慢病毒介导shrna沉默hdac1表达对ec109细胞生长特性的影响

《慢病毒介导shrna沉默hdac1表达对ec109细胞生长特性的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、慢病毒介导shRNA沉默HDAC1表达对EC109细胞生长特性的影响[基金项目]国家自然科学基金(81050028),SupportedbygrantfromtheNationalNaturalScienceFoundationofChina.第一作者:刘洋博(1987-)，男，硕士研究生，主要从事食管癌放疗研究，E-mail：85768461@qq.com通讯作者：庞学利(1961-)，男，医学博士，教授，第三军医大学西南医院肿瘤科，主要从事食管癌放疗研究。电话：023-68752186；E-mail:pangxueli79@gmail.com刘洋博1，何刚2，章波2

2、，庞学利11400037重庆第三军医大学西南医院肿瘤科2400038重庆第三军医大学基础医学院医学遗传学教研室[摘要]目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术，有效沉默食管癌细胞株EC109的HDAC1表达并观察其对细胞生长的影响。方法以HDAC1为靶基因，合成寡核苷酸，退火形成双链DNA，与经AgeI和EcoRI酶切后的pGCSIL-PUR载体连接获得重组慢病毒载体；将其与病毒复制包装质粒共感染293T细胞，收集并浓缩上清液获得重组病毒，测定病毒滴度；病毒颗粒转染EC109细胞，通过荧光显微镜等观察转染效率并经有限稀释法获得单克隆来源的细胞系；定量PCR及Westernbl

3、ot检测HDAC1的表达；并观察EC109细胞的生长特性。结果成功构建干扰HDAC1表达的慢病毒载体pGCSIL-SiHDAC1，并在293T细胞中包装获得病毒。重组病毒感染EC109细胞后，mRNA和蛋白水平检测显示干扰组细胞的HDAC的表达水平较对照组显著降低。HADC1下调的EC109细胞的增殖能力明显下降。结论慢病毒介导的shRNA能有效的沉默食管癌细胞EC109中的HDAC1的表达，并且能抑制其细胞的增殖。[关键词]:HDAC1；慢病毒；食管癌细胞；细胞生长[中图法分类号]：R725[文献标志码]AEffectsofHDAC1knockdownoncellgr

4、owthinesophagealcancercelllineEC109LiuYangbo1,HeGang2,ZhangBo2,PangXueli11DepartmentofOncology,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,China2DepartmentofMedicalGenetics,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,ChinaAbstract:ObjectiveToknockdownthegeneexpressionofHDAC1i

5、nhumanesophagealcancercelllineEC109.MethodsSynthesizedoligonucleotidewasclonedintolentivirusvectorpGCSIL-PURdigestedwithAgeIandEcoRI,whichwasfurtherscreenedbyPCRandverifiedbysequencing.Recombinantvectorwastransfectedintopackagecells293Twithhelpervectors.Recombinantlentivirusanditscontrol

6、wereextractedfromcellcultureandwereusedtoinfectEC109cells.IndividualcellclonewaspickedupanditsgeneexpressionofHDAC1wasdeterminedbyrealtimePCRandwesternblot.Finally,CellgrowthandcellcycledistributionweredetectedbyCCK-8andFACS,respectively.ResultsRecombinantvectorwassuccessfullyconstructed

7、,andsufficientlentiviruswasobtainedfrompackagecells,whichcanefficientlyinfectEC109cells.TwocloneswerepickedupfromEC109cellsinfectedwithrecombinantvirus.ResultsofrealtimePCRandwesternblotshowedHDAC1genewasefficientlyknockdowninEC109cells,whosecellgrowthandcellcycledistribu