDexamethasone-InducedPancreaticβCellApoptosisinVitroDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyGuoBin(BasicMedicine)Supervisor:ProfessorMenXiuliJune,2015独

3、创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部

4、分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。摘要目的应用地塞米松（DEX）诱导的大鼠胰岛INS-1细胞凋亡模型。探讨糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）在糖皮质激素诱导胰岛β细胞凋亡过程中的作用及可能的分子机制，为进一步阐明类固醇性糖尿病的发生机制提供实验依据。方法1选用大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞作为研究对象，首先应用MTT法检测不同浓度（0、0.01、0.1、1μM）DEX作用细胞1，2，3d时细胞增殖情况，确定DEX的最佳作用浓度和作用时间；2不同浓度DEX作用INS-1细胞48h后通过台盼蓝染色、Tune

5、l染色和流式细胞术检测细胞死亡情况；3免疫荧光染色方法观察DEX诱导后，INS-1细胞中GSK-3β和p-GSK-3β(Ser9)的蛋白表达；40.1μMDEX处理INS-1细胞48h后，采用Real-timePCR方法检测SOD、iNOS、Nox4、NADPHoxidase(p47phox)和GSK-3βmRNA的表达；采用western-blot方法检测GSK-3β、p-GSK-3β(Ser9)、SOD、iNOS和Nox4蛋白的表达；采用ROS试剂盒、Griess法检测ROS及NO的释放水平。5观察加入GSK-3β抑制剂L

6、iCl后上述各项指标变化。结果DEX（0、0.01、0.1、1μM）作用INS-1细胞1--3天，随着DEX剂量和时间增加，INS-1细胞存活率下降；Tunel染色、流式细胞术证实0.1μΜ浓度的DEX作用INS-1细胞48h时，细胞出现明显的凋亡现象，并且与对照组相比，细胞培养上清中的ROS、NO水平升高，Nox4、p47phox、iNOSmRNA表达上调，SODmRNA表达下调；iNOS、Nox4蛋白表达水平升高，SOD、p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达明显降低，总GSK-3β蛋白表达无明显变化。加入LiCl后DEX诱

7、导的细胞凋亡率明显下降，ROS、NO水平降低，Nox4、p47phox、iNOSmRNA表达及iNOS、Nox4蛋白表达均明显下调，p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达上调，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论地塞米松可诱导大鼠胰岛β细胞凋亡，其机制可能与氧化应激反应增强、GSK-3β活性增加有关；抑制GSK-3β活性在一定程度上可减轻地塞米松诱导的细胞凋亡，其机制可能与减轻氧化应激反应有关。-I-图25幅；表11个；参122篇。关键词：糖原合成酶激酶3β；氧化应激；地塞米松；氯化锂；β细胞凋亡分类号：R363.21-I

8、I-AbstractObjectivesThepresentstudyuseddexamethasone(DEX)asapoptosisinducertotreatratpancreaticβ-celllineINS-1.ToexploretheeffectofGlycoge