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1、正交实验优选黄芪甲苷的提取工艺研宄来丽丽李剑杨洁红张宇燕(通讯作者)周惠芬(浙江中医药大学浙江杭州310053)【摘要】目的正交实验法优化提取黄芪中黄芪甲苷。方法采用紫外分光光度法建立黄芪甲苷的含量测定方法；采用L9(34)正交表，考察醇浓度，提取时间，次数对黄芪甲苷提取率的影响。结果正交实验结果表明用8倍量80%乙醇提取2次，每次2h为最佳工艺。结论木试验优化了黄芪甲昔的提取工艺，可为含黄芪药材的制剂工艺优化提取提供参考。【关键词】黄芪甲苷正交实验优化提取工艺【中图分类号】R284【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)23-0079-02黄芪
2、为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，異补气固表，利尿托毒,排浓，敛疮生肌的作用，在临床具有广泛的应用。黄芪中含有黄芪甲苷、黄芪多糖和多种氨基酸等成分。黄芪甲苷为黄芪的主要活性成分之一，属三萜皂苷类,常作为指标性成分用于黄芪药材的质量监控。现代药理研究表明，黄芪甲苷具有改善白细胞变形能力、改善心肌收缩及舒张功能、促进胰岛素分泌和清除自由基等药理作用。木试验以黄芪甲苷为指标，用紫外分光光度法建立黄芪甲苷含量测定方法，并以黄芪甲苷的得率为评价指标，用正交试验进行黄芪醇提工艺的研宄，优化黄芪提取工艺。1仪器与试剂TU-1900双光束紫外可见分光光度计:北京普析通用仪器有
3、限责任公司；黄芪药材：购自北京同仁堂(毫州)饮片有限责任公司，批号：20110307；黄芪甲苷对照品(110781-200613):中国药品牛.物制品检定所。2方法与结果2.1对照品溶液的制备：精密称定黄芪甲苷对照品2.8mg,加60%甲醇溶解，并定容至10ml,作为浓度为0.28mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液。2.2供试品溶液的制备：取黄芪药材10g,加75%乙醇30ml,冋流2次，每次1.5h，滤液定容至20ml,加2°%KOH20ml冋流lh,滤液挥去乙醇，调至中性，调整至100ml,用乙酸乙酯提取2次（120、100ml）,取水液用水饱和正丁醇萃取3次（1
4、50、120ml）,正丁醇液用水洗涤2次，正丁醇液冋收并挥干，残渣加甲醇使溶解，并定容至5ml，作为供试品溶液。2.3检测波长的选择：精密吸取黄芪甲苷对照品溶液lml、供试品溶液0.5ml,分别置25ml具塞磨U试管中，水浴挥干溶剂，分别加入5%香草醛冰醋酸液0.20ml，高氯酸0.80ml,密塞，于7（TC水浴恒温加热20min,取出后用流水冷却，加冰醋酸5ml，摇匀。以相应的试剂为空白，于300〜800nm波长处扫描，结果在585nm处有最大吸收。2.4黄芪甲苷标准曲线的制备:精密吸取黄芪甲苷对照品溶液0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35
5、、0.40ml，置25ml具塞磨口试管中，水浴挥干溶剂，加5%香草醛冰醋酸液0.2ml，高氯酸0.8ml，70°C水浴恒温20min，取出用流水冷却，加冰醋酸5ml,摇匀。以相应的试剂为空白，在585nm处测定其吸光度Abs。以黄芪甲苷对照品液浓度（ug/ml）为横坐标，相应的吸收度（Abs）为纵坐标，进行线性冋归分析，得到黄芪甲苷的标准曲线为y=0.044x+0.0162（r=0.9996,线性范围7.000〜18.667ug/ml）。2.5精密度试验：按标准曲线项下方法测定黄芪甲苷对照品溶液（11.667ug/ml）的吸光度（Abs）,并计算其相对标准偏差RS
6、D为0.40%。2.6稳定性试验：取供试品溶液30ul,于显色后0、0.5、1、2、3、4、6h测定其吸收度，计算其RSD为0.83%,表明供试液在6h内基本稳定。2.7重复性试验：去5份同一批药材，按照标准曲线方法制备、测定供试品溶液的吸光度，依标准曲线计算黄芪甲苷的含量，结果计算其RSD为1.15%。2.8加样冋收率实验:精密吸取已知含量的药材，加入黄芪甲苷对照品，按供试品制备方法配制供试品溶液，按标准曲线项下方法测定吸光度（Abs）,计算其平均冋收率为97.06%,RSD为1.21%。2.9正交提取工艺研究：采用L9(34)正交表，以黄芪甲苷的含量为评价指标
7、，考察乙醇浓度、溶媒用量、提取时间和提取次数对提取效果的影响。因素与水平安排见表1。分别称取黄芪10g,按表1方法提取制备正交供试液，根据标准曲线测定各供试液中黄芪甲苻的含量，分析确定黄芪的最佳工艺条件。正交实验结果及方差分析见表2、表3。表1影响黄芪甲苷提取效果的四因素三水平表查方差分析表，F(0.05)(2,9)=4.26,F(0.01)(2/9)=8.02结果分析：以黄芪甲苻的含量进行评价，贝U:影响因素程度依次为D>A>C>BA因素:极显著性因素，HUI>；I>IIB因素：无显著性影响，C因素:显著性因素，且Ill>I&g
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