杂色鲍三个免疫相关基因克隆及表达分析

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1、摘要杂色鲍(麒l疗D凰d如P坶f∞如力是我国南方海域水产养殖业中重要的经济贝类之一，但自从上世纪90年代以来，养殖杂色鲍陆续暴发大规模病害，成活率急剧下降，给养殖业造成了巨大的经济损失，严重影响了杂色鲍养殖业的健康可持续发展。引起杂色鲍大规模死亡的原因是多方面的，最主要的是养殖环境恶化、杂色鲍种质衰退以及抗病力下降。遗传改良和培育抗病优良品种、开发免疫增强剂等是解决目前杂色鲍养殖业面临病害问题的必然选择，而所有这些措施的基础都有赖于对杂色鲍免疫防御机制有深刻的了解。本研究对杂色鲍天然免疫系统中3个重要的功能基因进行克隆及表达分析，旨在为深入了解鲍免疫防御分子机制提供新资料。本研究的主要结

2、果如下：1．克隆获得了GABAA受体相关蛋白(GABAAreceptor-associatedprotein，GABARAP)、表皮生长因子受体(Epidemalgrowthfactorreceptor，EGFR)和功能未预测受体(Unpredictedreceptor’UPR)3个基因的全长cDNA，分别命名为SaGABARAP、SaEGFR和SaUPR。SaGABARAP基因cDNA全长为963bp，354bp的ORF编码117个氨基酸，有一个自吞噬蛋白At98结构域。SaEGFR基因cDNA全长为2620bp，2373bp的ORF编码790个氨基酸，有两个EGF受体L结构域。SaU

3、PR基因cDNA全长为1779bp，164lbp的OI江编码546个氨基酸，有一个清道夫受体半胱氨酸丰富结构域、两个表皮生长因子结构域和一个透明带结构域，推测可能是个膜受体。2．克隆获得了SaGABA凡～P和SaUPR两个基因的基因组DNA。SaGABARAP基因组DNA全长为4352bp，包含3个外显子和2个内含子。SaUPR基因组DNA全长为7517bp，包含7个外显子和6内含子。3．揭示了SaGABARAP、SaEGFR和SaUPR在杂色鲍各组织和胚胎幼体发育时期的表达情况。这三个基因在检测的各组织和胚胎幼体发育时期均有表达，而且都在肝胰脏中表达水平最高，SaGABARAP在原肠胚

4、中的表达水平最高，SaEGFR和SaUPR在囊胚中的表达水平最高。所有这些暗示着这三个基因可能在杂色鲍生命过程中发挥着广泛而重要的作用。4．揭示了杂色鲍在溶藻弧菌感染后血细胞和肝胰脏中三个基因的表达情况。弧菌感染后，SaGABARAP基因在血细胞和肝胰脏中的表达量均发生显著提高，SaEGFR基因在血细胞和肝胰脏中的表达水平均发生极显著提高，而SaUPR基因在血细胞中的表达水平发生显著提高，但在肝胰脏中并没有显著提高。所有这些暗示着这三个基因可能在杂色鲍免疫防御体系中发挥着重要作用，它们表达量上升对于鲍机体清除病原菌感染可能是有益的。关键词：杂色鲍；SaGABARAP；SaEGFR；SaU

5、PR；免疫防御ⅡAbstractSmaIlabalone胁矗b凰反VP坶fcD，DrisoneofthemostcommercialIyimportantmolluscsforaquacuItureinChinasouthemseaarea．Butsincel990s，abaloneaquaculturchasbeenunde唱oingla唱e-scaIediseaseand10wrateofgro、vthandsurviVal．SoithasbroughtmassiVeeconomiclossest0aquaculture，andseVerelya仃bctedthehealthyand

6、continuabledeVeIopmentofsmallabaloneaquaculture．ThereareseVeralaspectsthattriggersmallabalonemassmonali吼butthemoStimponantaretheworsesuiViValenVironment，smallabalonestraindegenerationanddecliningdiseaseresistance．Therearenecessa叮waystosolVecurrentdiseaseproblemsofsmallabaIoneaquaculture，suchasgen

7、eticimproVementstrain，breedingdisease—resistantabaloneanddeVelopmentimmuni够boostingagents，butthefoundationofallisdependentonthedeepunderstandingofsmallabaloneimmunedefensemechanism．Thisstudyfocusedoncloningandexpressio