大豆苷元对神经母细胞瘤细胞增殖的抑制作用.doc

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1、大豆苷元对神经母细胞瘤细胞增殖的抑制作用作者：徐鹰朱恒英，李舒梅，赖日勇，唐丹【摘要】目的探讨大豆苷元对神经母细胞瘤SH—SY5Y细胞凋亡和增殖的影响。方法采用细胞生长抑制实验、流式细胞仪检测等方法观察SH-SY5Y细胞的形态变化、细胞凋亡率及细胞周期变化。结果10.0〜80.0Mg/m1的大豆苷元明显抑制细胞的增殖，且有剂量依赖性；与对照组相比，大豆苷元处理24h后，各组SH_SY5Y细胞均出现亚二倍体峰，细胞凋亡率与大豆苷元呈剂量依赖性。结论大豆苷元可诱导神经母细胞瘤SH—SY5Y细胞凋亡，对SH_SY5Y细胞增殖有明显的抑制作用。【关键词】神经母细胞瘤大豆苷元增殖A

2、bstract：ObjectiveToobservetheeffectofDaidzeinonneuroblastoma.MethodsTheproliferationwastestedbyMTTassay.Ce1lcycleandapoptosisrateweredeterminedbyf1owcytometry.Results10.0〜80.Oug/mlofDaidzeincouldsignificantlyinhibitpro1iferationofSH—SY5Ycell,DaidzeinextractcouldinduceapoptosisofSH—SY5Ycel

3、landtherateofapoptosiswasincreasedwiththeincreaseofthedrugconcentration.ConclusionDaidzeinextractcaninduceapoptosisandinhibitproliferationofSH-SY5Ycell.Keywords：Neuroblastoma；Daidzein；Proliferation神经母细胞瘤是儿童较常见的恶性肿瘤，发病率占儿童恶性肿瘤的第3位，与儿童期常见的其他恶性肿瘤相比，化疗效果差，严重威胁儿童的生命安全。因此，寻找新的治疗药物成为人们十分关切的问题。近年

4、来，多种研究发现大豆异黄酮对多种癌症具有抑制和治疗作用［1］，但对大豆异黄酮抗癌作用的研究主要集中在乳腺癌和前列腺癌等激素依赖性肿瘤，关于其对儿童神经母细胞瘤生长作用的影响研究报道很少。因此，我们于体外观察了大豆苷元对NB细胞株SH—SY5Y生长的影响，以期为进一步研究其作用机制及临床应用提供实验室依据。1材料与方法1.1材料SH—SY5Y细胞株为贵阳医学院分子生物学重点实验室赠送。大豆苷元为陕西赛德高科生物股份有限公司馈赠，纯度为98%。RPMI—1640为Gibeo公司生产，小牛血清为杭州四季青公司生产，二甲基哑砜和噻唑蓝为Sigma公司生产。BDFACSCa1ibu

5、r流式细胞仪为美国BD公司生产；MK3型酶标仪和3111型C02培养箱均为美国Thermo公司生产。方法1.2.1细胞培养与接种SH—SY5Y细胞株培养在含5%小牛血清的RPMI—1640培养基中，CO2培养箱内，恒温37°C。当细胞长满时，用0.25%胰蛋白酶消化，收集细胞，1000r/min，离心5min，PBS洗2次，以1〜2X104的浓度接种于96孔板内，每孔体积为180ml。1.2.2受试药物的处理将大豆苷元溶解在DMS0中，配成100mg/m1的储存液，一20°C保存。使用时用完全培养基将其稀释成10mg/m1的工作液，用直径为0.22ym的微孔滤膜过滤除菌置

6、于4°C保存，并进一步用完全培养基分别稀释成所需的不同浓度，待细胞接种24h后分别加入不同浓度的受试药，每孔20U1，使其终浓度分别为0.1，1.0，10.0，20.0，40.0，60.0,80.0，100.0，150.0mg/m1。每个浓度为4个孔，同时用含DMSO的完全培养基和空白一起作对照。MTT用PBS配成5.0mg/ml的溶液，磁力搅拌器搅拌30min，直径为0.22Pm的微孔滤膜过滤除菌后4°C保存，2周内有效。1.2.3细胞生长抑制效应的测定采用MTT比色法［2］。细胞接种24h后加受试药，之后每隔24h用MTT比色法测定光密度值，即对应的活细胞数。具体操作

7、如下：加受试药后每隔一定时间加MTT溶液10u1，37°C继续培养4h，终止培养后小心吸去孔内培养上清液，每孔加入150p1DMSO，振荡器振荡5〜10min使结晶物充分溶解。选择490nm波长在酶联免疫检测仪上测各孔的光吸收值，记录大豆苷元作用于SH_SY5Y细胞的浓度效应数据和时间效应数据，用下列公式计算药物对细胞生长的抑制率，并绘制效应曲线。抑制率=对照孔测定的平均0D值一加药组测定的平均0D值照孔测定的平均0D值X100%表1大豆苷元对SH-SY5Y细胞增殖抑制率的影响与对照组比较，★?<;n=31.2.1流式细胞仪检