曲古菌素a和atra合用对plzfrarα转基因阳性发病鼠骨髓细胞的诱导分化作用论文

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1、曲古菌素A和ATRA合用对PLZFRARα转基因阳性发病鼠骨髓细胞的诱导分化作用论文陈思宇，董颖，陈丽娟，张龙，王龙，陈强，王振义【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectofalltransretinoicacid(ATRA)inbiioniceotertoexpressinmyeloidcellsofmice.Thegenotypeandphenotypemunofluorescence,morphologyofbonemarroarroiacellsorphologysastaining;cellcycledistributionandexpressi

2、onofcellmembranesurfacedifferentiationrelatedantigens(suchasCD11b,CD117andGr1)inedbyfloetryassay.ExpressionofPLZFmunofluorescence.Functionaldifferentiation(NBT)reductionability.RESULTS:SomehCGPLZFRARαtransgenicmicedevelopedleukemiaresemblinghumanchronicmyeloidleukemia.Aftertreatedarroiacellspre

3、sentedmorphologicallysomefeaturesofdifferentiatedcells;thecellgroedependentmanner.TheproportionofcellsinSphageentedia,promyelocytic,acute【摘要】目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatinA,TSA)和ATRA对PLZFRARα转基因发病鼠骨髓细胞的作用.方法：分子克隆技术构建hCGPLZFRARα转基因构件.显微注射建立仅在髓系细胞中表达PLZFRARα的转基因小鼠模型.DNAPCR，Southernblot.free

4、lsa染色观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞周期、细胞表面分化抗原CD11b和CD117等的表达，荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达，硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验观察细胞功能分化情况.结果：TSA(30μg/L)联合ATRA(1μmol/L)使发病鼠骨髓细胞核质比缩小，幼稚细胞比例减少，细胞生长增殖受抑，S期细胞减少，PLZF蛋白的表达呈局部聚集的趋势，但NBF还原试验变化尚不明显.结论：组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA联合ATRA可使PLZFRARα转基因发病鼠骨髓细胞发生部分分化.【关键词】PLZF；维甲酸；转基因；组蛋白去乙酰化酶；分化；白血病,早幼粒,急性0引言在诱导肿瘤细胞分化方面

5、，急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)为人们提供了一个理想的研究模型［1］.约95%APL患者的白血病细胞中携带有非随机染色体易位t(15;17)(q22;q21)，形成PMLRARα融合基因，成为APL特征性的分子标志.少数变异型APL患者携带t(11;17)(q23;q21)，表达PLZFRARα融合蛋白.PMLRARα和PLZFRARα两种融合基因的产物均能阻断维甲酸信号传导通路，但二者对全反式维甲酸(alltransretinoicacid,ATRA)的反应却表现出明显不同，即表达PMLRARα的APL患者对ATRA敏感，而

6、表达PLZFRARα的患者对ATRA不敏感.ATRA和组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histonedeacetylaseinhibitor,HDACi）曲古菌素A(trichostatinA,TSA)联合治疗可以诱导PLZFRARα阳性APL细胞发生分化［1］.我们利用建立的PLZFRARα融和基因在小鼠髓系细胞特异表达的hCGPLZFRARα转基因鼠(transgenicmice,TM)模型，在生物水平研究了TSA联合维甲酸对PLZFRARα阳性白血病细胞的诱导分化作用.1材料和方法1.1材料TM的建立参照文献［2］.本研究所已经构建了hCGPLZFRARα载体，将此质粒转化大肠

7、杆菌，氨苄青霉素LB平板筛选出阳性克隆，获得的质粒经酶切及测序验证后，用Qiagene纯化柱大量提取质粒，经SalI,PvuI酶切完成质粒线形化，纯化得到转基因构件.将转基因构件显微注射到受精卵雄原核，植入假孕母鼠，小鼠出生后2a)溶解于无水乙醇，配成1g/L储存液,用时以培养液稀释成10mg/L工作液.ATRA(Sigma)溶解于无水乙醇,配成10mmol/L储存液,用时以培养液稀释成100μmol/L工作