曲古菌素a和atra合用对plzfrarα转基因阳性发病鼠骨髓细胞的诱导分化作用

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1、曲古菌素A和ATRA合用对PLZFRARα转基因阳性发病鼠骨髓细胞的诱导分化作用　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectofalltransretinoicacid(ATRA)inbiioniceotertoexpressinmyeloidcellsofmice.Thegenotypeandphenotypemunofluorescence,morphologyofbonemarroarroiacellsorphologysastaining;cellcycledistributionandexpressionofce

2、llmembranesurfacedifferentiationrelatedantigens(suchasCD11b,CD117andGr1)inedbyfloetryassay.ExpressionofPLZFmunofluorescence.Functionaldifferentiation(NBT)reductionability.RESULTS:SomehCGPLZFRARαtransgenicmicedevelopedleukemiaresemblinghumanchronicmyeloidleukemia.Aftertreatedarr

3、oiacellspresentedmorphologicallysomefeaturesofdifferentiatedcells;thecellgroedependentmanner.TheproportionofcellsinSphageentedia,promyelocytic,acute　　【摘要】目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatinA,TSA)和ATRA对PLZFRARα转基因发病鼠骨髓细胞的作用.方法：分子克隆技术构建hCGPLZFRARα转基因构件.显微注射建立仅在髓系细胞中表达PLZFRARα的转基因

4、小鼠模型.DNAPCR，Southernblot，RTPCR，免疫荧光，血象，骨髓象，脾细胞形态，病理等检测分析基因整合表达及发病情况.取PLZFRARα转基因发病鼠骨髓细胞体外培养，经TSA和ATRA作用一段时间后，LRARα融合基因，成为APL特征性的分子标志.少数变异型APL患者携带t(11;17)(q23;q21)，表达PLZFRARα融合蛋白.PMLRARα和PLZFRARα两种融合基因的产物均能阻断维甲酸信号传导通路，但二者对全反式维甲酸(alltransretinoicacid,ATRA)的反应却表现出明显不同，即表达PMLR

5、ARα的APL患者对ATRA敏感，而表达PLZFRARα的患者对ATRA不敏感.ATRA和组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histonedeacetylaseinhibitor,HDACi）曲古菌素A(trichostatinA,TSA)联合治疗可以诱导PLZFRARα阳性APL细胞发生分化［1］.我们利用建立的PLZFRARα融和基因在小鼠髓系细胞特异表达的hCGPLZFRARα转基因鼠(transgenicmice,TM)模型，在生物水平研究了TSA联合维甲酸对PLZFRARα阳性白血病细胞的诱导分化作用.　　1材料和方法　　1.1材料TM的建立参照

6、文献［2］.本研究所已经构建了hCGPLZFRARα载体，将此质粒转化大肠杆菌，氨苄青霉素LB平板筛选出阳性克隆，获得的质粒经酶切及测序验证后，用Qiagene纯化柱大量提取质粒，经SalI,PvuI酶切完成质粒线形化，纯化得到转基因构件.将转基因构件显微注射到受精卵雄原核，植入假孕母鼠，小鼠出生后2a)溶解于无水乙醇，配成1g/L储存液,用时以培养液稀释成10mg/L工作液.ATRA(Sigma)溶解于无水乙醇,配成10mmol/L储存液,用时以培养液稀释成100μmol/L工作液.　　1.2方法　　1.2.1基因整合检测图1转基因鼠骨髓细胞PLZF表

7、达(IF×400)（略）　　2.2PLZFRARαTM发病表现PLZFRARα转基因发病小鼠的症状类似于人类慢性粒细胞白血病(CML)，小鼠一般在出生后6~12mo发病.PLZFRARα发病小鼠与同窝阴性鼠相比，明显消瘦、不活泼、弓背、翘毛、四肢苍白，皮肤黏膜有时破溃出血，不经治疗自然病程一般为1~2mo.发病鼠外周血白细胞升高，粒细胞与淋巴细胞比例显著增加，一般均达到或超过1∶1（正常小鼠外周血粒淋比为0.13±0.04）；骨髓细胞粒系百分比增高，幼稚细胞比例高于正常值，原粒＋早幼粒细胞比例大于10%但小于20%，淋系、红系细胞比例明显降低；病理检查

8、发现，发病鼠骨髓腔隙缩小，骨小梁间脂肪组织消失，造血