黄芩苷抑制肝癌hepg

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1、黄芩苷抑制肝癌HepG：张学武崔长旭陈丽艳全吉淑【摘要】　　目的观察黄芩苷对肝癌HepG-2细胞增殖的影响。方法采用MTT比色法观察黄芩苷抑制肝癌HepG-2细胞增殖；采用流式细胞仪检测黄芩苷对HepG-2细胞周期分布的影响。结果黄芩苷可抑制肝癌HepG-2细胞增殖，其作用具有时间和浓度依赖性；黄芩苷可诱导细胞凋亡，同时改变细胞周期分布，多数细胞阻滞于S期，与对照组比较，细胞凋亡率差异有显著性。结论黄芩苷可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡，改变细胞周期分布，从而抑制细胞增殖。【关键词】黄芩苷细胞周期细胞凋亡　　A

2、bstract:ObjectiveToinvestigatetheinhibitionofbaicalinonproliferationhepatomaHepG-2cells.MethodsMTTassayinetheeffectofbaicalinontheproliferationofHepG-2cellandfloetrye-and-concentrationdependentmanner.Baicalincouldalsoinduceapoptosis,theSphasea公司；RPMI1640培养基

3、购自美国GIBCO公司；小牛血清购自北京华美生物工程公司；胰蛋白酶购自美国DIFCO公司；鼠抗bcl-2、p53单克隆抗体购自福州迈新生物有限公司。　　1.3仪器OLYMPUS倒置显微镜购自日本；RT-2100型酶标仪购自美国；FACSCalibur流式细胞仪购自美国；JEM-1200EX透射电子显微镜购自日本；PD-2000真彩色病理细胞图像分析仪购自北京天地百年科技公司。　　2方法　　2.1HepG-2细胞培养肝癌HepG-2细胞贴壁生长，培养于含10%灭活小牛血清，含100U/ml青霉素及100U/ml

4、链霉素的RPMI1640培养液中，置37℃、相对湿度90%、5%CO2孵箱内培养。　　2.2HepG-2细胞形态的变化取对数生长期HepG-2细胞按每瓶1×105个细胞接种于96孔细胞培养板中，24h后换液，加入含不同浓度（25，50，100μg/ml）黄芩苷的10%新生小牛血清RPMI1640培养液200μl，另设终浓度为25μg/ml5-Fu的阳性对照组和不加药物的阴性对照组。置5%CO2孵箱内培养24,48，72h。每天在倒置显微镜下观察细胞生长状态，48h时进行常规HE染色。　　2.3MTT比色实验取

5、对数生长期的HepG-2细胞按每孔1×105个细胞接种于96孔板中，每孔体积200μl。24h后换液，黄芩苷组加入黄芩苷使其终浓度分别为25，50，100μg/ml，另设终浓度为25μg/ml的5-Fu阳性对照组和不加药物的阴性对照组以及不接种细胞的空白对照组。分别培养24，48，72h，每个浓度每个时点均设4个复孔。于终止前4h，每孔加入5mg/mlMTT溶液20μl，继续孵育4h后弃去上清液，加入150μlDMSO，轻轻振荡10min，使结晶物完全溶解，于490nm波长处在荧光酶联分析仪上测光吸收值(A值

6、)，计算抑制率(IR)。　　IR(%)=(对照孔A值-实验孔A值)/对照孔A值×100%　　2.4流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布对照组和50μg/ml黄芩苷组细胞培养48h后，收集各组细胞悬液1ml，浓度约为106个/ml，离心（1000r/min,5min），弃掉培养液，70%冷乙醇固定，4℃PI暗染30min，流式细胞仪检测，采用ModfitLT3.0软件对各组样本进行DNA含量及细胞周期分析。　　2.5统计方法应用SPSS11.5统计软件进行相关性分析和方差分析，数据采用±s表示。　　3.1.2M

7、TT比色实验不同浓度处理组分别培养24，48h，黄芩苷对HepG-2细胞生长有抑制作用，且其抑制作用具有时间和浓度依赖性。随着时间的延长和药物浓度的增加，细胞抑制效果越明显，药物对肿瘤细胞生长有量-效、时-效关系。当黄芩苷浓度为50μg/ml作用时间为48h时，对HepG-2细胞的抑制率为51.241%，接近半数抑制浓度(IC50)。结果见表1~2。　　表1黄芩苷对HepG-2细胞生长的影响（略）　　表2黄芩苷对HepG-2细胞生长抑制率（略）　　与同剂量组比较，*P<0.01；与同时间组比较，ΔP&l

8、t;0.01　　3.2黄芩苷对HepG-2细胞DNA含量的影响50μg/ml黄芩苷作用于HepG-2细胞48h后，经流式细胞仪检测（图1）可以看出加药组细胞出现明显的细胞凋亡峰，其凋亡率为27.01%，与对照组细胞的凋亡率5.47%相比差异有显著性（P＜0.01）。结果见表3。　　图1黄芩苷对HepG-2细胞DNA含量的影响(FCM)（略）　　3.3黄芩苷对HepG-2细胞周期的作用经流式细胞仪分析